河南省滎陽市疾病預(yù)防控制中心（450100）楊麗娟

水是人體必不可缺的生命之源，有助于保持體溫，改善機(jī)體組織細(xì)胞液，促進(jìn)新陳代謝，然而隨著我國經(jīng)濟(jì)持續(xù)發(fā)展，生活工業(yè)用水大量增加，日常飲用水污染也在不斷加重，嚴(yán)重影響居民生活質(zhì)量[1][2]。過濾、消毒等是既往處理日常生活飲用水中微生物的常用方法，雖能減少水中微生物含量，但由于生活環(huán)境較為復(fù)雜，日常生活飲用水污染現(xiàn)象仍未得到明顯抑制[3]。同時(shí)，有學(xué)者指出，菌落總數(shù)與游離余氯超標(biāo)是居民日常生活飲用水水質(zhì)不合格的原因[4]。因此，為保障日常生活飲用水安全，維護(hù)居民健康，及時(shí)實(shí)施科學(xué)有效的日常生活飲用水檢驗(yàn)方案是重要前提。基于此，本研究隨機(jī)抽取597份居民日常生活飲用水水樣，探討多管發(fā)酵法在微生物檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值，旨在為科學(xué)選取水質(zhì)檢測(cè)方法提供循證指導(dǎo)。具體分析如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2019年10月～2020年4月居民日常生活飲用水水樣597份，所有樣本均嚴(yán)格遵循生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法水樣采集與保存流程進(jìn)行。根據(jù)不同檢驗(yàn)方式分為對(duì)照組（298份）、實(shí)驗(yàn)組（299份），其中對(duì)照組水樣來源：32份出廠水、130份管網(wǎng)末梢水、136份二次供水；實(shí)驗(yàn)組水樣來源34份出廠水、128份管網(wǎng)末梢水、137份二次供水。兩組水樣來源資料均衡可比（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)照組 采用濾膜法檢驗(yàn)。準(zhǔn)備微孔濾膜（0.45μm，購自上海摩速科學(xué)器材有限公司）、試管、顯微鏡、無齒鑷子、不銹鋼手提式滅菌器（購自北京金洋萬達(dá)科技有限公司）、恒溫培養(yǎng)箱（購自上海飛越實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）等相關(guān)儀器及設(shè)備。于燒杯內(nèi)置入微孔濾膜，注入蒸餾水，酒精燈煮沸滅菌。滅菌后以無菌鑷子夾起微孔濾膜，置于無菌濾床上方，避免微孔濾膜粗糙面向下。注入日常生活飲用水水樣（100ml），開啟閥門，實(shí)施抽濾操作，抽濾條件為-0.05Pa。過濾完成后實(shí)施抽氣，時(shí)間控制在5s內(nèi)，抽氣過程中需關(guān)閉閘門，取出過濾器。再次以無菌鑷子夾起微孔濾膜，放入紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基內(nèi)，保證殘留細(xì)菌面朝上，最后置入37℃恒溫箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為22～26h。若出現(xiàn)產(chǎn)氣情況，則表示總大腸菌群呈陽性，計(jì)算每升水樣中總大腸菌群數(shù)的最近似值。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)組 采用多管發(fā)酵法檢驗(yàn)。準(zhǔn)備微孔濾膜、試管、顯微鏡、無齒鑷子等相關(guān)儀器及設(shè)備。首先培養(yǎng)總大腸菌群。后于裝有單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（10ml）試管內(nèi)注入日常生活飲用水水樣（1.0ml），而單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液配制方法為將蛋白胨（25g）、氯化鈉（15g）、乳糖（15g）分別加入蒸餾水（1000ml）中，并使用牛肉膏（10g）進(jìn)行加熱溶解，將pH值調(diào)整至7.1～7.5范圍內(nèi)，后加入溴甲酚紫乙醇溶液（2ml，濃度為1.5%）充分混勻，分別裝入試管內(nèi)，再放于高壓蒸汽滅菌器（110℃～120℃）內(nèi)充分滅菌15～20min，置入冰箱內(nèi)貯存待檢。同時(shí)于裝有雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（10ml）的試管中注入日常生活飲用水水樣（10ml），并在裝有生理鹽水（9ml）的試管中注入日常生活飲用水水樣（1ml），充分混勻后，將單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液注入混合液（1ml）內(nèi)。污染嚴(yán)重的日常生活飲用水水樣可適度增大稀釋力度。接種完成后，將樣本放入37℃恒溫箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，時(shí)間約為24h。24h后取出，若試管內(nèi)未出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況，則表示大腸菌群呈陰性；若試管內(nèi)出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況，則嘗試將試管放于伊紅美藍(lán)瓊脂板培養(yǎng)基上方轉(zhuǎn)種，伊紅美藍(lán)瓊脂板培養(yǎng)基制備方法為將瓊脂（25g）注入蒸餾水（500ml）中，加熱，充分溶解，后均勻混合磷酸氫二鉀（1.5g）、蛋白胨（8g）至充分溶解，分裝至燒瓶?jī)?nèi)，接受滅菌、冷卻、凝固等處理。轉(zhuǎn)種后再次放進(jìn)恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，密切監(jiān)測(cè)菌落形態(tài)。

