張沙沙，張微思，趙梓圳，劉興意，羅曉莉**

（1.中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所，云南 昆明 650223；2.西南大學(xué)藥學(xué)院，重慶 400716）

疲勞是指機(jī)體不能將其各器官維持在預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度，或者機(jī)體的機(jī)能不能一直維持在一個(gè)特定的水平，是一種復(fù)雜的生理生化過程。運(yùn)動(dòng)性疲勞是指由于運(yùn)動(dòng)所引起的機(jī)體的生理生化發(fā)生改變，從而導(dǎo)致其運(yùn)動(dòng)能力受限或暫時(shí)降低的現(xiàn)象[1-2]。適度的疲勞恢復(fù)后可提高人體機(jī)能，但過度運(yùn)動(dòng)性疲勞不僅對人體無益，還有可能造成運(yùn)動(dòng)損傷[3-5]。引起運(yùn)動(dòng)性疲勞的原因主要是能源物質(zhì)過度消耗以及疲勞物質(zhì)在體內(nèi)堆積，如糖原過度消耗導(dǎo)致血糖下降，蛋白質(zhì)分解的乳酸等物質(zhì)大量留存在體內(nèi)，從而造成滲透壓不平衡，酸堿失衡，水平衡、離子分布等失調(diào)[5-7]?？蛊诘哪康木褪且泳徠诘漠a(chǎn)生和加速疲勞的消除[7]。

金耳 （Tremella aurantialba Bandoni et Zang） 和銀耳（Tremella fuciformis Berk.）同為銀耳綱（Tremellomycetes） 銀耳目 （Tremellales） 銀耳科（Tremellaceae） 銀耳屬（Tremella） 真菌，均含有豐富的蛋白質(zhì)、多種氨基酸、多種礦物質(zhì)、生物活性物質(zhì)及維生素[8-9]。金耳、銀耳均是食藥兼用菌，具有益氣、滋陰潤肺、止咳、化痰、定喘、生津、安神健腦等功效，被視為“補(bǔ)益身心、延年益壽”的珍品，具有較高的滋補(bǔ)營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，深受廣大消費(fèi)者喜愛[9-15]。

目前市場上的金耳、銀耳多為干制品，消費(fèi)者購買后，按照傳統(tǒng)的食用習(xí)慣，一般都需經(jīng)過較長時(shí)間的浸泡、燉制、熬煮等工序才能食用，不能滿足現(xiàn)代社會(huì)人們生活節(jié)奏加快對快捷制品的需求。近年來，固體湯料因攜帶方便、風(fēng)味獨(dú)特而備受青睞，以金耳、銀耳為主要原料開發(fā)出一種營養(yǎng)豐富、功能成分含量高、功效突出的雙耳固體湯前景廣闊。為研究雙耳固體湯的抗運(yùn)動(dòng)性疲勞功效，利用小鼠進(jìn)行試驗(yàn)，旨在證明雙耳固體湯是一種理想的營養(yǎng)補(bǔ)充劑。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 主要試驗(yàn)材料、試劑

健康昆明種小鼠，體重18 g～22 g，雌雄各半，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。金耳、銀耳、冰糖、紅棗、麥芽糊精等購于昆明干品批發(fā)市場。

紅景天膠囊（批號：G20100243），北京同仁堂健康藥業(yè)股份有限公司；乳酸脫氫酶活力測定試劑盒，北京金艮生物科技有限公司；乳酸檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所；血清尿素氮含量測定試劑盒，北京金克隆生物技術(shù)有限公司；肝糖原含量檢測試劑盒，上海貝博生物科技有限公司。

1.1.2 主要儀器設(shè)備

高速離心機(jī)，美國Thermo Fisher有限公司；純水儀，美國Millipore公司；電熱恒溫水浴鍋，北京市長風(fēng)儀器儀表公司；全波長酶標(biāo)儀，美國BioTek有限公司；電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；制冰機(jī)，上海政泓實(shí)業(yè)有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 雙耳固體湯的制備

