王 明 李永格

癲癇(Epilepsy，EP)是一種長期慢性發(fā)作的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，多發(fā)于5歲以下的幼兒，成年人發(fā)病率比較低[1]。在我國EP發(fā)病率為7‰，現(xiàn)有EP患者約900萬，是僅次于腦血管病之外的第二大神經(jīng)系統(tǒng)疾病[2]。EP通常采取藥物治療，雖然取得明顯效果，但仍有30%～40%的EP患者不能完全治愈，甚至有10%患者發(fā)展為難治性EP[3]，給患者的身心健康帶來嚴重危害。因此，積極開發(fā)治療EP的新藥就顯得非常重要。EP發(fā)病的確切機制不清，其中腦內(nèi)的炎癥反應(yīng)在EP的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用[4]。因此，通過抗炎作用來治療EP，并且減少癲癇的發(fā)作成為一種可能。香菇(Lentinus edodes)為真菌門，子菌綱，藥食兩用。香菇多糖(Lentinan，LNT)為香菇提取物中最重要的一種成分，具有眾多藥用價值，其中包括抗炎作用，但LNT是否對EP具有一定治療作用，國內(nèi)外還未見相關(guān)報道。因此，本研究通過建立EP模型大鼠，LNT干預(yù)治療，從抗炎角度分析其可能機制，以期為臨床上癲癇的治療尋找新的藥物。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物60只SD雄性大鼠購于湖北省醫(yī)學(xué)實驗動物中心，動物合格證號：SCXK(鄂)2018-0005，體質(zhì)量200～300 g。常規(guī)飼養(yǎng)，所有實驗大鼠均適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后開始建模。

1.1.2 實驗藥品和試劑LNT(南京綠葉制藥有限公司，國藥準字H10970108)；匹魯卡品(Sigma公司，批號：20180306)；TNF-α試劑盒、IL-1β試劑盒、IL-6試劑盒皆購自于南京建成生物工程研究所，試劑批號皆為20180924。

1.1.3 實驗設(shè)備WMT-100型Morris水迷宮(四川成都儀器廠)；JC-1089A酶標(biāo)儀(美國Bio-Rad)等。

1.2 方法

1.2.1 動物分組與建模60只大鼠隨機分為對照組、EP模型組、LNT干預(yù)組，每組20只。對照組常規(guī)飼養(yǎng)，不建模；模型組建模，常規(guī)飼養(yǎng)；LNT干預(yù)組在建立EP模型后，采用60 mg/kg LNT灌胃，持續(xù)灌胃30 d。參考古小云等[5]建立氯化鋰-匹魯卡品EP模型。

1.2.2 Morris水迷宮檢測灌胃與常規(guī)飼養(yǎng)30 d后，參考李永格等[6]水迷宮實驗方法，檢測所有大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。

1.2.3 海馬組織TNF-α、IL-6和IL-1β含量測定水迷宮實驗結(jié)束后，斷頭處死大鼠，快速在冰面上剝離海馬組織，制成10%勻漿，離心取上清液，超低溫冰箱保存。參照試劑盒使用說明，采用ELISA法檢測海馬組織中TNF-α、IL-6和IL-1β含量。

2 結(jié)果

2.1 Morris水迷宮實驗結(jié)果

2.1.1 水迷宮定位航行實驗結(jié)果模型組大鼠逃避潛伏期時間明顯長于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而LNT干預(yù)組大鼠逃避潛伏期時間明顯短于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，具體結(jié)果見表1、圖1。

表1 各組大鼠逃避潛伏期時間 (只，

圖1 Morris水迷宮軌跡圖

2.1.2 水迷宮空間探索實驗結(jié)果模型組大鼠平臺象限路徑百分比與平臺象限停留時間明顯短于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而LNT干預(yù)組大鼠平臺象限路徑百分比與平臺象限停留時間明顯長于模型組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義見表2。

表2 各組大鼠空間探索實驗結(jié)果 (例，

2.2 海馬組織TNF-α、IL-6和IL-1β含量測定模型組大鼠海馬組織TNF-α、IL-6和IL-1β含量明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；LNT干預(yù)組大鼠海馬組織TNF-α、IL-6和IL-1β含量明顯低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)見表3。

表3 各組大鼠TNF-α、IL-6和IL-1β含量 (只，

3 討論

EP的連續(xù)發(fā)作會導(dǎo)致神經(jīng)細胞的損傷甚至死亡，從而出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙，甚至影響學(xué)習(xí)記憶水平。Morris水迷宮實驗是目前世界上評估學(xué)習(xí)和記憶功能最客觀的方法，包括定位航行實驗和空間探索實驗。定位航行實驗是通過在圓形水池中尋找固定平臺的方法，尋找平臺的時間即逃避潛伏期，逃避潛伏期時間越短就說明學(xué)習(xí)記憶能力越強，反之越弱?？臻g探索實驗是將平臺拆除后記錄在平臺象限停留的時間以及在此象限游動的距離。停留時間越長、游動距離越遠說明學(xué)習(xí)記憶能力越強，反之越弱。

炎癥反應(yīng)是機體受到損傷后產(chǎn)生的一種自我保護和修復(fù)的作用。研究表面炎癥反應(yīng)在EP的發(fā)生過程中起重要的作用[7]，并且炎癥反應(yīng)與EP的發(fā)作互為因果關(guān)系，一方面炎癥反應(yīng)提高中樞神經(jīng)元的敏感性，導(dǎo)致神經(jīng)元過度興奮，引起EP發(fā)作；另外EP的發(fā)作導(dǎo)致神經(jīng)元損傷，加重神經(jīng)的炎癥反應(yīng)，形成難治性EP的病理基礎(chǔ)[8]。隨著EP研究的深入，炎癥反應(yīng)中的炎癥因子在EP的發(fā)作中具有重要的作用，也成為研究的主要靶點。IL-1β、IL-6、TNF-α是目前研究中最為成熟的炎癥因子，蔡發(fā)良[9]和王勝軍等[10]研究表明IL-1β、IL-6、TNF-α在EP的發(fā)生以及治療中都具有重要作用。LNT為真菌香菇中的提取物，其主要成分為β-葡聚糖，臨床上通常作為治療腫瘤和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的生物調(diào)節(jié)劑[11]，近來研究發(fā)現(xiàn)LNT具有一定的抑制急慢性炎癥的作用[4]，通過本實驗研究發(fā)現(xiàn)與對照組比較，模型組大鼠海馬組織TNF-α、IL-6和IL-1β含量明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，LNT干預(yù)組大鼠海馬組織TNF-α、IL-6和IL-1β含量明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。說明LNT在EP大鼠體內(nèi)同樣具有抗炎作用。

因此，LNT具有提高EP大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的作用，其機制可能是通過抗炎來實現(xiàn)的。