王怡琴，謝學(xué)輝，鄭秀林，張慶云，從軍灝，劉 娜， 柳建設(shè)

(1.東華大學(xué) a. 環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院；b. 國(guó)家環(huán)境保護(hù)紡織工業(yè)污染防治工程技術(shù)中心，上海 201620；2. 上海污染控制與生態(tài)安全研究院， 上海 200092；3. 宿州學(xué)院 環(huán)境與測(cè)繪工程學(xué)院，安徽 宿州234000)

印染廢水具有穩(wěn)定性、生物毒性和難降解性等特點(diǎn)，被公認(rèn)為難處理的廢水之一[1]。許多染料及其中間產(chǎn)物具有致癌、致畸、致突變性，能夠破壞水生環(huán)境的生態(tài)平衡，威脅人類的健康[2]。因此，如何高效處理染料廢水成為促進(jìn)印染行業(yè)可持續(xù)發(fā)展的艱巨任務(wù)之一。目前，為減少染料廢水的有機(jī)負(fù)荷，國(guó)際上常用物理法、化學(xué)法、生物法處理廢水[3-4]。其中，生物法具有成本低、經(jīng)濟(jì)和環(huán)境效益良好等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用[5-6]。

目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)偶氮染料生物處理的研究較為廣泛，而對(duì)蒽醌染料生物處理的研究較少。活性艷藍(lán)19(reactive brilliant blue 19，RB19)為典型的蒽醌結(jié)構(gòu)染料，具有抗化學(xué)氧化的作用，因此在印染廢水中長(zhǎng)期穩(wěn)定地存在，且被生物降解的效率普遍較低[7]。如：Rybczyriska等[8]的研究中，在加入碳源的情況下，菌株Haematonectria haematococca BwⅢ43和K37對(duì)蒽醌染料茜素蘭B第14天脫色率分別僅為59%和57%；Holkar等[9]的研究結(jié)果顯示，當(dāng)葡萄糖質(zhì)量濃度為6 g/L時(shí)，菌株Enterobacter sp. F 對(duì)蒽醌染料RB19的脫色率達(dá)到最大(但脫色速率實(shí)際上僅為0.08 mg/h)。由此可見，蒽醌染料生物處理法的效率還有待提升。

激活劑作為一種可以增加酶活性、提高酶促反應(yīng)速率的物質(zhì)，在生物處理法中得到了越來越廣泛的應(yīng)用[10-11]。由于常規(guī)生物法處理效率較低，因此研究添加激活劑以提高印染廢水生物處理效率具有重要意義。例如，金屬鹽、氧化還原介質(zhì)和共代謝基質(zhì)的加入能提高微生物的降解脫色能力[12-14]。有研究[15-16]指出氧化還原介體通常作為電子供體或直接增加微生物活性，以提高其脫色率，還有研究者[17]指出染料的脫色率由共代謝基質(zhì)的有效性和類型決定。目前，研究者更多地關(guān)注單一激活劑對(duì)菌株脫色降解染料的促進(jìn)作用，而復(fù)合激活劑對(duì)混合菌群的促進(jìn)作用研究甚少，且對(duì)添加激活物質(zhì)以激活功能微生物的研究大多處于宏觀層面。因此，研究復(fù)合激活劑在混合菌群生物處理中的作用，并探究其作用的生物學(xué)機(jī)理顯得尤為重要。本課題組前期研究[18]發(fā)現(xiàn)茶葉渣可作為一種激活物質(zhì)促進(jìn)混合菌群對(duì)RB19的降解，并提取茶葉渣中的主要成分制成一種復(fù)合激活劑。本研究通過傅里葉變換紅外光譜(FTIR)及液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS)對(duì)激活劑作用下降解產(chǎn)物進(jìn)行分析，并通過高通量測(cè)序和非標(biāo)及定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析對(duì)激活劑作用的生物學(xué)機(jī)理進(jìn)行深入研究，在印染廢水生物處理中具有重要意義。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)選用的染料為SIGMA-ALOR-ICH公司生產(chǎn)的蒽醌染料RB19。培養(yǎng)基包含無水硫酸鈉為0.5 g/L，氯化銨為0.2 g/L，磷酸二氫鉀為2.66 g/L，酵母提取物為3 g/L。培養(yǎng)基均在121 °C滅菌20 min后冷卻備用。復(fù)合激活劑包含表沒食子兒茶素沒食子酸酯質(zhì)量濃度為 2.5 g/L，茶氨酸質(zhì)量濃度為2.5 g/L，抗壞血酸質(zhì)量濃度為6.5 g/L，H3BO3質(zhì)量濃度為6.5 g/L，F(xiàn)eCl3質(zhì)量濃度為4.5 g/L，MgCl2質(zhì)量濃度為0.05 g/L。

