林勇，王宏雨，張迪

（1.福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建 福州 350101；2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，福建 福州 350003）

凝集素是一類能與糖特異性結(jié)合，具有與糖專一性、可逆結(jié)合的特點的蛋白[1]。凝集素是食用菌的重要活性成分，參與食用菌自身的分化，識別異源物質(zhì)等參與食用菌內(nèi)多種生理過程，同時還參與其它生物體內(nèi)的一些重要生理過程，在生物體內(nèi)細胞癌變、受精、分化和分子識別等生命過程中起著重要作用，日益成為國內(nèi)外生物科學(xué)研究的熱點之一[2-5]。

從目前國外對雙孢蘑菇凝集素的研究成果來看，凝集素能夠顯著地抑制人乳腺癌細胞、人結(jié)腸癌上皮細胞、大鼠乳腺纖維母細胞、人視網(wǎng)膜上色素上皮細胞、人眼成纖維細胞等多種細胞的增值，并且這些抑制是可逆的，而且其細胞學(xué)毒性不明顯[6-10]，這些特殊的活性使其在未來成為治療腫瘤和組織增生的新型藥物。

但是，目前凝集素促進菌種菌絲分化扭結(jié)的情況的研究卻很少，對于雙孢蘑菇2796這一來源豐富，推廣迅速的食用菌凝集素應(yīng)用的研究更是少之又少，對其作用于不同菌種的菌絲分化的研究更是幾乎接近空白。綜合上述原因，本文將雙孢蘑菇2796提取的凝集素滴加在不同種菌種上，研究其促進菌絲分化的扭結(jié)情況，觀察雙孢蘑菇2796凝集素促進下是否使菌種提前出菇，從而減少工廠生產(chǎn)的時間，降低生產(chǎn)成本。

1 材料與方法

1.1 供試材料

新鮮雙孢蘑菇子實體產(chǎn)自福建省寧德市金海西食用菌有限公司，品種為雙孢蘑菇2796；新鮮菇子實體去除菇腳上的污物后保存于-20℃冰箱備用。

武香一號、灰樹花、姬松茸，真姬菇、雞腿菇、竹蓀等菌種。

1.2 試驗方法

1.2.1 雙孢蘑菇2796凝集素的分離純化

參照張迪等分離純化方法[11]，獲得各峰值的凝血活性，然后對其進行冷凍干燥，收集得到雙孢蘑菇2796凝集素純品。

1.2.2 食用菌培養(yǎng)基的制備

固體瓊脂PDA培養(yǎng)基有2種：草類的培養(yǎng)基與一般的固體培養(yǎng)基。

草類PDA培養(yǎng)基的配方為：馬鈴薯20%、葡萄糖2%、K2HPO4 0.15%、MgSO4 0.5%、蛋白胨0.3%、酵母浸膏0.2%。

一般的PDA培養(yǎng)基配方為：馬鈴薯20%、葡萄糖2%、K2HPO4 0.3%、MgSO4 0.5%、VB1=10 mg/L、瓊脂20%。

分別各自配制1000 mL，將用電子天平稱量好的馬鈴薯切成片放在水中用電磁爐煮熟，煮沸15 min后，將其用紗布過濾與其他物質(zhì)充分混勻，放在電磁爐上加熱促進其混勻，再將其放入高壓鍋滅菌消毒。等其冷卻至一定溫度（不能讓其凝固）后開始在超凈臺上倒入PDA，然后等液體凝固后開始接種。

1.2.3 菌種接種

在平板中央接入0.5 cm2武香一號、灰樹花、姬松茸、雞腿菇、竹蓀、真姬菇等菌塊（接種過程要全程保持不染菌），放在25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待菌絲布滿菌塊后，將濃度0、5、10、15 mg/mL的雙孢蘑菇2796凝集素（ABL）滴加在菌絲的表面的4個相對的區(qū)域，重復(fù)5次，即5個實驗組，一個對照空白組，繼續(xù)放在培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)10 d左右，然后將培養(yǎng)皿分別轉(zhuǎn)移到10～15 ℃條件下，自然光照，80%濕度繼續(xù)培養(yǎng)，觀察結(jié)果，隔3天拍一次照片記錄過程。