選用優(yōu)質(zhì)金耳和銀耳按質(zhì)量比為2∶1的比例混合后，加1.5倍水，放超聲波處理器中處理30 min，將超聲波處理后的混合液大火煮沸后，改文火熬制，再加入冰糖（25%） 和去皮去核紅棗（10%），繼續(xù)文火熬制至稠狀拉絲，待冷卻后放入打漿機(jī)中，加入麥芽糊精（14%），反復(fù)打漿3次，每次1 min，使混合液均勻，然后干燥，打粉過篩，備用。

1.2.2 雙耳固體湯混懸液的配制

將雙耳固體湯粉稱量后，加入生理鹽水充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，灌胃小鼠?/p>

1.2.3 紅景天混懸液的配制

取出紅景天膠囊劑的內(nèi)含粉末，稱量后加入生理鹽水并攪拌至均勻懸液后，灌胃小鼠。

1.2.4 試驗(yàn)方案

小鼠隨機(jī)分為空白對照組、陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組。根據(jù)參考文獻(xiàn)[16-19]和前期試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)置雙耳湯低劑量組劑量為12.5 mg·kg-1d-1、中劑量組劑量為 25 mg·kg-1d-1、高劑量組劑量為50 mg·kg-1d-1，進(jìn)行灌胃，同時(shí)設(shè)空白對照組（生理鹽水） 和陽性對照組（紅景天溶液6.6 mg·kg-1d-1），連續(xù)灌胃7 d。

1.2.5 飼料消耗情況

每日灌胃前，將每組小鼠給予的飼料量和剩余的飼料量進(jìn)行稱重。每只小鼠當(dāng)日飼料消耗量（q，g） 計(jì)算公式為：

式中：m為投放飼料重量（g）；m0為隔日剩余飼料重量（g）；n為該組小鼠數(shù)目（只）。

1.2.6 小鼠體重測定

試驗(yàn)期間每天早上8點(diǎn)灌胃前對每只小鼠稱重并記錄。

1.2.7 小鼠力竭游泳時(shí)間

對連續(xù)灌胃7 d后的小鼠進(jìn)行游泳耐力試驗(yàn)。在小鼠尾根部負(fù)荷8%體重的重物，置于游泳箱中，水深30 cm左右（保證尾部不接觸水箱底部），水溫（25±1）℃，使小鼠四肢保持運(yùn)動(dòng)，游泳至力竭。記錄小鼠自游泳開始至口鼻沒入水面8 s不能游回水面的時(shí)間，即小鼠游泳力竭游泳時(shí)間。

1.2.8 生化指標(biāo)檢測

1）肝臟指數(shù)的測定。連續(xù)灌胃7 d后，稱重，處死小鼠，取出肝臟，將分離的小鼠肝臟用生理鹽水沖洗，用濾紙吸去表面水分，稱重，肝臟指數(shù)（LI）計(jì)算公式[20]為：

式中：M2為小鼠肝臟重量（g）；M1為小鼠體重（g）。

2） 乳酸、尿素氮等指標(biāo)的測定。游泳耐力試驗(yàn)后小鼠休息30 min，使用摘眼球法取血，室溫（16±1） ℃靜置約30 min待血液完全凝固，3 000 r·min-1離心10 min，取血清備用。分別測定血清中的乳酸LD（lactic acid,LD）、尿素氮 BUN（blood urea nitrogen,BUN）、肝糖原含量及乳酸脫氫酶LDH（lactate dehydragenase,LDH） 活力。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 21軟件，進(jìn)行方差分析，數(shù)據(jù)均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01表示極顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 雙耳固體湯對小鼠飼料消耗量的影響

通過分析試驗(yàn)期間小鼠的飼料消耗量，可了解小鼠的食欲情況、有無疾病和中毒現(xiàn)象，以及對小鼠生長發(fā)育有無影響。在7 d的喂養(yǎng)過程中，雙耳固體湯低劑量組、中劑量組、高劑量組及陽性對照組小鼠平均每日的飼料消耗量分別為（4.38±0.37）g、（4.70 ± 0.42）g、（4.67 ± 0.43）g、（4.81 ± 0.60）g，與空白對照組（4.07±0.50）g相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.2 雙耳固體湯對小鼠體重的影響