本試驗(yàn)中使用的兩種混合菌群分別為DDMY1和DDMY2[18]，均為本實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期馴化保存的菌種。其中，菌群DDMY1一直以來只用RB19進(jìn)行培養(yǎng)馴化，而菌群DDMY2長(zhǎng)期使用RB19和質(zhì)量濃度為3 g/L的茶葉渣共同培養(yǎng)馴化。研究前期發(fā)現(xiàn)，混合菌群DDMY2的脫色效果優(yōu)于DDMY1的脫色效果，由此推測(cè)是由茶葉渣的激活作用導(dǎo)致的。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 分光光度法測(cè)定脫色率

取2 mL脫色液，在8 000 r/min下離心10 min，取上清液在特定波長(zhǎng)(597 nm)處的吸光值，根據(jù)波長(zhǎng)597 nm處吸光值的變化計(jì)算脫色率。

(1)

式中：A0為脫色前597 nm 的吸光度值；At為脫色后597 nm 的吸光度值。

1.2.2 復(fù)合激活劑對(duì)混合菌群DDMY1、DDMY2脫色RB19的影響

文獻(xiàn)[19]研究發(fā)現(xiàn)龍井茶葉渣對(duì)RB19的降解有促進(jìn)作用，但茶葉渣對(duì)菌群的促進(jìn)效果受茶葉渣曬制時(shí)間、溫度等外界因素與茶葉購(gòu)買批次影響，因此希望通過模擬茶葉渣中的關(guān)鍵成分研制一種穩(wěn)定的復(fù)合激活劑。選用兩種不同的混合菌群DDMY1、DDMY2進(jìn)行對(duì)比，其中一組試驗(yàn)組不添加復(fù)合激活劑(試驗(yàn)組DDMY1和DDMY2)，另一組(試驗(yàn)組DDMY1+A和DDMY2+A)添加激活劑的接種量的體積分?jǐn)?shù)為0.1%。將每個(gè)試驗(yàn)組做3個(gè)平行樣，在37 ℃的條件下靜置培養(yǎng)。菌液按體積分?jǐn)?shù)為10%的量接種于100 mL錐形瓶中(含45 mL培養(yǎng)基)，其中每個(gè)錐形瓶RB19質(zhì)量濃度為200 mg/L。分別在培養(yǎng)過程中的0、24、36、48、60、72 h取2 mL脫色液，在8 000 r/min速度下離心10 min，用分光光度法測(cè)定脫色率。

1.2.3 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析

將均添加復(fù)合激活劑的混合菌群DDMY1和DDMY2置于培養(yǎng)基中脫色質(zhì)量濃度為200 mg/L的RB19，靜置恒溫培養(yǎng)72 h。取100 mL脫色液，8 000 r/min速度下離心10 min并保留上清液，將上清液用蒸餾水稀釋至400 mL置于燒杯中。隨后，每個(gè)試驗(yàn)組取2個(gè)1 kD透析袋，分別裝50 mL蒸餾水和甲醇，兩端封口置于燒杯中攪拌透析24 h。透析后將2個(gè)透析袋中的液體混合均勻，取2 mL透析液在12 000 r/min速度下離心10 min，并用0.22 μm水相針式濾器將上清液過濾，最后將過濾后的樣品轉(zhuǎn)移至2 mL色譜進(jìn)樣瓶中，用Agilent QTOF6520型液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)樣品進(jìn)行分析。

色譜條件為采用Agilent zorbax 300Extend-C18 4.6 mm×150 mm的色譜柱，柱填料粒徑為3.5 μm。二元流動(dòng)相為A相——含濃度為20 mmol/L醋酸銨的超純水，B相——含濃度為20 mmol/L醋酸銨的甲醇。質(zhì)譜條件為0.276 MPa噴霧器壓力，干燥氣為350 ℃氮?dú)?，流速? L/min。

