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        多管發(fā)酵法在居民日常生活飲用水微生物檢測(cè)中的應(yīng)用

        2021-05-07 02:36:34河南省滎陽市疾病預(yù)防控制中心450100楊麗娟
        首都食品與醫(yī)藥 2021年8期

        河南省滎陽市疾病預(yù)防控制中心(450100)楊麗娟

        水是人體必不可缺的生命之源,有助于保持體溫,改善機(jī)體組織細(xì)胞液,促進(jìn)新陳代謝,然而隨著我國經(jīng)濟(jì)持續(xù)發(fā)展,生活工業(yè)用水大量增加,日常飲用水污染也在不斷加重,嚴(yán)重影響居民生活質(zhì)量[1][2]。過濾、消毒等是既往處理日常生活飲用水中微生物的常用方法,雖能減少水中微生物含量,但由于生活環(huán)境較為復(fù)雜,日常生活飲用水污染現(xiàn)象仍未得到明顯抑制[3]。同時(shí),有學(xué)者指出,菌落總數(shù)與游離余氯超標(biāo)是居民日常生活飲用水水質(zhì)不合格的原因[4]。因此,為保障日常生活飲用水安全,維護(hù)居民健康,及時(shí)實(shí)施科學(xué)有效的日常生活飲用水檢驗(yàn)方案是重要前提。基于此,本研究隨機(jī)抽取597份居民日常生活飲用水水樣,探討多管發(fā)酵法在微生物檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值,旨在為科學(xué)選取水質(zhì)檢測(cè)方法提供循證指導(dǎo)。具體分析如下。

        1 資料和方法

        1.1 一般資料 選取2019年10月~2020年4月居民日常生活飲用水水樣597份,所有樣本均嚴(yán)格遵循生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法水樣采集與保存流程進(jìn)行。根據(jù)不同檢驗(yàn)方式分為對(duì)照組(298份)、實(shí)驗(yàn)組(299份),其中對(duì)照組水樣來源:32份出廠水、130份管網(wǎng)末梢水、136份二次供水;實(shí)驗(yàn)組水樣來源34份出廠水、128份管網(wǎng)末梢水、137份二次供水。兩組水樣來源資料均衡可比(P>0.05)。

        1.2 方法

        1.2.1 對(duì)照組 采用濾膜法檢驗(yàn)。準(zhǔn)備微孔濾膜(0.45μm,購自上海摩速科學(xué)器材有限公司)、試管、顯微鏡、無齒鑷子、不銹鋼手提式滅菌器(購自北京金洋萬達(dá)科技有限公司)、恒溫培養(yǎng)箱(購自上海飛越實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)等相關(guān)儀器及設(shè)備。于燒杯內(nèi)置入微孔濾膜,注入蒸餾水,酒精燈煮沸滅菌。滅菌后以無菌鑷子夾起微孔濾膜,置于無菌濾床上方,避免微孔濾膜粗糙面向下。注入日常生活飲用水水樣(100ml),開啟閥門,實(shí)施抽濾操作,抽濾條件為-0.05Pa。過濾完成后實(shí)施抽氣,時(shí)間控制在5s內(nèi),抽氣過程中需關(guān)閉閘門,取出過濾器。再次以無菌鑷子夾起微孔濾膜,放入紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基內(nèi),保證殘留細(xì)菌面朝上,最后置入37℃恒溫箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間為22~26h。若出現(xiàn)產(chǎn)氣情況,則表示總大腸菌群呈陽性,計(jì)算每升水樣中總大腸菌群數(shù)的最近似值。

        1.2.2 實(shí)驗(yàn)組 采用多管發(fā)酵法檢驗(yàn)。準(zhǔn)備微孔濾膜、試管、顯微鏡、無齒鑷子等相關(guān)儀器及設(shè)備。首先培養(yǎng)總大腸菌群。后于裝有單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(10ml)試管內(nèi)注入日常生活飲用水水樣(1.0ml),而單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液配制方法為將蛋白胨(25g)、氯化鈉(15g)、乳糖(15g)分別加入蒸餾水(1000ml)中,并使用牛肉膏(10g)進(jìn)行加熱溶解,將pH值調(diào)整至7.1~7.5范圍內(nèi),后加入溴甲酚紫乙醇溶液(2ml,濃度為1.5%)充分混勻,分別裝入試管內(nèi),再放于高壓蒸汽滅菌器(110℃~120℃)內(nèi)充分滅菌15~20min,置入冰箱內(nèi)貯存待檢。同時(shí)于裝有雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(10ml)的試管中注入日常生活飲用水水樣(10ml),并在裝有生理鹽水(9ml)的試管中注入日常生活飲用水水樣(1ml),充分混勻后,將單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液注入混合液(1ml)內(nèi)。污染嚴(yán)重的日常生活飲用水水樣可適度增大稀釋力度。接種完成后,將樣本放入37℃恒溫箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),時(shí)間約為24h。24h后取出,若試管內(nèi)未出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況,則表示大腸菌群呈陰性;若試管內(nèi)出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況,則嘗試將試管放于伊紅美藍(lán)瓊脂板培養(yǎng)基上方轉(zhuǎn)種,伊紅美藍(lán)瓊脂板培養(yǎng)基制備方法為將瓊脂(25g)注入蒸餾水(500ml)中,加熱,充分溶解,后均勻混合磷酸氫二鉀(1.5g)、蛋白胨(8g)至充分溶解,分裝至燒瓶?jī)?nèi),接受滅菌、冷卻、凝固等處理。轉(zhuǎn)種后再次放進(jìn)恒溫箱內(nèi)培養(yǎng),密切監(jiān)測(cè)菌落形態(tài)。