2 結(jié)果與分析

2.1 雙孢蘑菇2796凝集素對武香一號、灰樹花、姬松茸子實體的扭結(jié)有促進作用。

圖1 不同濃度ABL處理過的武香一號對照圖

由圖1可見，滴加不同濃度ABL的武香一號經(jīng)20 d，觀察發(fā)現(xiàn)，左邊的培養(yǎng)皿在滴加濃度5～15 mg/mL凝集素后武香一號均有明顯的子實體出現(xiàn)，且濃度越高出現(xiàn)的時間越早，而右邊的培養(yǎng)皿只是通過水處理，轉(zhuǎn)色及扭結(jié)的時間明顯推遲。

圖2 不同濃度ABL處理過的灰樹花對照圖

由圖2可見，滴加不同濃度ABL的灰樹花經(jīng)過20 d，觀察發(fā)現(xiàn)，圖兩邊的培養(yǎng)皿在不同濃度下灰樹花均有明顯的子實體出現(xiàn)，但可以看出15 mg/mL濃度的凝集素下的扭結(jié)情況比其他濃度的程度高很多，但不如武香一號香菇的子實體出菇快及明顯。

圖3 不同濃度ABL處理過的姬松茸對照圖

由圖3而可見，滴加不同濃度ABL處理的姬松茸經(jīng)過20 d，觀察發(fā)現(xiàn)，圖兩邊的培養(yǎng)皿在不同濃度下姬松茸均有明顯子實體出現(xiàn)，在15 mg/mL濃度凝集素的刺激下出菇的時間明顯高于其他濃度或者空白對照，說明在一定高濃度凝集素下灰樹花的出菇時間會大幅縮短。但是，比較武香一號香菇可知，沒有武香一號香菇的子實體出菇情況快并且明顯，也沒有灰樹花的結(jié)果明顯。

圖4 不同濃度ABL處理過的雞腿菇對照圖

圖5 不同濃度ABL處理過的竹蓀對照圖

圖6 不同濃度ABL處理過的真姬菇對照圖

2.4 雙孢蘑菇2796凝集素對雞腿菇、竹蓀、真姬菇子實體扭結(jié)沒有明顯影響

由圖4、圖5、圖6可見，滴加不同濃度ABL處理的雞腿菇、竹蓀、真姬菇經(jīng)過20 d，觀察發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)皿在不同濃度過下都沒有出現(xiàn)有扭結(jié)的跡象。

3 討論與結(jié)論

⑴ 凝集素具調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能，促進細胞有絲分裂形成，抑制腫瘤細胞生長和抗病毒功能，同時調(diào)節(jié)器官的分化和形成[12-16]。因此本研究探討食用菌凝集素在菌絲發(fā)育和形態(tài)建成是否起著重要的作用。

⑵ 本實驗探討食用菌凝集素對食用菌菌絲的扭結(jié)及子實體的影響，特別是研究對覆土食用菌品種的扭結(jié)及出菇影響。結(jié)果顯示，雙孢蘑菇2796凝集素對武香一號香菇的扭結(jié)有著非常明顯的作用，其次是姬松茸、再次是灰樹花，也就是說都有提高出菇速度的可能，而對于竹蓀、真姬菇、雞腿菇等無影響，可以推測雙孢蘑菇2796凝集素可能對一些品種器官的分化和形成起著非常重要的作用，但不同種類菌種的出菇時間、速度不同，所以有必要進一步研究。

⑶ 根據(jù)本實驗研究結(jié)果可以進一步地進行小規(guī)?；纳a(chǎn)以檢驗其是否真的有效，也可進一步研究是否在一定凝集素的濃度范圍內(nèi)其出菇的速度呈現(xiàn)上漲趨勢，而超過一定的濃度后就會出現(xiàn)抑制作用。