蘇金花 陳宇鋒 劉颯爽

血小板抗體包括血小板相關(guān)抗體(PAIg G)與組織相容性抗體(HLA-I)及血小板特異性抗體(PBIgG)與GP 抗原不相容兩類。血小板抗體多由器官移植、輸血及妊娠活動(dòng)等免疫性因素生成。孕婦體內(nèi)因免疫效應(yīng)生成的血小板免疫球蛋白G(IgG)抗體,多數(shù)能夠通過胎盤屏障損壞胎兒的血小板系統(tǒng),導(dǎo)致新生兒或胎兒血小板減少,誘發(fā)孕產(chǎn)婦復(fù)發(fā)性流產(chǎn)或同種免疫血小板減少性紫癜(NAITP)［1］。研究表明［2］,存在流產(chǎn)史孕婦的血小板抗體陽性率明顯高于正常孕婦,并且這兩者存在正比關(guān)系。對(duì)于血小板抗體陽性的孕婦早期診治對(duì)提高分娩質(zhì)量、減少不良出生率有重要意義［3］。因此,本文擬分析血小板抗體檢測(cè)在診斷復(fù)發(fā)性流產(chǎn)及新生兒免疫性血小板減少癥中的應(yīng)用價(jià)值,抽取本院復(fù)發(fā)性流產(chǎn)孕婦80 例及30 例免疫性血小板減少癥新生兒進(jìn)行研究,報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月～2020 年3 月本院1280 例正常孕婦、30 例健康新生兒作為對(duì)照組,另選擇80 例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)孕婦(連續(xù)自然流產(chǎn)≥2 次者)、30 例免疫性血小板減少癥(PLT≤100×109個(gè)/L,日齡0～28 d)新生兒作為觀察組。對(duì)照組孕婦年齡22～35 歲,平均年齡(27.17±2.85)歲；體重45.23～75.11kg,平均體重(49.21±9.12)kg。觀察組孕婦年齡23～34 歲,平均年齡(27.27±2.76)歲；體重50.31～76.13 kg,平均體重(51.31±9.32)kg。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 觀察組孕婦納入標(biāo)準(zhǔn)：①孕婦為反復(fù)自然流產(chǎn)2 次及以上者；②孕婦內(nèi)分泌系統(tǒng)正常,即甲狀腺激素檢驗(yàn)、性激素6 項(xiàng)檢查無異常；③孕婦均實(shí)施單純皰疹病毒、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、抗精子抗體等血清學(xué)檢測(cè),結(jié)果均無異常；④孕婦經(jīng)檢測(cè)無其他血型不規(guī)則抗體；⑤孕婦生殖系統(tǒng)結(jié)構(gòu)正常；⑥孕婦對(duì)本試驗(yàn)檢查的項(xiàng)目、流程、研究目的有充分的了解,孕婦及其家屬均知悉并同意參與本次試驗(yàn)。觀察組新生兒納入標(biāo)準(zhǔn)：觀察組新生兒血小板≤100×109/L,滿足“預(yù)防新生兒原發(fā)性免疫性血小板減少癥”［4］提出的經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)室檢查血小板計(jì)數(shù)減少；骨髓巨核細(xì)胞增多或正常；脾臟未腫大或只是輕微腫大。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 孕婦排除標(biāo)準(zhǔn)：①孕婦的意識(shí)模糊,難以溝通,難以配合者；②患有嚴(yán)重凝血系統(tǒng)功能障礙；③多胎妊娠孕婦；④孕婦伴有妊娠期糖尿病、高血壓等疾病；⑤病歷資料殘缺、病情危急孕婦；⑥排除紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢查為陽性孕婦；⑦排除存在輸血史孕婦。新生兒排除標(biāo)準(zhǔn)：①家屬不同意進(jìn)行該項(xiàng)研究者；②合并嚴(yán)重的先天性代謝障礙者；③臨床依從性差,中途退出者。