附表 兩組微生物檢出情況比較[n(%)]

1.3 觀察指標(biāo) ①比較兩組飲用水水樣檢驗(yàn)合格率，其中日常生活飲水中細(xì)菌總數(shù)＜100個(gè)/ml為合格。②比較兩組微生物檢出情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示、χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組飲用水水樣檢驗(yàn)合格率 實(shí)驗(yàn)組飲用水水樣檢驗(yàn)總合格率96.32%高于對(duì)照組的77.52%（P＜0.05）。

2.2 微生物檢出情況 兩組雜菌、大腸菌群檢出率比較無顯著差異（P＞0.05）；實(shí)驗(yàn)組大腸埃希菌、耐熱大腸菌群檢出率高于對(duì)照組（P＜0.05），見附表。

3 討論

據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查顯示，受水污染問題影響，全球約有12億人出現(xiàn)腸道傳染性疾病，其中死于水污染疾病兒童人數(shù)高達(dá)400萬[5]。故重點(diǎn)把控居民日常生活飲用水質(zhì)量具有重要意義。

大腸菌群是導(dǎo)致腸道疾病發(fā)生的病菌總稱，也是監(jiān)測(cè)食用水源及餐具等生活用品是否遭受糞便污染的主要標(biāo)準(zhǔn)，我國食品衛(wèi)生將其納入主要檢測(cè)范圍內(nèi)[6]。微生物檢驗(yàn)是評(píng)估日常生活飲用水質(zhì)量的重要手段，一定程度可確保水質(zhì)在流行病學(xué)方面的安全性及可靠性。近年來，濾膜法憑借監(jiān)測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性好、精密性高，在飲用水水質(zhì)微生物檢測(cè)中得到廣泛運(yùn)用，尤其是清潔度較高的水樣，但截留在濾膜上大腸桿菌含量超標(biāo)，會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)后過濾膜上大腸桿菌菌落過于密集，無法精準(zhǔn)計(jì)數(shù)菌落，影響測(cè)定結(jié)果。同時(shí)，濾膜法檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性與檢驗(yàn)人員經(jīng)驗(yàn)、技術(shù)水平也存在一定關(guān)系，且確認(rèn)結(jié)果約需48h，不適用于預(yù)防應(yīng)對(duì)突發(fā)公共衛(wèi)生事件。多管發(fā)酵法是目前監(jiān)測(cè)糞大腸桿菌群標(biāo)準(zhǔn)方法，具有技術(shù)成本低、結(jié)果精準(zhǔn)性高等優(yōu)點(diǎn)，可通過糞大腸菌群發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，準(zhǔn)確計(jì)數(shù)糞大腸桿菌群[7]。本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組飲用水水樣檢驗(yàn)總合格率96.32%高于對(duì)照組77.52%（P＜0.05）。可見多管發(fā)酵法可有效提高飲用水水樣檢驗(yàn)合格率。此外，劉笑笑等[8]研究顯示，按照J(rèn)JF 1059.1.2012《測(cè)定不確定度評(píng)定與表示》和SN/T4091-2015《食品微生物學(xué)測(cè)量不確定度評(píng)估指南》，多管發(fā)酵法適用于類似條件下總大腸菌群測(cè)定不確定度的評(píng)估。本研究數(shù)據(jù)表明，實(shí)驗(yàn)組大腸埃希菌、耐熱大腸菌群檢出率高于對(duì)照組（P＜0.05）。提示多管發(fā)酵法在檢出居民日常生活飲用水中大腸埃希菌、耐熱大腸菌群等微生物中具有一定積極效應(yīng)。因此，為減少飲用水污染程度，相關(guān)管理部門應(yīng)從源頭做起，及早檢測(cè)飲用水水質(zhì)，明確總大腸菌群含量，加強(qiáng)對(duì)日常生活飲用水所在區(qū)域消毒、滅菌等管理工作，同時(shí)，也要加大宣傳力度，廣泛普及飲用水安全知識(shí)，從根本上預(yù)防和減少居民日常生活飲用水源污染問題。

綜上可知，多管發(fā)酵法可有效提高居民日常飲用水水樣檢驗(yàn)總合格率，檢出大腸埃希菌、耐熱大腸菌群等微生物。