王鋒 姜月紅 趙淼 夏似龍 董孜璞 周大宏

前列腺癌是現(xiàn)代社會男性發(fā)病率極高的一種惡性腫瘤,也是世界上引發(fā)男性死亡的第二種惡性腫瘤,疾病的發(fā)生在不同種族之間存在顯著差異,同時也受文化、社會及心理因素方面的影響,該種疾病的發(fā)病機制極為復雜,約50%的患者易發(fā)生轉(zhuǎn)移及侵襲,預后情況極差［1］。HIF-1α 是在缺氧情況下調(diào)控腫瘤細胞活力的一種重要轉(zhuǎn)錄因子,臨床多項研究證實,其在惡性腫瘤患者中多為高表達,起到維持腫瘤細胞代謝,促進新生血管形成的作用,使得腫瘤細胞適應缺氧的環(huán)境生存下來,促使腫瘤細胞發(fā)生生長、侵襲及轉(zhuǎn)移等生物學行為［2］。目前臨床研究已證實,HIF-1α 的基因多肽性與前列腺癌的患病風險存在一定關聯(lián),發(fā)現(xiàn)前列腺癌患者在rs11549467 基因位點發(fā)生轉(zhuǎn)變［3］,近年來不少報道認為HIF-1α 對前列腺癌的發(fā)生及發(fā)展起到關鍵性作用［4］,但關于HIF-1α 表達水平與前列腺癌術(shù)后進展風險的關系方面研究極少。鑒于此,以下通過免疫組織化學染色方法了解HIF-1α 在前列腺癌術(shù)后的表達水平,研討其與疾病進展風險關系,現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018 年2 月～2020 年5 月黑龍江省醫(yī)院收治的90 例前列腺疾病住院患者,根據(jù)前列腺組織性質(zhì)不同分為A 組(經(jīng)尿道前列腺電切術(shù)留取的石蠟包埋良性前列腺增生組織)和B 組(經(jīng)前列腺癌根治術(shù)留取的石蠟包埋前列腺癌組織),每組45 例。A 組患者年齡53～82 歲,平均年齡(68.02±5.31)歲。B 組患者年齡55～80 歲,平均年齡(67.34±5.34)歲；行前列腺癌根治術(shù)后6 周前列腺特異性抗原(PSA)水平<0.2 ng/ml,采集標本前均未接受過放療、化療或內(nèi)分泌治療,診斷均經(jīng)常規(guī)病理切片證實為前列腺癌。兩組患者年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 主要試劑 從福州邁新生物技術(shù)有限公司購買鼠抗人HIF-1α 單克隆抗體、二抗羊抗鼠免疫組化試劑盒及DAB 顯色試劑,HIF-1α 的稀釋度為1∶100。

1.3 HIF-1α 蛋白檢測 采用免疫組織化學染色方法,主要步驟為：采用10%甲醛將標本加以固定,采用乙醇脫水,石蠟包埋,切成4 μm 厚的切片,進行脫蠟,并在高溫高壓的環(huán)境下進行抗原修復,采用3%過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化物酶,采用兔血清封閉,并滴入一抗,置于4℃環(huán)境中過夜、二抗及鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶復合物,DAB 顯色、復染、封固。每批染色均設立陰性對照,其中以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗。采用癌旁良性組織的染色結(jié)果作為陰性對照。將顯色強度綜合評分。不顯色為陰性(-),顯示淺黃色記為(+),顯示棕黃色記為(++),顯示棕褐色記為(+++)；兩種檢測蛋白的免疫組化以細胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒標記為陽性,表達定位在細胞漿和細胞核。

1.4 觀察指標及判定標準 比較A 組、B 組HIF-1α蛋白陽性檢出率；比較不同術(shù)后臨床病理特征前列腺癌患者HIF-1α 表達情況,術(shù)后臨床病理特征包括年齡、病變部位(外周帶、移行帶)、Gleason 分級(低分化及中、高分化)、TNM 分期(Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、癌穿透被膜情況。Gleason 評分6～7 分為中、高分化前列腺癌,Gleason 評分8～10 分為低分化前列腺癌。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計學軟件對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差()表示,采用t 檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組HIF-1α 蛋白陽性檢出率比較 HIF-1α 在前列腺術(shù)后組織中均有表達,B 組HIF-1α 蛋白陽性檢出率為77.78%,明顯高于A 組的13.33%,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 不同術(shù)后臨床病理特征患者HIF-1α 表達情況比較 不同Gleason分級、TNM分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、癌穿透被膜患者HIF-1α 陽性率比較差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；不同年齡及病變部位患者HIF-1α陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表1 兩組HIF-1α 蛋白陽性檢出率比較［n,n(%)］