1.2.4 高通量測(cè)序

根據(jù)文獻(xiàn)[20]利用高通量測(cè)序?qū)?種不同樣品的菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。試驗(yàn)中所測(cè)得的16 SrDNA基因序列已保存在NCBI GenBank中，并獲得序列登錄號(hào)為SRP193910。

1.2.5 蛋白質(zhì)組學(xué)分析

非標(biāo)記定量技術(shù)用于比較樣品不經(jīng)過任何標(biāo)記，直接酶解后經(jīng)過質(zhì)譜分析產(chǎn)生數(shù)據(jù)。通過Thermo Xcalibur 4.0軟件對(duì)譜圖進(jìn)行歸一化后，比較對(duì)應(yīng)質(zhì)譜峰的強(qiáng)度、峰面積等一系列因素，以此來確定蛋白質(zhì)在4組樣本中的相對(duì)表達(dá)量變化。

2 結(jié)果與討論

2.1 復(fù)合激活劑對(duì)混合菌群DDMY1、DDMY2脫色RB19的影響

復(fù)合激活劑對(duì)混合菌DDMY1、DDMY2脫色RB19的影響，如圖1所示。

圖1 復(fù)合激活劑對(duì)DDMY1、DDMY2脫色RB19效果影響Fig.1 Effect of complex activator on decolorization of RB19 by bacterial consortia DDMY1 and DDMY2

由圖1可知，復(fù)合激活劑的加入能顯著提高菌群DDMY1對(duì) RB19的脫色率。試驗(yàn)組DDMY1+A在72 h的脫色率為77.81%，比樣品DDMY1(70.57%)高7.24%。而在相同時(shí)間內(nèi)，DDMY2+A的脫色率為85.16%，僅比DDMY2(83.39%)高1.77%。與DDMY1相比，復(fù)合激活劑的加入并不能顯著促進(jìn)DDMY2對(duì)RB19的降解，但DDMY2、DDMY2+A的脫色率整體高于DDMY1、DDMY1+A。這是由于復(fù)合激活劑的配方是模擬茶葉渣中的主要成分制成的，所以復(fù)合激活劑的加入對(duì)于經(jīng)過茶葉渣馴化的菌群(DDMY2)影響較小；此外，復(fù)合激活劑加入對(duì)未經(jīng)過茶葉渣馴化的普通菌種(DDMY1)脫色降解RB19有很大的促進(jìn)作用。相較于文獻(xiàn)[8]的研究，額外加入干酪素水解物菌株Haematonectria haematococca BwⅢ43和K37對(duì)蒽醌染料茜素蘭B脫色率達(dá)到80%～90%需要7 d。而本試驗(yàn)中，復(fù)合激活劑的加入能夠使菌群在短時(shí)間內(nèi)對(duì)RB19有較好的脫色降解效果。由此表明，這類復(fù)合激活劑在實(shí)際印染廢水處理中具有重要意義。

2.2 復(fù)合激活劑誘導(dǎo)下混合菌群對(duì)RB19的降解產(chǎn)物分析

使用LC-MS分析了激活劑誘導(dǎo)混合菌群DDMY1脫色RB19的降解產(chǎn)物。將初始未降解的RB19作為對(duì)照組，在正離子模式下觀察到m∶z為625的母離子峰。經(jīng)過72 h的脫色降解，母離子峰逐漸消失，且激活劑誘導(dǎo)下混合菌群DDMY1對(duì)RB19的降解產(chǎn)物在正離子模式下發(fā)現(xiàn)3個(gè)新的離子峰，m∶z分別為197、167、181，對(duì)應(yīng)的降解產(chǎn)物分別為3，6-二氨基苯二甲酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸鈉。激活劑誘導(dǎo)下混合菌群DDMY2對(duì)RB19的降解產(chǎn)物在正離子模式下也發(fā)現(xiàn)3個(gè)新的離子峰，m∶z分別為197、167、158，對(duì)應(yīng)的降解產(chǎn)物分別為3，6-二氨基苯二甲酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸。根據(jù)LC-MS測(cè)定的降解產(chǎn)物并結(jié)合文獻(xiàn)[21-24]中的試驗(yàn)結(jié)果，本試驗(yàn)推測(cè)了兩種不同混合菌群降解RB19的分子轉(zhuǎn)化途徑，如圖2和3所示。RB19在降解的過程中蒽醌環(huán)結(jié)構(gòu)被打開，降解為小分子的芳香族化合物。因此，在激活劑作用下兩種混合菌群能夠?qū)崿F(xiàn)染料的脫色，并將大分子有機(jī)物轉(zhuǎn)變?yōu)樾》肿佑袡C(jī)物，無法完全礦化，且降解產(chǎn)物仍有一定毒性[25-26]，需后續(xù)進(jìn)一步處理。但這類方法仍不失為一種高效且成本低廉的染料預(yù)處理方法。