        附表 兩組微生物檢出情況比較[n(%)]

        1.3 觀察指標(biāo) ①比較兩組飲用水水樣檢驗(yàn)合格率,其中日常生活飲水中細(xì)菌總數(shù)<100個(gè)/ml為合格。②比較兩組微生物檢出情況。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù),計(jì)數(shù)資料用n(%)表示、χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組飲用水水樣檢驗(yàn)合格率 實(shí)驗(yàn)組飲用水水樣檢驗(yàn)總合格率96.32%高于對(duì)照組的77.52%(P<0.05)。

        2.2 微生物檢出情況 兩組雜菌、大腸菌群檢出率比較無顯著差異(P>0.05);實(shí)驗(yàn)組大腸埃希菌、耐熱大腸菌群檢出率高于對(duì)照組(P<0.05),見附表。

        3 討論

        據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查顯示,受水污染問題影響,全球約有12億人出現(xiàn)腸道傳染性疾病,其中死于水污染疾病兒童人數(shù)高達(dá)400萬[5]。故重點(diǎn)把控居民日常生活飲用水質(zhì)量具有重要意義。

        大腸菌群是導(dǎo)致腸道疾病發(fā)生的病菌總稱,也是監(jiān)測(cè)食用水源及餐具等生活用品是否遭受糞便污染的主要標(biāo)準(zhǔn),我國食品衛(wèi)生將其納入主要檢測(cè)范圍內(nèi)[6]。微生物檢驗(yàn)是評(píng)估日常生活飲用水質(zhì)量的重要手段,一定程度可確保水質(zhì)在流行病學(xué)方面的安全性及可靠性。近年來,濾膜法憑借監(jiān)測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性好、精密性高,在飲用水水質(zhì)微生物檢測(cè)中得到廣泛運(yùn)用,尤其是清潔度較高的水樣,但截留在濾膜上大腸桿菌含量超標(biāo),會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)后過濾膜上大腸桿菌菌落過于密集,無法精準(zhǔn)計(jì)數(shù)菌落,影響測(cè)定結(jié)果。同時(shí),濾膜法檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性與檢驗(yàn)人員經(jīng)驗(yàn)、技術(shù)水平也存在一定關(guān)系,且確認(rèn)結(jié)果約需48h,不適用于預(yù)防應(yīng)對(duì)突發(fā)公共衛(wèi)生事件。多管發(fā)酵法是目前監(jiān)測(cè)糞大腸桿菌群標(biāo)準(zhǔn)方法,具有技術(shù)成本低、結(jié)果精準(zhǔn)性高等優(yōu)點(diǎn),可通過糞大腸菌群發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌,準(zhǔn)確計(jì)數(shù)糞大腸桿菌群[7]。本研究結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組飲用水水樣檢驗(yàn)總合格率96.32%高于對(duì)照組77.52%(P<0.05)。可見多管發(fā)酵法可有效提高飲用水水樣檢驗(yàn)合格率。此外,劉笑笑等[8]研究顯示,按照J(rèn)JF 1059.1.2012《測(cè)定不確定度評(píng)定與表示》和SN/T4091-2015《食品微生物學(xué)測(cè)量不確定度評(píng)估指南》,多管發(fā)酵法適用于類似條件下總大腸菌群測(cè)定不確定度的評(píng)估。本研究數(shù)據(jù)表明,實(shí)驗(yàn)組大腸埃希菌、耐熱大腸菌群檢出率高于對(duì)照組(P<0.05)。提示多管發(fā)酵法在檢出居民日常生活飲用水中大腸埃希菌、耐熱大腸菌群等微生物中具有一定積極效應(yīng)。因此,為減少飲用水污染程度,相關(guān)管理部門應(yīng)從源頭做起,及早檢測(cè)飲用水水質(zhì),明確總大腸菌群含量,加強(qiáng)對(duì)日常生活飲用水所在區(qū)域消毒、滅菌等管理工作,同時(shí),也要加大宣傳力度,廣泛普及飲用水安全知識(shí),從根本上預(yù)防和減少居民日常生活飲用水源污染問題。

        綜上可知,多管發(fā)酵法可有效提高居民日常飲用水水樣檢驗(yàn)總合格率,檢出大腸埃希菌、耐熱大腸菌群等微生物。

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