河南省唐河縣人民醫(yī)院（473400）張陸

結(jié)核病為臨床常見的一種慢性疾病，主要因結(jié)核菌感染導致，且該疾病具有傳染性，病變部位包括肺部、腦膜、腹膜、皮膚等，其中肺部為多發(fā)部位，主要臨床表現(xiàn)為咳嗽、盜汗、乏力、低熱、消瘦等，若未及時采取措施治療，將嚴重影響患者生命健康[1][2]。而盡早診斷，盡早治療對控制結(jié)核病病情具有重要作用，近年來，隨著結(jié)核病的診斷技術與輔助試驗不斷發(fā)展，γ干擾素釋放試驗逐漸被用于結(jié)核病臨床診斷中，且具有較高的靈敏度與特異性[3]。目前，酶聯(lián)免疫斑點法（Enzyme linked immunospot assay,ELISPOT）與酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）均為γ干擾素釋放試驗中常用的兩種檢測方式，但臨床對于兩種檢測方式診斷結(jié)核病的臨床價值尚存在一定爭議?；诖耍狙芯恐荚诜治鯡LISPOT與ELISA應用于結(jié)核病診斷中的臨床價值，旨在為臨床診斷疾病提供依據(jù)。具體信息如下。

附表1 兩種檢測方法對結(jié)核病的診斷效果

附表2 兩種檢測方法對結(jié)核病的診斷效能分析

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年3月～2020年3月我院收治疑似結(jié)核病患者共80例作為研究對象，經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準（2018年審（106）號）。其中男性49例，女性31例；年齡37～63歲，平均年齡（45.12±3.26）歲；體重指數(shù)（BMI）17～23kg/m2，平均BMI（20.85±1.02）kg/m2。

1.2 入選標準 （1）納入標準：①具有良好的溝通能力者；②均行ELISPOT與ELISA法進行檢測者；③臨床資料完整者；④配合度理想者；⑤自愿簽署知情同意書者。（2）排除標準：①處于哺乳期、孕期的婦女；②凝血功能障礙者；③過敏體質(zhì)者；④合并艾滋病者；⑤伴有糖尿病、高血壓等疾病者；⑥合并肝、腎等器官功能衰竭者。

1.3 方法 提前向所有入選者說明采血要求：空腹10h以上、采血前30min禁止劇烈運動、保持情緒穩(wěn)定。（1）ELISPOT：使用上海復星代理的進口T-SPOT試劑盒，檢測方法：采集4ml靜脈血，置于肝素抗凝管中，采用密度梯度離心法分離血液樣本單個核細胞（PBMC），將測試液濃度調(diào)整為2.5×109/mL，分別取100μL加入陰性培養(yǎng)基（AIM-V），測試抗原A培養(yǎng)基（ESAT-6），測試抗原B培養(yǎng)基（CFP-10）及陽性培養(yǎng)基（植物血凝素A），將其放入37℃下孵育，時間為16～20h，再使用無菌1×PBS進行洗滌4次，加入酶標儀抗體工作液，在2～8℃下孵育，時間為1h，加入顯色液后避光反應6min，采用去離子水終止反應。陽性判定標準：①陰性對照孔斑點數(shù)量＜6時，抗原A孔或抗原B孔斑點數(shù)量-陰性對照孔斑點數(shù)量≥6；②陰性對照孔斑點數(shù)量≥6時，抗原A孔或抗原B孔斑點數(shù)量為陰性對照孔數(shù)量的2倍及以上。（2）ELISA法：使用上海酶聯(lián)生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒，檢測方法：采集4ml靜脈血，分別分裝加入陰性培養(yǎng)基（基質(zhì)液），測試抗原A培養(yǎng)基（ESAT-6），測試抗原B培養(yǎng)基（CFP-10）及陽性培養(yǎng)基（非特異性刺激源），將其放入37℃下孵育，22～24h后離心取血漿，按照50μL離心血漿+30μL稀釋液比例加入包被鼠單克隆抗人γ干擾素抗體微孔板，將其放入37℃下孵育1h，再加入酶標抗體，繼續(xù)孵育1h后進行沖洗，結(jié)束后加入顯色液，避光反應15min，使用終止液終止反應。立即使用酶標儀測定各孔吸光（OD）值。陽性判定標準：OD值≥Cut off值，其中Cut off值=0.1+陰性對照孔平均OD值。

1.4 觀察指標 所有患者經(jīng)ELISPOT與ELISA法檢測完成后，均行結(jié)核菌培養(yǎng)，以結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果為“金標準”，對ELISPOT與ELISA法檢測診斷結(jié)核病的效能進行分析。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS24.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果 本研究80例患者中，結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果中陽性74例，陰性6例。

2.2 兩種檢測方法診斷結(jié)核病的效能分析 以結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果為“金標準”，ELISPOT診斷結(jié)核病的準確度為91.25%，靈敏度為91.89%，特異度為83.33%，陽性預測值為98.55%，陰性預測值為45.45%略高于ELISA法（86.25%、87.84%、66.67%、97.01%、30.77%），但經(jīng)對比發(fā)現(xiàn)，差異不顯著（P＞0.05）。見附表1、2。

3 討論

感染結(jié)核菌后，患者可能會出現(xiàn)多系統(tǒng)癥狀，且不同系統(tǒng)感染，癥狀也有所不同，尤其感染早期，臨床癥狀較為隱匿[4]。結(jié)核菌培養(yǎng)雖為結(jié)核病診斷的金標準，但由于該方法培養(yǎng)的時間較長，故延誤患者治療時間，導致其在臨床中應用具有一定局限性[5]。因此，尋找一種快速、便捷的方法診斷結(jié)核病已成為臨床關注的熱點。

本研究結(jié)果顯示，以結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果為“金標準”，ELISPOT診斷結(jié)核病的準確度為91.25%，靈敏度為91.89%，特異度為83.33%，陽性預測值為98.55%，陰性預測值為45.45%略高于ELISA法（86.25%、87.84%、66.67%、97.01%、30.77%），但無明顯差異，提示兩種檢測方式對結(jié)核病均有較好的診斷價值，但ELIAS法相比于ELISPOT對檢測設備與操作方法要求較低，更適合在基層醫(yī)院推廣使用。分析原因在于，隨著臨床對免疫學研究不斷深入，γ干擾素釋放試驗憑借其快速、靈敏度高、特異性強等優(yōu)勢在臨床檢驗結(jié)核病中已取得重要地位[6]。目前，ELISPOT與ELISA法已成為γ干擾素釋放試驗中常用檢測方法，且前者相比于后者具有更好的靈敏度與特異性[7]。ELISPOT與ELISA 法檢測原理相似，即在纖維素薄膜外表吸附上抗原或抗體，維持其免疫活性，隨后使其與酶標記物發(fā)生免疫反應，產(chǎn)生酶標記抗原抗體復合物，底物參與后結(jié)合物中的酶催化會逐漸氧化、水解，變成另一種帶有顏色的物質(zhì)沉著在復合物與纖維素薄膜外表吸附位置處，形成斑點，檢測結(jié)果可依據(jù)斑點數(shù)量與色澤度判斷[8][9]。

綜上所述，ELISPOT與ELIAS法診斷臨床診斷結(jié)核病均具有較高的臨床價值，其中ELISPOT診斷準確度略高，但ELIAS法更適合在基層推廣應用。