在7 d喂養(yǎng)過程中，未有死亡小鼠，且5組小鼠的活動(dòng)情況和皮毛均未見異常。雙耳固體湯對小鼠體重的影響試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 雙耳固體湯對小鼠體重的影響Tab.1 Effect of Shuang-er solid soup on weight of mice

由表1可以看出，雙耳固體湯3個(gè)劑量組及陽性對照組小鼠體重增加量與空白對照組相比，無顯著性差異，但給藥組小鼠有增重的趨勢。試驗(yàn)中觀察到，給藥組小鼠隨著劑量增加，顯得越發(fā)健壯。

2.3 雙耳固體湯對小鼠肝臟指數(shù)影響

為初步了解雙耳固體湯對小鼠的毒副作用及安全性，對小鼠的肝臟指數(shù)進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。

表2 雙耳固體湯對小鼠肝臟指數(shù)影響Tab.2 Effect of Shuang-er solid soup on LI of mice

如表2所示，雙耳固體湯3個(gè)劑量組及陽性對照組與空白對照組的小鼠肝臟指數(shù)無顯著性差異，且肝臟指數(shù)無上升趨勢，說明雙耳固體湯對試驗(yàn)小鼠的內(nèi)臟無顯著影響，是一種安全食品。

2.4 雙耳固體湯對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

游泳力竭時(shí)間的長短可以反映小鼠的疲勞程度，游泳力竭時(shí)間的延長是抗運(yùn)動(dòng)性疲勞的最直觀效果[21]。雙耳固體湯對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 雙耳固體湯對負(fù)重小鼠游泳時(shí)間的影響Tab.3 Effect of Shuang-er solid soup on swimming time of weight bearing mice

如表3所示，與空白對照組相比，低劑量組小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間沒有顯著性延長，中劑量組、高劑量組和陽性對照組的小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間均有極顯著性延長（P＜0.01），分別延長了98.87%、160.22%、142.73%；高劑量組比陽性對照組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間延長了7.20%，但沒有顯著性差異；隨著雙耳固體湯劑量的增加，小鼠游泳力竭時(shí)間延長。說明服用劑量為 25 mg·kg-1d-1～50 mg·kg-1d-1的雙耳固體湯可以提高小鼠的游泳運(yùn)動(dòng)能力。

2.5 雙耳固體湯對小鼠血清乳酸、乳酸脫氫酶和尿素氮的影響

血乳酸水平可以直接反應(yīng)機(jī)體有氧代謝能力、疲勞產(chǎn)生與清除速度。大量乳酸的積累使pH下降，抑制了促進(jìn)糖酵解和糖原分解的磷酸果糖酶和磷酸化酶的活性，導(dǎo)致能量供應(yīng)減少，是產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)性疲勞的重要原因[22]。雙耳固體湯對小鼠血清乳酸、乳酸脫氫酶和尿素氮的影響試驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4 雙耳固體湯對小鼠血清乳酸、乳酸脫氫酶和尿素氮的影響Tab.4 Effect of Shuang-er solid soup on lactic acid、LDH and BUN of mice

由表4可以看出，中劑量組、高劑量組的小鼠在力竭試驗(yàn)后，血乳酸均低于空白對照組小鼠，說明雙耳固體湯可以提高機(jī)體有氧代謝能力、減少有害代謝產(chǎn)物堆積。與空白對照組相比，低劑量組小鼠血清乳酸含量顯著降低了13.7%（P＜0.05），陽性對照組、中劑量組和高劑量組小鼠的血清乳酸含量極顯著降低 （P＜0.01），分別降低了 27.73%、24.59%、32.10%。

