魏文增，王 宮，趙寧寧，林榮坤，林穎烽，王光磊，陳耀金

(1福建省中醫(yī)藥科學(xué)院·福建 福州 350003；2福建醫(yī)科大學(xué)·福建 福州 350122；3福建中醫(yī)藥大學(xué)·福建 福州 350122；4福建省腫瘤醫(yī)院，福建醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院·福建 福州 350014)

復(fù)方參葛顆粒方是由人參、葛根、山藥、紅棗、桂圓、卡琪花蒂瑪?shù)冉M成，具有抗疲勞、抗氧化、調(diào)整血流、美容養(yǎng)顏等功效[1-2]。在臨床上主要用于乳腺氣血運(yùn)行不順、內(nèi)分泌紊亂等成年女性健康問題和美體缺陷，在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，從內(nèi)調(diào)和外養(yǎng)的角度促進(jìn)乳腺組織良性發(fā)育，調(diào)整女性內(nèi)環(huán)境以及調(diào)理氣血、月經(jīng)周期達(dá)到養(yǎng)生美容等功效。該方原采用水煎服用，在服用方式和保存等方面存在諸多不便。因此，為方便患者服用，擬開發(fā)為顆粒劑。采用醇水雙提法和正交試驗(yàn)優(yōu)選最佳顆粒制備工藝，為后續(xù)生產(chǎn)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 AE240S型電子分析天平：瑞士Mettler Toledo公司；KQ2200超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；DHG9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；HH-6恒溫水浴鍋：常州國華電器有限公司；R201D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：鞏義市英峪予華儀器廠；UV-3200紫外可見分光光度計(jì)：上海美普達(dá)儀器有限公司。

1.2 試藥 人參皂苷Re對照品：中國食品藥品研究院提供，批號(hào)：110754-201626)；生曬參(批號(hào)：160701)、玫瑰(批號(hào)：160401)、大棗(批號(hào)：16081101)：均購自安徽亳州浙皖中藥飲片股份有限公司；葛根(批號(hào)：160901)、山藥(批號(hào)：161101)：均購自福建海誠藥業(yè)有限公司。糊精：上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號(hào)：F1502021；乳糖：上海麥克林生化科技有限公司，批號(hào)：C10067064；可溶性淀粉：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20111220；均為藥用規(guī)格；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 顆粒劑的制備 按處方量稱取藥材，采用醇水雙提取工藝。人參、葛根(8倍量80% 乙醇，80 ℃ 回流提取3 次，45 min/次)[3-5]；山藥、紅棗、桂圓、卡琪花蒂瑪及醇提后的藥渣(8倍量水，煎煮2 次，1 h/次，提取結(jié)束前15 min，投入玫瑰)[6-7]，進(jìn)行提取、濃縮至稠浸膏，置80 ℃ 烘箱中干燥，粉碎后備用。浸膏加適量輔料，混合，按濕法制粒制軟材，過 14 目篩，60 ℃ 烘干，整粒，即得顆粒劑。

2.2 評價(jià)指標(biāo)

2.2.1 成型率 按2015 年版《中國藥典》附錄顆粒劑中粒度項(xiàng)下采用雙篩分法操作，能通過1 號(hào)篩與不能通過5號(hào)篩的顆粒為合格顆粒。計(jì)算公式如下[8]：成型率(%)= M1/M2×100%(M1：能通過1號(hào)篩和不能通過5號(hào)篩的顆粒重，M2：制得顆?？傊?。

2.2.2 溶化性 按2015年版《中國藥典》附錄0104項(xiàng)下溶化性，一定量顆粒，置于燒杯，倒入一定量熱水，攪拌，應(yīng)全部溶解或成混懸態(tài)[9]。

2.3 單因素考察

2.3.1 單一輔料選擇 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)、相關(guān)文獻(xiàn)[10]，按“2.1項(xiàng)下”取浸膏粉以藥輔比(1∶1.5)的比例分別與糊精、乳糖、可溶性淀粉，85% 乙醇潤濕，制備相應(yīng)的顆粒，“按2.2項(xiàng)下”考察。結(jié)果見表 1。糊精、乳糖作輔料成型率分別為92.10%、95.65%，且溶化性好；可溶性淀粉作賦形劑，成型率為87.50%，且軟材易粘連。由于乳糖優(yōu)于糊精，但乳糖價(jià)格較貴，將選擇其作混合輔料考察。

