廉 華，陳玉蓉，李 梅，梁 梟，馬光恕

(1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)園藝園林學(xué)院，黑龍江 大慶 163319；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京 100081)

黃瓜(CucumissativusL.)是中國主要的設(shè)施種植蔬菜種類之一，聯(lián)合國糧農(nóng)組織2017年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，我國黃瓜種植面積為123.7萬hm2，產(chǎn)量為0.65億t，占世界總產(chǎn)量的77%[1]。由于黃瓜重茬面積越來越大，土傳病害特別是黃瓜枯萎病普遍發(fā)生，并且逐年加重[2]。黃瓜枯萎病是由尖孢鐮刀菌黃瓜專化型(Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum，F(xiàn)OC)引起的一種土傳真菌病害[3]，在我國各地黃瓜種植區(qū)均有發(fā)生，一般發(fā)病率在10%～20%，重者達(dá)80%～90%，重茬地甚至造成絕產(chǎn)[4]，成為危害黃瓜生產(chǎn)的主要病害之一。黃瓜枯萎病的防治一直以化學(xué)農(nóng)藥為主，隨著環(huán)境安全、食品安全問題的日益嚴(yán)峻，運(yùn)用生物手段預(yù)防和控制植物病害的發(fā)生、發(fā)展受到廣泛關(guān)注，利用木霉菌防治該病害成為防治黃瓜枯萎病的有效手段之一[5]。因此，如何選擇適宜的木霉菌株及類型成為木霉菌劑進(jìn)一步推廣應(yīng)用的最大問題，為木霉菌制劑開發(fā)具有重要意義。木霉菌(Trichodermaspp.)屬半知菌亞門、絲孢綱、叢梗孢目、叢梗孢科，其生存能力強(qiáng)，適應(yīng)性廣，能夠拮抗多種病原真菌[6]。利用木霉菌防治蔬菜土傳病害，已有較多的研究報(bào)道。如魯海菊等[7]研究發(fā)現(xiàn)，枇杷內(nèi)生木霉P3.9 菌株對枇杷根腐、石榴干腐、辣椒黃萎病、辣椒黑斑病、萬壽菊葉斑病、康乃馨根腐病和石榴枯萎病7種植物病原菌的抑菌率均高于60%，盆栽防治枇杷根腐病效果高達(dá)80%；劉明鑫等[8]研究發(fā)現(xiàn)，棘孢木霉菌T437處理可使黃瓜幼苗立枯病病情指數(shù)降至9.7，防治效果達(dá)到76.6%；宿曉琳等[9]利用擬康氏木霉 T886處理，黃瓜幼苗枯萎病的病情指數(shù)降至10.6，盆栽防治效果達(dá)到78.6%；李兆防[10]利用深綠木霉 T95 和球毛殼 ND35 兩種拮抗菌株以及二者的混合菌株進(jìn)行田間試驗(yàn)，結(jié)果表現(xiàn)為混合拮抗菌株 ND35+T95 組合對黃瓜立枯病和猝倒病的防治效果分別達(dá)到49.05%和 60.37%，均高于單一拮抗菌株深綠木霉 T95的防治效果(38.56%和 50.76%)。木霉菌不僅在生物防治方面有很重要的作用，大量的研究也表明，木霉菌株屬于重要的植物根際促生真菌(plant growth-promoting fungi，PGPF)[11]，能夠顯著促進(jìn)植物的生長發(fā)育，提高產(chǎn)量[12]。如施用深綠木霉可提高番茄根、莖和葉的干重，明顯提高番茄產(chǎn)量[13]；Ainhoa等[14]研究發(fā)現(xiàn)，利用木霉可通過調(diào)控激素水平促進(jìn)甜瓜幼苗期的生長；翟子鶴等[15]研究發(fā)現(xiàn)，綠色木霉菌劑、枯草芽孢桿菌菌劑和西瓜專用菌劑對西瓜的促生效果均較為顯著，株高、莖粗、地上部鮮質(zhì)量、根冠比、壯苗指數(shù)等指標(biāo)高于不加菌劑的對照。木霉菌在其生命過程中可以產(chǎn)生菌絲體、分生孢子和厚垣孢子3種繁殖體，目前國內(nèi)外已經(jīng)有50多種木霉商品化制劑[16]，如美國的哈茨木霉T22菌株和以色列的哈茨木霉T39菌株[17-18]，新西蘭的木霉制劑Trichodry和Trichoflow、俄羅斯的木霉制劑Myc01、韓國的木酶制劑YC458、西班牙的哈茨木霉和綠色木霉混合生防制劑TUSAL等，上述商品化制劑均為木霉菌分生孢子制劑或分生孢子與菌絲體混合制劑。與厚垣孢子制劑相比，菌絲體制劑和分生孢子制劑的貨架期較短、防治效果容易受到環(huán)境條件的影響。厚垣孢子是木霉菌抵抗逆境條件而產(chǎn)生的細(xì)胞壁加厚的孢子，與分生孢子相比，具有耐干燥、對土壤抑菌作用不敏感、存活期長，對病原微生物的生防效果不易受環(huán)境影響等優(yōu)點(diǎn)，因此木霉菌厚垣孢子制劑的商品化開發(fā)將成為木霉菌制劑的發(fā)展趨勢[19]。前人研究多從木霉菌的防病效果、促生作用及木霉菌制劑研發(fā)等方面開展，對木霉菌孢子不同類型施用效果的研究較少。本研究采用前期篩選出的對黃瓜枯萎病菌有較好拮抗作用的3株木霉菌，哈茨木霉菌T.harzianum809、擬康氏木霉菌T.pseudokoningii886和棘孢木霉菌T.asperellum525，研究木霉菌孢子不同類型施用后對黃瓜幼苗質(zhì)量、生理特性及對黃瓜枯萎病的防治效果，為黃瓜高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)栽培提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.3.1 供試黃瓜品種 長春密刺，購買于山東新泰市裕園種業(yè)有限公司。

