李 萍，袁平川，闕月月，劉筱琴，王國(guó)棟

1皖南醫(yī)學(xué)院藥物研發(fā)中心//藥學(xué)院，2安徽省多糖藥物工程技術(shù)研究中心//活性生物大分子研究安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 蕪湖 241002；3重慶化工職業(yè)學(xué)院//制藥領(lǐng)域關(guān)鍵共性工藝重慶市高等職業(yè)技術(shù)院校應(yīng)用技術(shù)推廣中心，重慶401220

在世界范圍內(nèi)，結(jié)直腸癌（CRC）是導(dǎo)致癌癥和癌癥死亡的第2大常見(jiàn)原因［1］。CRC被診斷的可能性在40歲以后逐漸增加，50歲以后急劇上升，80歲后診斷率達(dá)到高峰［2］。近年來(lái)，我國(guó)結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)，已成為世界上每年新增病例和死亡人數(shù)最多的國(guó)家，嚴(yán)重威脅著我國(guó)居民的健康［3］。有針對(duì)性的篩查，更復(fù)雜的診斷程序和早期的治療干預(yù)可以及時(shí)地降低與結(jié)直腸癌相關(guān)的發(fā)病率和死亡率［4-5］。但是作為篩查金標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)腸鏡檢查和作為主要治療手段的手術(shù)切除均易產(chǎn)生術(shù)后感染性并發(fā)癥，應(yīng)激引起的炎癥對(duì)結(jié)直腸癌患者的長(zhǎng)期生存結(jié)局有負(fù)面影響［6］。

靶向治療和化療是CRC常用的療法，可以提高患者長(zhǎng)期生存率和減少?gòu)?fù)發(fā)［7］。而常規(guī)化療由于缺乏特異性，效果有限，對(duì)患者產(chǎn)生不良副作用［8-9］。奧沙利鉑（Oxa）是首個(gè)被證實(shí)具有抗CRC活性的鉑類(lèi)藥物，其機(jī)制可能與形成鉑-DNA復(fù)合物阻礙DNA合成從而引起細(xì)胞死亡有關(guān)，Oxa對(duì)DNA復(fù)制的抑制作用強(qiáng)于順鉑等其他鉑類(lèi)藥物，因此以O(shè)xa為基礎(chǔ)的化療被推薦為轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的一線(xiàn)治療方案［10-11］。然而，據(jù)美國(guó)食品和藥物管理局報(bào)道，Oxa可導(dǎo)致胃腸道、血液學(xué)和神經(jīng)系統(tǒng)等嚴(yán)重不良反應(yīng)，通常會(huì)導(dǎo)致停止治療［12］。Oxa引起的這些嚴(yán)重不良事件主要與患者使用劑量相關(guān)，長(zhǎng)期反復(fù)使用奧沙利鉑還會(huì)導(dǎo)致耐藥性的產(chǎn)生從而影響其臨床應(yīng)用［13-14］。因此，為了克服奧沙利鉑的耐藥和毒性，迫切需要開(kāi)發(fā)新的化學(xué)增敏劑。

近年來(lái)，多糖發(fā)揮奧沙利鉑增敏作用時(shí)有報(bào)道。Zhang等［15］發(fā)現(xiàn)香菇多糖與Oxa具有顯著的協(xié)同抗肝癌作用并可減輕用藥的副作用。黑根霉胞外多糖對(duì)CT26結(jié)腸癌移植瘤小鼠具有抑瘤作用［16］并且和Oxa發(fā)揮協(xié)同抗結(jié)腸癌作用［17］。擬康氏木霉胞外多糖(EPS)是從玉米秸稈中分類(lèi)得到的擬康氏木霉中提取分離得到的均一多糖，已發(fā)現(xiàn)其具有免疫活性，可促進(jìn)小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞成熟［18］并誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化［19］。前期研究發(fā)現(xiàn)EPS可抑制包括人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡［20-22］。為了進(jìn)一步了解擬康氏木霉胞外多糖是否可增加奧沙利鉑在CRC化療中的敏感性，本實(shí)驗(yàn)以人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116為研究對(duì)象，進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn)研究，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法探討了作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 試劑與儀器