圖2 激活劑誘導(dǎo)下混合菌群DDMY1降解RB19分子轉(zhuǎn)化途徑Fig.2 Molecular transformation pathway of RB19 degraded by bacterial consortium DDMY1 induced by activator

圖3 激活劑誘導(dǎo)下混合菌群DDMY2降解RB19分子轉(zhuǎn)化途徑Fig.3 Molecular transformation pathway of RB19 degraded by bacterial consortium DDMY2 induced by activator

2.3 復(fù)合激活劑對(duì)混合菌群結(jié)構(gòu)的影響

為進(jìn)一步研究復(fù)合激活劑對(duì)混合菌群DDMY1、DDMY2群落結(jié)構(gòu)的影響，使用RDP(ribosomal database project)分類器將序列標(biāo)簽分配到不同的分類水平，如圖4所示。

由圖4(a)可知，在門水平上8個(gè)樣品具有高度的相似性，但菌種豐度不同。變形菌門、厚壁菌門和擬桿菌門為3種主要的菌門，占每個(gè)樣品中所有菌種的99%以上。其中，變形菌門在所有樣品中占比最高，這說明變形菌門為RB19脫色系統(tǒng)中主要的菌門。文獻(xiàn)[27]研究發(fā)現(xiàn)變形菌門在其他廢水處理系統(tǒng)中占主導(dǎo)地位。文獻(xiàn)[28-29]在染料廢水處理中發(fā)現(xiàn)，擬桿菌門的菌種可以適應(yīng)復(fù)雜的環(huán)境并分泌各種氧化還原酶。與樣品DDMY1-初始、DDMY1馴化6個(gè)月相比，樣品DDMY1+A、DDMY1+A 馴化6個(gè)月中變形菌門的含量分別多了6.00%和14.02%，而擬桿菌門的含量分別少了6.18%和16.21%。此外，樣品DDMY2-初始、DDMY2馴化6個(gè)月、DDMY2+A 和 DDMY2+A馴化6個(gè)月中變形菌門、厚壁菌門和擬桿菌門比例具有更高的相似性。上述結(jié)果說明，復(fù)合激活劑的添加可以顯著改變普通菌群(如本試驗(yàn)中的試驗(yàn)組DDMY1)的菌群結(jié)構(gòu)，且能夠增加在RB19脫色降解過程中發(fā)揮重要作用的變形菌門含量。同時(shí)，添加復(fù)合激活劑至試驗(yàn)組DDMY2中并沒有顯著改變其菌群結(jié)構(gòu)，說明混合菌群DDMY2具有更加穩(wěn)定的菌群結(jié)構(gòu)，且不易受外界因素影響。由圖4(b)可知，在綱水平上樣品DDMY1-初始和DDMY1馴化6個(gè)月中γ-變形菌綱和β-變形菌綱的含量顯著增加，而黃桿菌綱含量顯著下降，其中γ-變形菌綱在所有樣品中均為最主要的綱。γ-變形菌綱為革蘭氏陰性菌，被發(fā)現(xiàn)廣泛存在于染料廢水處理系統(tǒng)中[30-31]。由圖4還可以發(fā)現(xiàn)，樣品DDMY2-初始、DDMY2馴化6個(gè)月、DDMY2+A 和DDMY2+A 馴化6個(gè)月中均存在擬桿菌綱，而在試驗(yàn)組DDMY1-初始中未檢測(cè)到擬桿菌綱。由此可以推測(cè)，加入復(fù)合激活劑能夠富集γ-變形菌綱和擬桿菌綱這類脫色RB19的優(yōu)勢(shì)菌綱。