1.3 方法 觀察組和對(duì)照組均進(jìn)行血小板抗體檢測(cè)。血小板抗體包括抗-HLA 和抗-HPA。若需區(qū)分兩者,需要選擇二磷酸氯喹給予鑒別,該溶液能夠?qū)θ祟惏准?xì)胞抗原(HLA)造成破壞(此次實(shí)驗(yàn)并沒有區(qū)分)。只需要運(yùn)用固相紅細(xì)胞吸附實(shí)驗(yàn)對(duì)血小板抗體實(shí)施定性分析。①標(biāo)本處理：用EDTA 抗凝管采集觀察組和對(duì)照組靜脈血2～3 ml,以3000 rpm 離心5 min后,取上清液進(jìn)行檢測(cè)。樣品可以在4℃下保存7 d。如果需要長期保存,則應(yīng)將其冷凍在-20℃。具有溶血、黃疸和高脂血癥的樣品不能用于檢測(cè)。②試劑與儀器：血小板抗體檢測(cè)試劑盒(固相凝集法),血小板抗體篩選細(xì)胞,用于相關(guān)檢測(cè)的指示性紅細(xì)胞和離心機(jī)均由長春博德生物技術(shù)有限公司提供。③記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果：采用先進(jìn)的固相紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)技術(shù)(solidphaseredcelladherence,SPRCA),反應(yīng)板中已包被抗血小板單克隆抗體,血小板懸液經(jīng)離心洗滌后可在反應(yīng)孔底部形成血小板單層。加入血清或血漿,于反應(yīng)孔中進(jìn)行孵育,如果該血清或血漿中存在血小板抗體,此抗體與反應(yīng)孔內(nèi)的血小板單層結(jié)合,未結(jié)合的成分通過洗滌被去除。加入抗人IgG 及人IgG 致敏紅細(xì)胞(指示紅細(xì)胞),經(jīng)離心后指示紅細(xì)胞通過抗人IgG 的橋連與血小板單層上的血小板抗體結(jié)合,因此陽性反應(yīng)為指示紅細(xì)胞平鋪在反應(yīng)孔底部表面。而陰性反應(yīng)為指示紅細(xì)胞在離心力的作用下聚集于反應(yīng)孔底部中央。

1.4 觀察指標(biāo) 比較兩組孕婦及新生兒血小板抗體陽性率,血小板抗體陽性與陰性孕婦復(fù)發(fā)性流產(chǎn)率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 ()表示,采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組孕婦血小板抗體陽性率比較 觀察組孕婦血小板抗體陽性率明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組孕婦血小板抗體陽性率比較［n(%)］

2.2 兩組新生兒血小板抗體陽性率比較 觀察組新生兒血小板抗體陽性率與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩組新生兒血小板抗體陽性率比較［n(%)］

2.3 血小板抗體陽性與血小板抗體陰性孕婦復(fù)發(fā)性流產(chǎn)率比較 62 例血小板抗體陽性孕婦中復(fù)發(fā)性流產(chǎn)15 例,復(fù)發(fā)性流產(chǎn)率為24.19%；1298 例血小板抗體陰性孕婦中復(fù)發(fā)性流產(chǎn)65 例,復(fù)發(fā)性流產(chǎn)率為5.01%；血小板抗體陽性孕婦復(fù)發(fā)性流產(chǎn)率明顯高于血小板抗體陰性孕婦,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 血小板抗體陽性與血小板抗體陰性孕婦復(fù)發(fā)性流產(chǎn)率比較(n,%)

3 討論

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是指連續(xù)≥2 次的自然流產(chǎn)。HLA 抗體阻斷抗體缺乏是反復(fù)流產(chǎn)的主要原因。人血小板表面有復(fù)雜的血型抗原,這些抗原是由遺傳決定的,是常染色體的顯性遺傳基因。通常分為兩類：一類是與其他細(xì)胞表面或組織共有的血型抗原,稱血小板相關(guān)抗原；另一類為血小板特異性抗原。血小板相關(guān)抗原有HLA-A、B 位點(diǎn)的抗原及紅細(xì)胞相關(guān)抗原,血小板特異性抗原目前被國際公認(rèn)的有5 個(gè)系統(tǒng)10 個(gè)抗原,抗血小板同種抗體是機(jī)體被血小板特異性抗原或HLA等相關(guān)免疫而產(chǎn)生的,一般是通過輸血、妊娠等形成。由妊娠免疫產(chǎn)生的血小板IgG 抗體可在妊娠14 周時(shí)通過胎盤屏障破壞胎兒血小板,造成胎兒或新生兒血小板驟減,引起反復(fù)自然流產(chǎn)或新生兒同種免疫血小板減少性紫癜,更有甚者會(huì)出現(xiàn)內(nèi)臟或中樞神經(jīng)受損、腦出血等［5］。因此,本研究擬檢測(cè)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)和新生兒血小板減少癥患者的血小板抗體情況,探討血小板抗體與反復(fù)性流產(chǎn)和新生兒免疫性血小板減少癥的關(guān)系,為臨床提供可靠的檢測(cè)指標(biāo),以便更好地為臨床和患者服務(wù)。在孕婦中檢測(cè)血小板抗體有助于預(yù)測(cè)流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn),分析反復(fù)性流產(chǎn)的原因,并預(yù)防新生兒的免疫性血小板減少癥［6］。其可以有效地減少不良分娩史和新生兒的發(fā)病率,從而提高優(yōu)生水平。

