許智利，金爽，吳章，楊寶華，林強(qiáng)康，陳新國(guó)，陳玲瓏

（溫州市人民醫(yī)院 急診醫(yī)學(xué)科，浙江 溫州 325000）

0 引言

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是一種常見(jiàn)的消化道疾病，其中重型急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是當(dāng)前臨床治療的難癥之一，因其累計(jì)多個(gè)臟器損傷并已嚴(yán)重危及人類(lèi)生命，其占AP的5%～10%，病死率仍高達(dá)30%-50%[1]。因此，發(fā)病早期及時(shí)有效清除炎性介質(zhì)是預(yù)防多器官功能衰竭的關(guān)鍵。故本研究通過(guò)臨床分析急性胰腺炎患者在經(jīng)烏司他丁治療前和治療后外周血來(lái)源巨噬細(xì)胞的極化以及炎癥因子的表達(dá)情況，結(jié)合臨床治療效果以及實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)，為急性胰腺炎臨床分層治療提供理論依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 研究資料。選擇2018年1月至2020年12月于本院診治的40例急性胰腺炎患者，按隨機(jī)數(shù)字法將其均分為常規(guī)組（20例）和觀察組（20例）。其中常規(guī)組男13例，女7例；患者年齡26～76歲，平均（51.1±0.7）歲。觀察組男11例，女9例；患者年齡25～75歲，平均（50.3±0.6）歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)按照《中國(guó)急性胰腺炎診治指南（2013年，上海）》[2]，收集患者的實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果。兩組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法。常規(guī)組患者予以常規(guī)治療，主要方法為禁食禁水，胃腸減壓，充分補(bǔ)充液體，平衡體內(nèi)電解質(zhì)，應(yīng)用抗生素避免感染，解痙止痛，防止胰腺外分泌和胰酶抑制劑生長(zhǎng)抑素，H2受體拮抗劑或質(zhì)子泵抑制劑。觀察組患者在常規(guī)組治療基礎(chǔ)上予以烏司他丁10萬(wàn)U溶于50 g/L葡萄糖溶液250 mL內(nèi)靜脈滴注，每8小時(shí)1次，輸液速度為25 lag/h，持續(xù)5 d，病情改善后用量減半繼續(xù)治療5 d。共治療10 d。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)。①用無(wú)EDTA的膠原酶細(xì)胞消化細(xì)胞后，用生理鹽水清洗2次，加入100 ul PBS懸浮后，各加入5 ul的FITC-CD163、PE-CD11c和Cy2-CD206熒光抗體，避光染色15 min后，加入400 ulPBS混勻，上機(jī)檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)各組細(xì)胞的比例。②收集貼壁的巨噬細(xì)胞，加入Trizol后并按照試劑說(shuō)明書(shū)抽提總RNA，核酸-蛋白測(cè)定儀分析RNA的濃度以及純度，按照cDNA合成試劑盒說(shuō)明書(shū)操作程序，PCR儀上合成cDNA，檢測(cè)IL-1β、IRF-5、TNF-α、NF-kB、IL-10等基因mRNA水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件（SPSS 20.0版本）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對(duì)本研究中所得的巨噬細(xì)胞免疫表型以及相關(guān)炎癥因子的表達(dá)情況等計(jì)量資料（t）以及治療效果等計(jì)數(shù)資料（χ2）分別進(jìn)行對(duì)比，用（±s）、%分別表示，若P＜0.05，則表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后CD11c、CD206、CD163表達(dá)量比較。本研究結(jié)果顯示，兩組患者治療前CD11c、CD206、CD163表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與治療前相比，兩組患者治療5 d、10 d后CD11c、CD206、CD163表達(dá)量均有所提高，但觀察組低于常規(guī)組，兩組比較差異明顯有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2 兩組治療前后IL-1β、IRF-5、TNF-α、NF-kB、IL-10等基因mRNA水平比較。本研究結(jié)果顯示，兩組患者治療前IL-1β、IRF-5、TNF-α、NF-kB、IL-10等基因mRNA水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與治療前相比，兩組患者治療5 d、10 d后IL-1β、IRF-5、TNF-α水平有所下降，而IL-10、NF-kB水平有所提高，且觀察組均優(yōu)于常規(guī)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表1 兩組治療前后CD11c、CD206、CD163表達(dá)量情況（±s）