(a) 門水平

2.4 復(fù)合激活劑誘導(dǎo)混合菌群降解RB19的蛋白質(zhì)組學(xué)分析

2.4.1 肽段與蛋白質(zhì)鑒定、定量結(jié)果評(píng)估

本試驗(yàn)采用串聯(lián)質(zhì)譜儀thermo scientific q-exactive進(jìn)行檢測(cè)。圖5(a)為鑒定蛋白信息統(tǒng)計(jì)圖。在4個(gè)樣品中共檢測(cè)到480 207個(gè)二級(jí)譜圖，匹配了160 705個(gè)肽段，鑒定了16 754個(gè)肽段序列和5 355個(gè)蛋白質(zhì)組。圖5(b)為鑒定肽段序列長(zhǎng)度分布圖，大部分肽段所含氨基酸的個(gè)數(shù)為9～21個(gè)，其中含有11、12個(gè)氨基酸的肽段最多。圖5(c)為肽段數(shù)量分布圖，顯示了鑒定到的蛋白所含肽段的數(shù)量分布情況。由圖5(c)可知，蛋白質(zhì)數(shù)量隨著肽段數(shù)量的增加而減少，73%左右的蛋白質(zhì)最多含有4個(gè)肽段。圖5(d)顯示蛋白質(zhì)分子量，其中蛋白質(zhì)分子量多數(shù)為11～20 kDa，約占蛋白質(zhì)總量的22%，且80%左右的蛋白質(zhì)分子量處于11～60 kDa。

(a) 蛋白信息統(tǒng)計(jì)圖

2.4.2 激活劑誘導(dǎo)的蛋白差異表達(dá)

表1為分組樣品DDMY1vs DDMY1+A、DDMY2 vs DDMY2+A的差異蛋白數(shù)量，顯著差異表達(dá)蛋白的篩選標(biāo)準(zhǔn)為差異顯著性P<0.05和兩樣品間表達(dá)量的比值FC<0.83或FC>1.20。由表1可知，激活劑的加入會(huì)顯著影響兩種混合菌群功能蛋白的差異表達(dá)，且與DDMY2對(duì)比 DDMY2+A比較，DDMY1對(duì)比 DDMY1+A差異蛋白的數(shù)量有所增加，說明激活劑對(duì)混合菌群DDMY1功能蛋白表達(dá)的促進(jìn)作用強(qiáng)于其對(duì)混合菌群DDMY2。

表1 分組樣品中不同表達(dá)蛋白的數(shù)量(P<0.05 & FC<0.83或FC>1.20)Table 1 Number of differently expressed proteins in different samples (P<0.05 & FC<0.83 or FC>1.20)

2.4.3 激活劑誘導(dǎo)差異表達(dá)蛋白的功能分析

利用基因本體論對(duì)不同組樣品進(jìn)行注釋分析，其中，BP(biological process)為生物過程，CC(cellular component)為細(xì)胞組分，MF(molecular function)為分子功能。圖6對(duì)不同分組對(duì)比的上調(diào)差異蛋白進(jìn)行了功能注釋分析。相同的蛋白質(zhì)可能參與不同的生物過程，成為不同的細(xì)胞組分以及具有不同的分子功能。

圖6(a)顯示了DDMY1+A相較于DDMY1，前者參與生物過程的上調(diào)蛋白為2 521個(gè)，其中約有70%的上調(diào)蛋白參與了細(xì)胞過程和代謝過程。在細(xì)胞組分分類中上調(diào)蛋白的數(shù)量為1 983個(gè)，其中，膜類別和細(xì)胞部分類別蛋白含量較多，其次為膜部分類別和蛋白質(zhì)復(fù)合物類別。分子功能中上調(diào)蛋白數(shù)量為2 674個(gè)，其中多數(shù)具有催化活性和結(jié)合分子功能，占上調(diào)蛋白的78%，其次為結(jié)構(gòu)分子活性和轉(zhuǎn)運(yùn)功能。

圖6(b)顯示了相較于DDMY2，DDMY2+A參與生物過程的上調(diào)蛋白數(shù)量為2 227個(gè)，約有68%的上調(diào)蛋白參與了細(xì)胞過程和代謝過程。在細(xì)胞組分分類中上調(diào)蛋白數(shù)量為1 809個(gè)，其中，細(xì)胞部分類別和膜類別蛋白含量較多，其次為膜部分類別和蛋白質(zhì)復(fù)合物類別。分子功能中上調(diào)蛋白的數(shù)量為1 950個(gè)，約有77%具有催化活性和結(jié)合分子功能，其次為結(jié)構(gòu)分子活性和轉(zhuǎn)運(yùn)功能。