1640培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS）（Gibco）；CCK-8試劑盒、Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒（碧云天）。細(xì)胞培養(yǎng)箱（Gold-SIM）；倒置熒光顯微鏡（OLYMPUS）；流式細(xì)胞儀（BD）。

1.2 材料

擬康氏木霉胞外多糖（EPS）為本實(shí)驗(yàn)室自制，制備方法參考本課題組發(fā)表的文獻(xiàn)［22］，過(guò)DEAE-Sepharose快速流動(dòng)柱和葡聚糖凝膠G-75柱上后收集主要組分并凍干得到白色純化的EPS。凝膠滲透色譜（GPC）測(cè)定平均相對(duì)分子質(zhì)量為31 900 D。氣相色譜法測(cè)定EPS的組分糖分為鼠李糖，木糖、巖藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖比率為16.2∶14.4∶1:25.8∶23.6∶48.1。數(shù)據(jù)與我們的相同以前的結(jié)果相同。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)

人結(jié)腸癌細(xì)胞株（HCT116）購(gòu)于上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞庫(kù)，在含10%FBS的1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱溫度設(shè)置為37 ℃，CO2含量設(shè)置為5%。

1.4 方法

1.4.1 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力 實(shí)驗(yàn)分為Oxa組、EPS組、Oxa+EPS組。Oxa組給予不同濃度（0、2、4、8、16、32、64 μg/mL）Oxa處理，EPS組給予不同濃度（0、25、50、100、200、400、800 μg mL）EPS處理。Oxa+EPS組中每組的Oxa給藥濃度與單用組相同，Oxa與EPS給藥濃度比為1∶12.5。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HCT116細(xì)胞接種于96孔板中，2×103/孔，培養(yǎng)24 h后，各組加藥，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。加藥培養(yǎng)24、48、72 h后，棄去原培養(yǎng)基，每孔加入100 μL培養(yǎng)基和10 μL CCK-8試劑，1 h后測(cè)A450nm處吸光值A(chǔ)，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。細(xì)胞增殖抑制率=1-（A實(shí)驗(yàn)組－A調(diào)零孔）/（A空白對(duì)照組－A調(diào)零孔）×100%。CompuSyn軟件擬合Fa-CI曲線(xiàn)。

1.4.2 流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期 實(shí)驗(yàn)分為Control組、Oxa組、EPS組、Oxa+EPS組。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板種6孔，24 h后吸棄培養(yǎng)基，其中3個(gè)孔各加2 mL完全培養(yǎng)基，前2孔細(xì)胞一分為三用作空白管和PI單陽(yáng)管以及FITC單陽(yáng)管，另一孔細(xì)胞用作實(shí)驗(yàn)組對(duì)照。EPS組加2 mL濃度為100 μg/mLEPS、Oxa組加2 mL濃度為8 μg/mL Oxa、Oxa+EPS組組加入1 mL 200 μg/mLEPS和1 mL 16 μg/mL Oxa。24 h后使用不含EDTA 胰酶消化后，用PBS 洗滌細(xì)胞后加入195 μL Annexin V-FITC結(jié)合液輕輕重懸細(xì)胞，空白管不加染料，單陽(yáng)管只加10 μL PI染色液或5 μLAnnexin V-FITC，各實(shí)驗(yàn)管2種染料均加入，避光室溫孵育5 min。過(guò)細(xì)胞篩后立即使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，使用Flowjo軟件分析，以早期凋亡率與晚期凋亡率的和作為觀(guān)察指標(biāo)。細(xì)胞周期檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組種板和加藥與檢測(cè)凋亡相同，細(xì)胞用胰酶消化收集細(xì)胞后，用冰冷的PBS洗滌2次，加入70%乙醇吹打均勻，4 ℃過(guò)夜，1000 r/min離心3 min，沉淀細(xì)胞。吸除上清，加入約1 mL預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞。再次離心沉淀細(xì)胞，加入當(dāng)日現(xiàn)配的含RNase A的碘化丙啶染色液，37 ℃避光溫浴30 min，過(guò)細(xì)胞篩后上機(jī)檢測(cè)細(xì)胞周期。