1.3.2 供試培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基(PDA)：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂10 g，蒸餾水1 000 mL，pH 7.0～7.2。

馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基(PD)：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，蒸餾水1 000 mL，pH 7.0～7.2。LB 培養(yǎng)基(肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)：稱取蛋白胨10.0 g，酵母提取物5 g，氯化鈉10 g，加入1 L蒸餾水，煮沸，分裝在三角瓶中，每瓶250 mL，在每個(gè)三角瓶中加入5 g瓊脂，121℃，高壓蒸汽滅菌20 min。

尖孢鐮刀菌選擇培養(yǎng)基[20]：KH2PO41.0 g，KCl 0.5 g，MgSO47H2O 0.5 g，F(xiàn)e-Na2-EDTA 0.01 g，L-天門冬酰胺2.0 g，D-半乳糖20.0 g，蒸餾水1 000 mL(121℃滅菌、20 min)。

木霉選擇性培養(yǎng)基(PDAm)[21]：去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，氯霉素0.3 g，玫瑰紅(孟加拉紅)0.02 g，水1 000 mL。

木霉厚垣孢子發(fā)酵培養(yǎng)基[22]：誘導(dǎo)劑[23]60.0 g，酵母粉0.5 g，玉米粉1.0 g，葡萄糖1.0 g，玉米漿液3 mL，加水補(bǔ)足至100 mL，121℃滅菌20 min。

1.3.3 供試菌株 哈茨木霉菌Trichodermaharzianum809、擬康氏木霉菌Trichodermapseudokoningii886、棘孢木霉菌Trichodermaasperellum525，均由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所木霉菌研究組提供。黃瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum.sp.cucumebrium Owen)，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所土傳病害生物防治研究組提供。

1.3.4 供試土壤 供試土壤為草炭土，土壤過1 mm 篩后于烘箱中160℃高溫滅菌2 h，自然冷卻后繼續(xù)160℃烘2 h后放涼備用。

1.2 病原菌孢子懸浮液和木霉孢子粉劑的制備

1.2.1 病原菌孢子懸液的制備 將黃瓜枯萎病原菌接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基(PDA)上，28℃下培養(yǎng)3 d，從菌落邊緣取直徑5 mm的菌餅5塊，接種在含有100 mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基(PD)的250 mL三角瓶中，28℃、120 r·min-1搖床振蕩培養(yǎng)7 d，發(fā)酵液5 000 r·min-1離心10 min，沉淀后的孢子重新懸浮于無菌水中，得到病原菌孢子懸液。無菌水梯度稀釋后，涂布于尖孢鐮刀菌選擇培養(yǎng)基[20]，放置1 h后將培養(yǎng)平板倒置于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)3～4 d，計(jì)菌落數(shù)，計(jì)算孢子含量，按照試驗(yàn)要求計(jì)算應(yīng)用劑量。