圖6 在激活劑誘導(dǎo)下不同混合菌群上調(diào)差異蛋白的基因本體論分析Fig.6 Gene ontology analysis of up-regulated differential proteins in different bacterial consortia induced by activators

2.4.4 差異表達(dá)蛋白KEGG通路分析

在生物體內(nèi)，基因產(chǎn)物并不是孤立存在作用的，不同基因產(chǎn)物之間通過有序地相互協(xié)調(diào)來行使具體的生物學(xué)功能。為從系統(tǒng)水平了解差異蛋白的生物學(xué)功能，對(duì)鑒定的差異蛋白KEGG通路進(jìn)行注釋。圖7顯示了兩項(xiàng)分組樣品DDMY1 vs DDMY1+A、DDMY2 vs DDMY2+A差異蛋白前30條注釋結(jié)果。在激活劑誘導(dǎo)下兩種不同混合菌群DDMY1、DDMY2差異蛋白參與的KEGG通路最主要為代謝途徑、次生代謝產(chǎn)物的生物合成、抗生素的生物合成、碳代謝。分組樣品DDMY1 對(duì)比DDMY1+A與分組樣品DDMY2對(duì)比DDMY2+A的KEGG通路基本相同，說明激活劑對(duì)兩種不同混合菌群差異蛋白表達(dá)的作用類似。除了上述的通路外，苯甲酸的降解途徑也得到了豐富，且苯甲酸酯降解的代謝產(chǎn)物被認(rèn)為可用于脂肪酸、氨基酸代謝等富集途徑[33]。上述LC-MS試驗(yàn)中已檢測(cè)到降解中間體及產(chǎn)物中存在苯甲酸類物質(zhì)。因此，推測(cè)RB19被先降解為苯甲酸酯，隨后進(jìn)一步進(jìn)行糖酵解、檸檬酸循環(huán)等[34]。與分組樣品DDMY2對(duì)比DDMY2+A相比，分組樣品DDMY1對(duì)比DDMY1+A中前30組代謝途徑中活躍的差異蛋白均更加豐富，說明激活劑對(duì)混合菌群DDMY1的影響大于其對(duì)混合菌群DDMY2的影響的促進(jìn)作用。

圖7 在激活劑誘導(dǎo)下不同混合菌群差異蛋白的KEGG通路Fig.7 KEGG pathway of differential proteins of different bacterial consortia induced by activator

3 結(jié) 論

(1) 本文以混合菌群DDMY1、DDMY2為對(duì)象，研究了激活劑對(duì)兩種混合菌群的促進(jìn)作用，結(jié)果表明復(fù)合激活劑的加入對(duì)DDMY1的促進(jìn)作用優(yōu)于其對(duì)DDMY2的作用。

(2) 由LC-MS測(cè)定結(jié)果可知，在激活劑誘導(dǎo)下混合菌群DDMY1對(duì)RB19的降解產(chǎn)物主要為3，6-二氨基苯二甲酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸鈉，而在激活劑誘導(dǎo)下混合菌群DDMY2對(duì)RB19的降解產(chǎn)物分別為3，6-二氨基苯二甲酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸。

(3) 高通量測(cè)序結(jié)果表明激活劑可簡(jiǎn)化群落結(jié)構(gòu)，且能夠富集腸桿菌屬，這可能是增強(qiáng)混合菌群對(duì)RB19脫色降解的原因。從生物過程角度分析，兩組分組樣品DDMY1 vs DDMY1+A、DDMY2 vs DDMY2+A的上調(diào)蛋白均大部分參與了細(xì)胞過程和代謝過程。在細(xì)胞組分分類中，激活劑對(duì)菌群DDMY1在差異蛋白表達(dá)上影響更大。分組樣品大多數(shù)的上調(diào)蛋白均與催化活性、結(jié)合分子功能相關(guān)。在激活劑誘導(dǎo)下兩種不同菌群DDMY1、DDMY2差異蛋白參與的KEGG通路前4條為代謝途徑、次生代謝產(chǎn)物的生物合成、抗生素的生物合成、碳代謝，同時(shí)，苯甲酸的降解途徑也得到了證實(shí)。