表1 單一輔料優(yōu)選

2.3.2 混合輔料選擇 不同比例糊精:乳糖(1∶1、2∶1、3∶1、4∶1)組成混合輔料。按“2.1項(xiàng)下”操作。結(jié)果見表 2。成型率隨糊精用量增加而增大，(4∶1)達(dá)93.48%；(1∶1、2∶1)制軟材時(shí)有硬塊，成型率為87.00%和90.15%。故選擇糊精:乳糖(4∶1)混合作輔料。

表2 混合輔料比例的優(yōu)選

2.3.3 潤濕劑濃度選擇 由于該浸膏粉具有很強(qiáng)的黏性，依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[11-12]及預(yù)試驗(yàn)，選擇不同濃度乙醇(75%、85%、95%)為潤濕劑，按“2.1項(xiàng)下”制粒和“2.2項(xiàng)下”指標(biāo)選擇最佳潤濕劑。結(jié)果見表 3。軟材黏性隨乙醇濃度增加而降低，且高濃度醇軟材含細(xì)粉多，低濃度醇軟材黏性大。故選擇85%乙醇作潤濕劑。

表3 不同濃度乙醇優(yōu)選

2.3.4 藥輔比選擇 根據(jù)日服用量及藥典規(guī)定(輔料量不超過浸膏粉2倍)。以浸膏粉與輔料比(1∶0.5、1∶1、1∶1.5)混勻后，按“2.1項(xiàng)下”制粒。結(jié)果見表 4。隨著輔料用量增加，成型率增大，且低輔料所制軟材黏性大。故選擇藥輔比為(1∶1.5)。

表4 不同藥輔比優(yōu)選

2.4 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化制備工藝

根據(jù)單因素考察結(jié)果，影響軟材、顆粒成型的主要因素：輔料種類、藥輔比、乙醇濃度，故以此為3個(gè)因素水平，顆粒成型率和溶化性為評價(jià)指標(biāo)。采用L9(34)進(jìn)行試驗(yàn)，因素水平表見表 5，試驗(yàn)結(jié)果見表 6，方差分析結(jié)果見表 7。

表5 因素水平表

由表 6經(jīng)R值直觀分析可知，對顆粒成型率影響順序?yàn)椋築>C>A，由表 7方差分析表明，B(藥浸膏粉:輔料)對顆粒制備有顯著性影響，而A和C無顯著差異。綜合分析，最佳制備工藝為A3B3C2，即糊精:乳糖(4∶1)，浸膏粉:輔料(1∶1.5)，乙醇濃度為85%。

表6 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果

表7 方差分析結(jié)果

2.5 驗(yàn)證性試驗(yàn) 按最佳工藝制備3批成品，以成型率、溶化性為指標(biāo)。成型率均值為92.83%，溶化性合格，與正交結(jié)果一致，表明該工藝可用于復(fù)方參葛顆粒的制備。

2.6 人參皂苷Re含量測定

2.6.1 人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[13-15]，稍作修改。精密稱取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品適量于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，得到人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)液。分別準(zhǔn)確吸取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL溶液于具塞試管中，水浴揮干，精確加入新制適量 2%香草醛-冰醋酸溶液、再加入適量高氯酸，置于60 ℃恒溫水浴中反應(yīng)15 min，取出，迅速置于冰浴2 min，加適量冰醋酸，混勻后以相應(yīng)的試劑作為空白，542 nm處測定各反應(yīng)液吸光度值，以吸光度值為縱坐標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程：y=26.655x-0.0139(R2=0.993)。

2.6.2 復(fù)方參葛顆粒含量測定 根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[16]，取“2.5項(xiàng)下” 3批顆粒適量，于研缽中研勻。分別稱取一定量樣品于錐形瓶中，加入適量80% 乙醇，超聲處理30 min，放冷，過濾，取續(xù)濾液適量，蒸至近干，加一定量水溶解，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。水溶液先后醋酸乙酯、水飽和正丁醇振搖萃取，萃取兩次，棄去醋酸乙酯液，將水飽和正丁醇提取液蒸干，加適量甲醇溶解，置于50 mL容量瓶定容，即為供試品溶液。分別取3批適量供試品溶液，按“2.6.1項(xiàng)下”進(jìn)行測定，結(jié)果見表8。