乳酸脫氫酶是參與糖異生工程和糖酵解的主要酶，可催化乳酸和丙酮酸之間氧化還原反應(yīng)[21]。由表4可知，雙耳固體湯3個(gè)劑量組及陽性對照組均極顯著提高了血清LDH活力（P＜0.01），分別提高24.22%、47.68%、58.27%。LDH活力的升高，說明雙耳固體湯可加速小鼠機(jī)體過多乳酸的清除代謝，延緩疲勞產(chǎn)生或加快疲勞的消除。

為提供更多能量，蛋白質(zhì)代謝加速，肝臟中的尿素會(huì)明顯增加，體內(nèi)過量的尿素會(huì)傷害機(jī)體，因此，BUN可以在一定程度上反映機(jī)體的疲勞程度[23]，與疲勞程度呈正相關(guān)，是衡量疲勞狀態(tài)的敏感指標(biāo)之一。由表4可以看出，與空白對照組相比，雙耳固體湯低劑量組小鼠的尿素氮含量沒有顯著降低，雙耳固體湯中劑量組、高劑量組、陽性對照組小鼠的尿素氮含量均極顯著降低（P＜0.01），分別降低了63.61%、71.27%、66.73%，雙耳固體湯高劑量組與陽性對照組相比沒有顯著差異。說明雙耳固體湯在劑量為 25 mg·kg-1d-1～50 mg·kg-1d-1時(shí)，既可以降低小鼠血清乳酸和尿素氮含量，還能加速乳酸的清除，具有顯著的抗運(yùn)動(dòng)性疲勞作用。

2.6 雙耳固體湯對小鼠肝糖原儲(chǔ)備量的影響

當(dāng)機(jī)體長時(shí)間、大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)時(shí)，糖原能為其提供能量，是重要能源物質(zhì)。糖原是生物體內(nèi)能源儲(chǔ)存的重要形式之一。如果糖原被大量消耗，機(jī)體活動(dòng)能力下降，會(huì)發(fā)生全身性疲勞，而糖原儲(chǔ)備的提高可提高機(jī)體的耐力速度，且減少了蛋白質(zhì)和含氮化合物的分解[24]。雙耳固體湯對小鼠肝糖原儲(chǔ)備量的影響試驗(yàn)結(jié)果見表5。

表5 雙耳固體湯對小鼠肝糖原儲(chǔ)備量的影響Tab.5 Effect of Shuang-er solid soup on hepatic glycogen of mice

如表5所示，與空白對照組相比，雙耳固體湯中劑量組、高劑量組、陽性對照組小鼠的肝糖原儲(chǔ)備量均顯著增加 （P＜0.01），分別增加了94.63%、132.36%、124.08%。說明雙耳固體湯在劑量為 25 mg·kg-1d-1～50 mg·kg-1d-1時(shí)能夠增加肝糖原儲(chǔ)備。

3 結(jié)論

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在7 d的喂養(yǎng)過程中，雙耳固體湯試驗(yàn)組小鼠平均每日的飼料消耗情況、體重增加量、肝臟指數(shù)均無顯著差異，說明試驗(yàn)期間小鼠的狀態(tài)良好，灌胃雙耳固體湯對小鼠內(nèi)臟無明顯影響；雙耳固體湯中、高劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間極顯著高于空白對照組（P＜0.01），說明雙耳固體湯能夠延長小鼠運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間，緩解運(yùn)動(dòng)性疲勞的產(chǎn)生。分析原因發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比，雙耳固體湯中劑量、高劑量組小鼠游泳力竭后乳酸脫氫酶活力極顯著性提高（P＜0.01）、肝糖原含量極顯著性增加 （P＜0.01），血清乳酸含量、尿素氮含量均極顯著性降低（P＜0.01），表明雙耳固體湯可有效增加肝糖原的儲(chǔ)備，提供能量，使蛋白質(zhì)分解速度減緩，降低血清乳酸、尿素氮等代謝物質(zhì)的積累，從而減緩運(yùn)動(dòng)性疲勞的發(fā)生，是理想的營養(yǎng)補(bǔ)充劑。