1.4.3 劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)分為Control 組（0 μg/mL）、Oxa 組（8 μg/mL Oxa）、EPS 組（100 μg/mLEPS）、Oxa+EPS組（100 μg/mLEPS+8 μg/mL Oxa）。記號(hào)筆于6孔板背面劃?rùn)M線(xiàn)，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞種于六孔板中，細(xì)胞數(shù)以隔夜長(zhǎng)滿(mǎn)為宜。第2天用1 mL槍頭垂直于背后的橫線(xiàn)劃痕，PBS洗滌后分別加藥，藥物使用1%血清培養(yǎng)基配制，以1%血清培養(yǎng)基為對(duì)照，培養(yǎng)24 h。0 h，24 h拍照，每組記錄3處劃痕。1%血清培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，5×105/孔細(xì)胞鋪于Transwell上層小室，下室加10%血清培養(yǎng)基配制的各組600μL，培養(yǎng)16 h后，取出Transwell小室，棄去孔中培養(yǎng)液，用PBS洗2遍，甲醇固定30 min，0.1%結(jié)晶紫染色20 min，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細(xì)胞，用PBS洗3遍。將小室適當(dāng)風(fēng)干，顯微鏡拍照。

1.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理統(tǒng)計(jì) 數(shù)據(jù)皆采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 18.0軟件，采用單因素方差分析法進(jìn)行組間比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次。

1.4.5 核心靶點(diǎn)的獲取 應(yīng)用pubchem（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）查找?jiàn)W沙利鉑對(duì)應(yīng)的2D結(jié)構(gòu)，并將結(jié)果導(dǎo)入pharmMapper 數(shù)據(jù)庫(kù)獲得對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)，查閱所以擬康氏木霉胞外多糖相關(guān)文獻(xiàn)找出對(duì)應(yīng)靶基因，與奧沙利鉑對(duì)應(yīng)靶基因合并作為藥物靶點(diǎn)。GeneCards（https://www.genecards.org/）檢 索“Colorectal cancer”獲得疾病對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)，將藥物靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)取交集，獲得疾病與藥物相關(guān)靶點(diǎn)，再使用Cytoscape 中的MCODE插件通過(guò)計(jì)算獲得核心靶點(diǎn)。

1.4.6 GO富集分析和KEGG富集分析 Bioconductor數(shù)據(jù)庫(kù)獲取核心基因的GO 注釋信息，使用R 包c(diǎn)lusterProfiler，進(jìn)行GO功能富集分析和KEGG通路注釋分析，根據(jù)P值選擇富集高的進(jìn)行可視化生成柱狀圖。

2 結(jié)果

2.1 EPS對(duì)奧沙利鉑抑制HCT116細(xì)胞增殖的作用

CCK-8結(jié)果顯示，兩者均能抑制HCT116細(xì)胞增殖并并呈現(xiàn)劑量與時(shí)間依耐性（圖1）。Oxa單用或與EPS聯(lián)用處理HCT116細(xì)胞，均可使HCT116細(xì)胞活力受到抑制，并呈現(xiàn)劑量與時(shí)間依耐性（圖2A）。由CompuSyn軟件擬合Fa-CI曲線(xiàn)，結(jié)果顯示兩者聯(lián)用有較好的協(xié)同作用（圖2B）。

圖1 奧沙利鉑與EPS對(duì)HCT116細(xì)胞增殖活力的影響Fig.1 Effects of oxaliplatin and polysaccharide from Trichoderma pseudokoningii(EPS)on proliferation of HCT116 cells.