1.2.2 木霉分生孢子粉劑的制備 將木霉菌809、886和525分別在馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基(PDA)上，28℃活化培養(yǎng)3 d，從菌落邊緣取直徑5 mm的菌餅，轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)7 d，用無菌水洗孢子后制成木霉孢子懸液。用無菌水梯度稀釋后，涂布于木霉選擇培養(yǎng)基上[21]，在25～28℃下倒置培養(yǎng)1～2d，計(jì)菌落數(shù)，計(jì)算木霉分生孢子含量。小麥粒用清水于室溫浸泡12h，撈出瀝水，裝入保鮮袋，每袋1kg，滅菌，冷卻后，接入木霉孢子懸液，25℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2～3周，待長滿孢子后，加無菌水沖洗，濾除麥粒，濾液中按10%加入硅藻土，混合后粉碎、抽濾、干燥，制成木霉分生孢子粉劑，木霉菌809、886和525粉劑濃度分別為2×109、1.6×108cfu·g-1和2.8×107cfu·g-1，按照試驗(yàn)要求計(jì)算應(yīng)用劑量。

1.2.3 木霉厚垣孢子粉劑的制備 將木霉菌809、886和525接入到滅菌的木霉菌厚垣孢子發(fā)酵培養(yǎng)基[20]中，于28℃、200 r·min-1搖床中發(fā)酵7 d。將發(fā)酵液用雙層紗布過濾，將濾液離心得到厚垣孢子，用無菌水反復(fù)沖洗3次，即得干凈的木霉菌厚垣孢子。用無菌水配制成孢子懸浮液，涂布于木霉選擇培養(yǎng)基上，在25℃～28℃下倒置培養(yǎng)1～2 d，記錄菌落數(shù)，計(jì)算木霉厚垣孢子含量。發(fā)酵液加入3%硅藻土，混勻、抽濾、干燥，制成木霉厚垣孢子粉劑，木霉菌809、886和525粉劑濃度分別為3.5×108、4.7×107cfu·g-1和1.47×108cfu·g-1，按照試驗(yàn)要求計(jì)算應(yīng)用劑量。

1.3 盆栽試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)在黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)農(nóng)學(xué)院教學(xué)基地現(xiàn)代化溫室內(nèi)進(jìn)行。取滅菌后試驗(yàn)土，裝入塑料育苗盤(34.5 cm×24 cm×11 cm)中，每盒土重2.5 kg。試驗(yàn)采用拌土的方式，分為不同木霉菌的厚垣孢子和分生孢子處理2組，即分別利用1×104cfu·g-1濃度的尖孢鐮刀菌菌絲懸液與1×104cfu·g-1濃度的木霉菌809、886、525厚垣孢子或1×106cfu·g-1濃度的分生孢子進(jìn)行組合試驗(yàn)，以單獨(dú)施用尖孢鐮刀菌菌絲懸液為對照。厚垣孢子組和分生孢子組各設(shè)置4個(gè)處理：(1)以1×104cfu·g-1濃度的尖孢鐮刀菌與1×104cfu·g-1濃度的哈茨木霉菌809厚垣孢子或1×106cfu·g-1濃度的分生孢子拌土；(2)以1×104cfu·g-1濃度的尖孢鐮刀菌與1×104cfu·g-1濃度的擬康氏木霉菌886厚垣孢子或1×106cfu·g-1濃度的分生孢子拌土；(3)以1×104cfu·g-1濃度的尖孢鐮刀菌與1×104cfu·g-1濃度的棘孢木霉菌525厚垣孢子或1×106cfu·g-1濃度的分生孢子拌土；(4)單獨(dú)將1×104cfu·g-1濃度的尖孢鐮刀菌拌入土中，設(shè)為對照(CK)。每個(gè)處理4盤，3次重復(fù)。

待黃瓜幼苗長至三葉一心時(shí)，進(jìn)行形態(tài)指標(biāo)、生理指標(biāo)和抗病性指標(biāo)的測定。

1.3.2 試驗(yàn)測定指標(biāo)與方法

(1)形態(tài)指標(biāo)測定方法 株高、莖基部到生長點(diǎn)之間的距離(cm)，用軟尺測定；莖粗、第一片葉下部節(jié)間中部直徑(mm)，用游標(biāo)卡尺測定；根體積：采用排水法測定；葉面積，采用稱重法測定，用葉片打孔器(1.5～2.0 cm)取下一定面積(A1，cm2)葉片，將它與其余的葉片分別烘干，求出打孔取樣的干葉質(zhì)量(W1，g)，稱出其余部分的干葉質(zhì)量(W2，g)，即可求出該葉片的面積(A，cm2)。計(jì)算公式為：