表1 兩組治療前后CD11c、CD206、CD163表達(dá)量情況（±s）

注：與治療前相比，＊P＜0.05；與對(duì)照組相比，#P＜0.05。

組別 例數(shù) CD11c CD206 CD163 CD11c CD206 CD163 CD11c CD206 CD163治療前 治療5 d 治療10 d常規(guī)組 20 20.89±10.57 60.43±5.16 63.08±3.2 46.89±2.43 73.79±4.81 95.56±1.76 68.57±2.59 76.63±9.34 97.59±2.18觀察組 20 21.16±11.16 60.42±5.17 62.76±3.1 44.72±2.41 70.61±6.90 91.92±1.73 63.93±1.75 74.57±9.48 96.26±2.48

表2 兩組治療前后基因mRNA水平情況（±s）

表2 兩組治療前后基因mRNA水平情況（±s）

注：與治療前相比，＊P＜0.05；與對(duì)照組相比，#P＜0.05。

組別 例數(shù) 觀察組 常規(guī)組治療前 治療5 d 治療10 d 治療前 治療5 d 治療10 d IL-1β 20 213.56±85.62 195.62±56.11 183.54±37.51 214.36±86.62 211.87±57.34 196.26±39.56 IRF-5 20 95.43±12.35 52.62±7.65 46.38±6.52 94.98±13.35 68.27±8.31 54.83±5.16 TNF-α 20 71.51±16.81 59.56±13.25 40.36±11.25 70.22±15.57 68.79±12.59 55.38±12.64 NF-kB 20 83.98±7.63 93.56±8.63 175.65±10.23 84.96±7.21 86.39±9.52 96.58±7.61 IL-10 20 44.59±6.13 59.68±9.74 88.65±12.51 45.13±6.12 48.05±8.26 72.58±7.55

3 討論

急性胰腺炎是一種常見(jiàn)的疾病，特別是重型胰腺炎具有高致死率，盡管烏司他丁聯(lián)合其他藥物治療急性胰腺炎具有一定的治療效果，但是是否影響巨噬細(xì)胞的極化尚未見(jiàn)報(bào)道。在巨噬細(xì)胞的極化過(guò)程中，受相關(guān)的調(diào)節(jié)因子的調(diào)控，研究發(fā)現(xiàn)IRF-5在M2巨噬細(xì)胞中高表達(dá)，通過(guò)抑制IRF-5的表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)胰腺炎模型中肺巨噬細(xì)胞的極化[3]。TNF-α、IL-1β、IL-6和MCP-1等前炎癥因子和DAMP分子的大量產(chǎn)生和釋放是SAP從胰腺局部病變迅速發(fā)展為全身炎癥反應(yīng)綜合征和多器官功能障礙綜合征的主要因素[4]。烏司他丁作為一種從人尿中提取精制的糖蛋白，含有143個(gè)氨基酸，屬蛋白酶抑制劑，能夠同時(shí)抑制胰蛋白酶、磷脂酶 A、透明質(zhì)酸酶及彈性蛋白酶等多種水解酶的活性；另外還可以穩(wěn)定溶酶體膜，具有抑制溶酶體酶和心肌抑制因子（MDF）的釋放、清除氧自由基及抑制炎癥介質(zhì)釋放的作用。本研究結(jié)果顯示，烏司他丁誘導(dǎo)的DC表型中CD11c、CD206、CD163表達(dá)量均有所提高，但觀察組低于對(duì)照組（P＜0.05），表明對(duì)巨噬細(xì)胞免疫有一定作用。同時(shí)烏司他丁對(duì)DC細(xì)胞因子IL-1β、IRF-5、TNF-α、IL-10、NF-kB水平均有所影響，表現(xiàn)為DC分泌IL-1β、IRF-5、TNF-α能力明顯受抑制，IL-10、NF-kB能力明顯受刺激。因此烏司他丁在抑制和刺激DC成熟方面具有一定作用。

綜上所述，巨噬細(xì)胞的活化在重型胰腺炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有著重要的作用，過(guò)抑制疾病早期的巨噬細(xì)胞活化可能成為抑制疾病進(jìn)展的重要靶點(diǎn)，具有較高的應(yīng)用意義。