圖2 EPS與奧沙利鉑聯(lián)用對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的協(xié)同抑制作用Fig.2 EPS and oxaliplatin(Oxa) synergistically inhibit HCT116 cell proliferation. A:Inhibition rates of HCT116 cells incubated with Oxa and with Oxa +EPS (1∶12.5) for 24,48,and 72 h determined by CCK-8 assay.Data are presented as Mean ± SD of 3 independent experiments. B:Combination index (CI) for EPS and oxaliplatin in HCT116 cells.

2.2 EPS聯(lián)用奧沙利鉑對(duì)HCT116細(xì)胞凋亡的影響

流式細(xì)胞儀檢測(cè)后使用Flowjo軟件分析，左上象限為壞死細(xì)胞，左下為正常細(xì)胞，右上為晚期凋亡細(xì)胞，右下為晚期凋亡細(xì)胞，以右上+右下獲得的總比例作為凋亡的指標(biāo)。HCT116 細(xì)胞經(jīng)100 μg/mL EPS或8 μg/mL Oxa處理24 h 后，細(xì)胞總凋亡率均明顯高于對(duì)照組（P<0.05，圖3）；兩藥聯(lián)合組的細(xì)胞總凋亡率較Oxa組以及對(duì)照組均顯著升高（P<0.05）。

圖3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各給藥組對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116細(xì)胞凋亡的影響Fig.3 Flow cytometric analysis of apoptosis rates of HCT116 cells treated with 100 μg/mL EPS,8 μg/mL oxaliplatin,or both(Mean±SD,n=3).*P<0.05 vs control group;#P<0.05 vs Oxa group.

2.3 EPS聯(lián)用奧沙利鉑對(duì)HCT116細(xì)胞周期的影響

與空白對(duì)照組比較，各組S期的細(xì)胞比例均出現(xiàn)升高，兩藥聯(lián)用后趨勢(shì)更加明顯，G2/M比例無(wú)顯著差別。兩藥聯(lián)用后S期細(xì)胞比例高于單用一種藥物。由此可見(jiàn)，兩種藥物均可將HCT116細(xì)胞阻滯于S期，使得細(xì)胞周期不能順利進(jìn)入G2/M期，且兩藥聯(lián)用有協(xié)同作用（圖4）。

圖4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各給藥組作用于人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116后誘導(dǎo)細(xì)胞周期的作用Fig.4 Flow cytometry for analyzing cell cycle changes in HCT116 cells treated with 100 μg/mL EPS,8 μg/mLoxaliplatin,or both.

2.4 EPS聯(lián)用奧沙利鉑對(duì)HCT116細(xì)胞遷移能力的影響

劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell 小室實(shí)驗(yàn)是常用的評(píng)估細(xì)胞遷移能力的實(shí)驗(yàn)。100倍顯微鏡下觀(guān)察EPS聯(lián)用Oxa對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞遷移能力的影響，發(fā)現(xiàn)兩藥均有一定的抑制遷移作用，兩者聯(lián)用后抑制遷移作用更為明顯（圖5A）。兩藥聯(lián)用后作用抗遷移增強(qiáng)。Transwell 小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果與劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致（圖5B）。

圖5 擬康氏木霉胞外多糖聯(lián)用奧沙利鉑對(duì)HCT116 細(xì)胞的影響Fig.5 Effect of EPS (100 μg/mL) combined with oxaliplatin (8 μg/mL) on migration ability of HCT116 cells. A:Wound healing assay (Original magnification:×100). B:Transwell migration assay(×100).