表2 不同術(shù)后臨床病理特征患者HIF-1α 表達情況比較［n(%)］

3 討論

前列腺癌是男性發(fā)病率極高的一種惡性腫瘤,發(fā)生部位主要集中在前列腺上皮組織,由于早期缺乏顯著特征,再加上我國對該種疾病普查力度的不足,使得疾病早期不易被發(fā)現(xiàn),多數(shù)患者確診時已發(fā)展到中晚期,易侵襲及轉(zhuǎn)移,預后情況極差［5］。

關于疾病的發(fā)病機制較為復雜,臨床認為HIF-1α 蛋白的表達與疾病的發(fā)生發(fā)展存在密切關聯(lián),HIF-1α 是一種轉(zhuǎn)錄因子,可起到調(diào)節(jié)細胞活力、促進新生血管產(chǎn)生、生長、凋亡、粘附的作用,其由α和β 亞單位組成［6］,其中α 作為調(diào)節(jié)子亞單位,決定HIF-1α 的活性,通過多種因素調(diào)節(jié),如氧張力、細胞因子及癌基因。HIF-1α 在多種癌細胞組織中過度表達,其通過HIF-1α 基因不斷適應低氧的生存環(huán)境［7］,基于HIF-1α 與惡性腫瘤術(shù)后進展風險的關系,不僅有助于了解疾病的預后情況,還能通過抑制HIF-1α 表達為疾病治療提供新的思路［8］。本次研究結(jié)果顯示,HIF-1α 在前列腺術(shù)后組織中均有表達,主要表達在細胞漿和細胞核,B 組HIF-1α 蛋白陽性檢出率為77.78%,明顯高于A 組的13.33%,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與鮑小招等［9］學者的研究結(jié)果具有一致性,可見HIF-1α 在前列腺癌術(shù)后患者中呈高表達,其參與前列腺整個細胞侵襲與浸潤過程,推測其在前列腺術(shù)后疾病進展中起到促進作用［10］。

本次研究結(jié)果顯示,Gleason 分級低分化患者HIF-1α 陽性率95.00%高于高、中級分化患者的64.00%,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),提示患者分化程度越低,HIF-1α 陽性率越高；TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期患者HIF-1α 陽性率88.89% 高于Ⅰ～Ⅱ期患者的61.11%,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),提示HIF-1α可預示疾病的分期,了解疾病的發(fā)展進展；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者HIF-1α 陽性率100.00%高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的65.52%,癌穿透被膜患者HIF-1α 陽性率94.44%高于無癌穿透被膜患者的66.67%,差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),提示HIF-1α 的表達水平與前列腺癌細胞向遠處淋巴轉(zhuǎn)移以及浸潤周圍組織風險有明顯的關系,可見HIF-1α 與前列腺癌術(shù)后進展密切相關,其過表達提示患者預后不良,可作為評估患者術(shù)后浸潤及轉(zhuǎn)移的重要指標［11,12］。而不同年齡及病變部位患者HIF-1α 陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。提示HIF-1α 與年齡及病變部位等生物特征無內(nèi)在聯(lián)系。本次研究僅從細胞水平方面著手,對HIF-1α 在前列腺癌中的表達水平進行分析,要得出更為科學的結(jié)論,還需要從基因方面作進一步探究。

綜上所述,前列腺癌術(shù)后HIF-1α 在患者組織中表達增強,其可能參與疾病的發(fā)生及發(fā)展過程,HIF-1α 表達增強可能與前列腺癌術(shù)后患者病情惡化有關,提示患者預后不佳,因此,可將HIF-1α 表達水平作為預測前列腺癌術(shù)后患者腫瘤進展風險的評估指標。