本次研究結(jié)果顯示,觀察組孕婦的血小板抗體陽性率顯著高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血小板抗體檢測(cè)對(duì)于有復(fù)發(fā)性流產(chǎn)史的孕婦尤為重要。其可以用作預(yù)測(cè)高危妊娠流產(chǎn)的敏感指標(biāo)。參照《母嬰血型不合引發(fā)的反復(fù)流產(chǎn)》中顯示,母嬰血型不一致造成的異基因免疫因子是引起復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的一個(gè)關(guān)鍵誘因,母嬰紅細(xì)胞血型抗體缺乏相容性,則是妊娠晚期出現(xiàn)流產(chǎn)的重要誘因。血小板同種抗體和母嬰血小板血型不符是造成早期流產(chǎn)的重要誘因。

本研究30 例觀察組新生兒中只有2 例血小板抗體陽性,陽性率為6.67%。因其受發(fā)病率的限制,選取的病例數(shù)較少,因此結(jié)果中觀察組新生兒血小板抗體陽性率與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。若需差異有對(duì)比性仍需收集大量的病例,實(shí)行進(jìn)一步的研究,如若不然便只會(huì)受到低概率發(fā)病率的限制,使得差異缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。新生兒血小板減少癥在臨床上屬于血液疾病,也是造成新生兒出血的一個(gè)重要誘因。通過研究發(fā)現(xiàn),對(duì)于新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房(NICU)患兒來說,患有新生兒血小板減少癥的幾率在15%～35%范圍內(nèi),其中早產(chǎn)兒、低體重兒等患病率更高［7］。新生兒血小板減少癥發(fā)病原因未知,一般包括很多復(fù)雜因素,盡管現(xiàn)階段還不明確,不過大部分學(xué)者強(qiáng)調(diào)：新生兒血小板減少癥的原因一般是由于破壞嚴(yán)重、感染、缺氧、免疫等造成的［8］。臨床治療技術(shù)的不斷提升對(duì)新生兒窒息、感染的早期診治發(fā)揮著積極作用,由此能夠明顯降低重癥新生兒血小板減少癥率。但對(duì)于新生兒血小板減少癥而言,其臨床表現(xiàn)比較隱匿,所以通過實(shí)驗(yàn)室檢查發(fā)現(xiàn),在對(duì)此疾病進(jìn)行診斷的臨床依據(jù)會(huì)隨著醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)的不斷升級(jí),新生兒免疫原因?qū)е碌难“褰档椭饾u受到人們的廣泛重視。對(duì)于發(fā)病原理、診斷技術(shù)、臨床救治、疾病防范等很多國家都展開了具體的研究與分析?，F(xiàn)今,血小板抗體檢測(cè)則是臨床治療與相關(guān)疾病的一個(gè)不可或缺的憑證,對(duì)于相關(guān)病患而言,如果血小板抗體呈陽性,可為其做配合型血小板輸注,或用免疫抑制劑、激素、血漿置換等方案給予救治。

綜上所述,血小板抗體檢測(cè)對(duì)于有復(fù)發(fā)性流產(chǎn)史的女性特別重要,為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)和新生兒免疫性血小板減少癥的診斷和治療提供可靠的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo),同時(shí)可有效減少不良的出生史和新生兒發(fā)病率,從而提高優(yōu)生和優(yōu)育水平,值得推廣應(yīng)用。由于本研究為在相關(guān)疾病的基礎(chǔ)上增加體外診斷檢驗(yàn),不會(huì)給患者帶來直接或間接危害,倫理技術(shù)角度易于實(shí)施。