表8 復(fù)方參葛顆粒含量測定

2.6.3 人參總皂苷含量測定 取人參適量，進(jìn)行醇提，減壓回收醇提液，100 mL容量瓶定容，過濾，取一定量續(xù)濾液，按“2.6.2項(xiàng)下”處理后于50 mL容量瓶定容，即為人參總皂苷提取液。取適量人參總皂苷提取液，按“2.6.1項(xiàng)下”進(jìn)行測定，將吸光度值代入方程所得結(jié)果見表9。表明工藝制得的顆粒有效成分損失較少。

表9 人參醇提液含量測定

2.7 檢查

2.7.1 制粒及外觀 對制得的3 批顆粒在制備過程中軟材、制粒、制得的顆粒情況觀察記錄，結(jié)果見表 10，符合規(guī)定。

表10 復(fù)方參葛顆粒制粒、外觀考察

2.7.2 水分測定 按《中國藥典》2015版附錄通則0831測定。取3批顆粒適量，均勻平鋪于恒重稱量瓶中，厚約3 mm。稱重，打開瓶蓋在105 ℃電熱鼓風(fēng)機(jī)恒溫箱中干燥5 h。蓋好瓶蓋，置于干燥器中30 min，稱重后再干燥1 h，反復(fù)操作至恒重[17]。結(jié)果見表 11，符合規(guī)定。計(jì)算如下：

表11 顆粒水分測定結(jié)果

含水量%=(初始稱重重量—最后一次稱重重量)×100%/初始稱重重量。

2.7.3 休止角α的測定 采用固定漏斗法：用鐵架臺(tái)將三只漏斗串聯(lián)固定，使其最底下漏斗口距離水平桌面上的坐標(biāo)紙高度即為錐高(1.5 cm)[18]，測量坐標(biāo)紙上堆起的圓錐體其底部半徑 R。將制得3批顆粒從頂端漏斗壁緣倒入，當(dāng)顆粒在坐標(biāo)紙上形成圓錐體，其尖端接觸到最下面漏斗下口時(shí)為止。結(jié)果見表12。說明顆粒流動(dòng)性良好，易于分裝。計(jì)算公式如下：α=arctan(H/R)(H：錐高，R：錐底部半徑)

表12 休止角測定結(jié)果

3 討論

傳統(tǒng)中藥在煎煮中如脂溶性成分難以完全煎出，服藥量大，久置易發(fā)霉，攜帶不便等。本研究中，考慮到本方中人參皂苷發(fā)揮藥效的重要性，采用醇水雙提取法分別提取人參、葛根和山藥、紅棗、玫瑰、桂圓、卡琪花蒂瑪、人參與葛根藥渣(醇提后)，較為完全地提取有效成分，并制成顆粒劑，增加穩(wěn)定性，服用方便。

由于方中含皂苷、多糖等成分，導(dǎo)致浸膏粉易吸濕變軟、結(jié)塊。顆粒制備常用的輔料有糊精、乳糖和淀粉，不同程度改善浸膏的吸濕性。糊精溶解性良好，抗吸濕且成本低。乳糖化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，流動(dòng)性和成型好，但成本高且糖尿病患者不宜長期服用。淀粉易粘連，成型差。本研究通過試驗(yàn)，結(jié)合實(shí)際(輔料成本)，最終選乳糖、糊精按一定比例混合作為填充劑。

浸膏粉有一定的粘性，本試驗(yàn)根據(jù)軟材的粘度或松散程度，適量調(diào)整乙醇的用量(醇濃度與粘性成反比)，制得顆粒成型性好。

在驗(yàn)證性試驗(yàn)中，制得顆粒外觀均勻，成型率高，各項(xiàng)檢測指標(biāo)(溶化性、休止角、水分)均合格，具有簡單方便，操作穩(wěn)定，能較好的應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)，也為其它相似顆粒成型工藝的制備研究提供參考。