2.5 核心靶基因

通過(guò)查找數(shù)據(jù)庫(kù)和查閱文獻(xiàn)，共獲得與奧沙利鉑和擬康氏木霉胞外多糖相關(guān)基因191個(gè)，與CRC相關(guān)基因7542個(gè)，共有交集基因125個(gè)。將125個(gè)交集基因?qū)雜tring構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)后導(dǎo)出文件，使用R包獲得連接數(shù)前30的基因，利用Cytoscape軟件中的插件cytoHubba和MCODE找出關(guān)鍵子網(wǎng)絡(luò)，共獲得5個(gè)關(guān)鍵蛋白模塊，其中4個(gè)得分超過(guò)5（圖6），將4個(gè)模塊中包含的55個(gè)基因作為核心基因用于后續(xù)分析。

2.6 GO富集分析

核心基因GO富集后共得到1651條，其中生物過(guò)程（BP）1526 條，細(xì)胞成分（CC）12 條，分子功能（MF）113條。根據(jù)P值選擇BP、CC、MF富集前10 個(gè)進(jìn)行可視化并生成氣泡圖（圖7），與生物過(guò)程相關(guān)的主要有外源性凋亡信號(hào)通路、細(xì)胞對(duì)化學(xué)應(yīng)激的反應(yīng)、活性氧代謝過(guò)程等；與細(xì)胞成分相關(guān)的主要包括突膜筏、膜微區(qū)、胞質(zhì)小泡等；與分子功能相關(guān)的主要半胱氨酸型內(nèi)肽酶活性參與細(xì)胞凋亡過(guò)程、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶活性、抗氧化活性等。

2.7 KEGG富集分析

核心靶基因進(jìn)行KEGG分析顯示，關(guān)鍵靶基因富集在143條通路上，涉及耐藥、凋亡、血管新生等通路。根據(jù)P值排名前30的結(jié)果形成KEGG功能富集條形圖（圖8），提示奧沙利鉑和擬康氏木霉胞外多糖聯(lián)用可以通過(guò)多條通路作用于CRC，其中排在首位的是鉑耐藥通路，一系列通路存在節(jié)點(diǎn)基因重合并呈現(xiàn)交叉調(diào)控。以富集基因最多的PI3K-Akt 信號(hào)通路（hsa04151）為例，該通路與凋亡信號(hào)通路、細(xì)胞周期信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、VEGF信號(hào)通路、p53信號(hào)通路等通路均有交叉（圖9）。

3 討論

圖6 核心靶點(diǎn)的篩選Fig.6 Screening of the core targets.A:Oxaliplatin 2D structure.B:Drug-disease intersection genes.C:PPI network and key protein modules.D:Target connection top 30 genes.

常規(guī)化療藥物聯(lián)合增敏劑的使用，可以提高癌細(xì)胞對(duì)常規(guī)藥物敏感性，減少毒副作用和化療耐藥性。因此，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注“化療增敏劑”的研究與開(kāi)發(fā)。奧沙利鉑是第三代鉑類(lèi)藥物，對(duì)轉(zhuǎn)移性CRC具有很好的療效，是晚期結(jié)腸癌和轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌治療的一線(xiàn)化療藥物［23］，但在治療中易引起嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)及其他副作用［24］，長(zhǎng)期使用還會(huì)產(chǎn)生耐藥［25］，因此急需開(kāi)發(fā)有效的增敏藥物。已報(bào)導(dǎo)奧沙利鉑的潛在增敏劑有姜黃素、人參皂苷、胡椒酮等［26-28］，它們大多從植物提取分離，往往受限于原材料和提取分離工藝，不利于后期產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。真菌多糖作為一種天然產(chǎn)物，具有使用安全，毒性低，生產(chǎn)不受季節(jié)氣候和場(chǎng)地影響，是理想的候選藥物［29-30］。

圖7 GO富集分析（排名前10）Fig.7 GO Enrichment analysis of the top 10 genes.

在EPS過(guò)去的研究中，主要涉及抗腫瘤及提供免疫作用，本研究首次探討了EPS與其他抗腫瘤藥物的聯(lián)合用藥作用。兩藥合用并非簡(jiǎn)單的效果疊加，經(jīng)常會(huì)產(chǎn)生協(xié)同或拮抗效果［31］。本研究發(fā)現(xiàn)，EPS和奧沙利鉑聯(lián)用對(duì)HCT116的抑制增殖活性、引起細(xì)胞周期阻滯、誘導(dǎo)凋亡作用均表現(xiàn)出了協(xié)同活性。在對(duì)HCT116細(xì)胞的遷移活力的研究中，我們發(fā)現(xiàn)兩者在劃痕實(shí)驗(yàn)和小室遷移實(shí)驗(yàn)中顯示兩者均可抑制HCT116細(xì)胞遷移活力，合用后均顯示出1+1大于2的效果。這提示我們EPS還可能通過(guò)抑制遷移發(fā)揮抗腫瘤活性，這一點(diǎn)在以往研究中被忽略了，下一步我們打算對(duì)EPS抑制腫瘤的EMT作用做進(jìn)一步研究，但EPS的IC50超過(guò)了1 mg/mL，單獨(dú)用藥雖然有一定的效果，但是用藥劑量過(guò)大，不利于后期作為抗腫瘤藥物開(kāi)發(fā)應(yīng)用。之前本課題組的研究人員希望通過(guò)硒化或硫酸酯化的方法進(jìn)行多糖改性［32］，以獲得以活性更高的多糖，本研究為EPS的研究提示了新的方向。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)主要用于中藥機(jī)制的研究，適合復(fù)雜成分機(jī)制的研究，EPS聯(lián)用Oxa的協(xié)同作用涉及增殖、凋亡、細(xì)胞周期、遷移等多種表型，因此我們使用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法進(jìn)行機(jī)制的分析。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合用藥使活性氧代謝和半胱氨酸型內(nèi)肽酶活性參與細(xì)胞凋亡等一列生物過(guò)程和分子功能發(fā)生了改變，鉑耐藥以及細(xì)胞增殖與凋亡相關(guān)的一系列信號(hào)通路受到了調(diào)控。其中富集最多基因的通路是PI3K-Akt信號(hào)通路，該信號(hào)通路在病理和生理過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。細(xì)胞處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，PI3K/Akt通路是一個(gè)關(guān)鍵的調(diào)節(jié)因子［33-34］。激活或干擾PI3K/Akt通路與許多人類(lèi)惡性腫瘤密切相關(guān)，因此具有重要意義［35］。該通路是潛在的抗腫瘤藥物的治療靶點(diǎn)。趨化因子受體9、炎癥相關(guān)細(xì)胞因子toll樣受體和白細(xì)胞介素-6是PI3K-Akt通路的一些重要的上游調(diào)節(jié)因子［36-38］。該通路與其他幾種通路存在相互作用，如缺氧誘導(dǎo)因子，絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、Notch、Wnt、JNK 和Ras［39-42］。PI3KAkt通路活化可促進(jìn)細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)和參與血管生成，因此影響細(xì)胞增殖、侵襲、遷移、凋亡和新陳代謝［43-45］。Akt 通過(guò)磷酸化palladin 和vimentin，參與細(xì)胞遷移和侵襲。PI3K/Akt 信號(hào)通路在EPS 聯(lián)用Oxa 抑制HCT116細(xì)胞的遷移中的作用，將在后續(xù)的研究中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

綜上所述，擬康氏木霉胞外多糖和奧沙利鉑聯(lián)用，可以增加人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞對(duì)奧沙利鉑的敏感性，減少奧沙利鉑的用量，起到增效減毒的作用，在此過(guò)程中鉑耐藥、PI3K/Akt、P53等多條信號(hào)通路被調(diào)控。協(xié)同作用的發(fā)揮，是多靶點(diǎn)、多通路共同作用的結(jié)果。該研究為對(duì)真菌多糖開(kāi)發(fā)為腫瘤治療或輔助治療藥物具有重要意義，值得進(jìn)一步進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證并探討其臨床應(yīng)用的可能。