A=A1×(W1+W2)/W1

(2)植株生長量測定方法。測定植株全株鮮質(zhì)量：植株利用清水反復(fù)沖洗，再用吸水紙吸干，用分析天平測定植株鮮質(zhì)量。

(3)生理指標(biāo)測定方法。葉綠素含量采用丙酮乙醇提取法測定；根系活力采用α—萘胺氧化法測定；可溶性糖含量采用蒽酮比色法測定；可溶性蛋白含量采用考馬斯亮蘭G-250染色法測定。

(4)抗病性指標(biāo)測定方法?？共⌒灾笜?biāo)包括植株成活率、發(fā)病率、病情指數(shù)、防治效果。

植株成活率和發(fā)病率分別為播種后14 d各處理成活株數(shù)和發(fā)病株數(shù)占調(diào)查總株數(shù)的百分比。

黃瓜苗期枯萎病參照張素平的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[24]，病情指數(shù)參照宗兆鋒和康振生[25]的計(jì)算方法。

0級(jí)：無癥狀；1級(jí)：真葉、子葉黃化或萎蔫面積不超過總面積的50%；2級(jí)：真葉、子葉黃化或萎蔫面積超過總面積的50%；3級(jí)：葉片萎蔫或枯死，僅生長點(diǎn)存活；4級(jí)：全株嚴(yán)重萎蔫，以致枯死。

病情指數(shù)= ∑(病級(jí)株數(shù)×代表級(jí)數(shù))/(植株總數(shù)×最高代表級(jí)值)×100

防治效果 = (對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/ 對照病情指數(shù)×100

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

利用Microsoft Excel 2007軟件進(jìn)行圖表制作，利用DPS 7.05進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同類型木霉菌孢子處理對黃瓜幼苗形態(tài)和鮮質(zhì)量的影響

當(dāng)黃瓜幼苗長至三葉一心時(shí)，分別測定不同木霉分生孢子和厚垣孢子對黃瓜幼苗形態(tài)和鮮質(zhì)量指標(biāo)，結(jié)果見表1，對厚垣孢子而言，與CK(即只接種1×104cfu·g-1濃度的尖孢鐮刀菌)相比，施用1×104cfu·g-1濃度的哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886以及棘孢木霉菌525均提高了黃瓜幼苗株高、莖粗、根體積、葉面積、全株鮮質(zhì)量，其中以擬康氏木霉菌886處理效果最佳，其次是哈茨木霉菌809，但哈茨木霉菌809與棘孢木霉菌525之間差異不顯著；3種木霉菌厚垣孢子處理下的黃瓜幼苗株高、莖粗、根體積、葉面積、全株鮮質(zhì)量均顯著高于CK，說明其對枯萎病菌具有抑制作用，且促進(jìn)了黃瓜幼苗的生長。其中擬康氏木霉菌886、哈茨木霉菌809、棘孢木霉菌525處理下的株高分別較CK增加85.33%、61.63%和53.95%；莖粗分別較CK增加108.43%、102.81%和98.31%；根體積分別較CK增加235.29%、158.82%和129.41%；葉面積分別較CK增加144.38%、112.32%和92.27%；全株鮮質(zhì)量分別較CK增加272.32%、240.18%和227.68%。

表1 不同類型木霉菌孢子處理對黃瓜形態(tài)指標(biāo)和鮮質(zhì)量的影響

對分生孢子而言，與CK相比，施用1×106cfu·g-1濃度的哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886以及棘孢木霉菌525均提高了黃瓜幼苗株高、莖粗、根體積、葉面積、全株鮮質(zhì)量，其中以擬康氏木霉菌886處理效果最佳，其次是棘孢木霉菌525，但棘孢木霉菌525與哈茨木霉菌809之間差異不顯著；3種木霉菌分生孢子處理下的黃瓜幼苗株高、莖粗、根體積、葉面積、全株鮮質(zhì)量均顯著高于CK，說明其對枯萎病菌具有抑制作用，且促進(jìn)了黃瓜幼苗的生長。其中擬康氏木霉菌886、棘孢木霉菌525、哈茨木霉菌809處理下的株高分別較CK增加58.24%、48.42%和41.65%；莖粗分別較CK增加100.00%%、85.96%和79.78%；根體積分別較CK增加147.06%、105.88%和88.24%；葉面積分別較CK增加98.72%、72.22%和58.30%；全株鮮質(zhì)量分別較CK增加191.07%、142.86%和136.61%。

對同一木霉菌厚垣孢子和分生孢子處理的效果而言，黃瓜幼苗形態(tài)和鮮質(zhì)量指標(biāo)均表現(xiàn)為厚垣孢子處理高于分生孢子處理，但在不同木霉菌之間有一定差異。

2.2 不同類型木霉菌孢子處理對黃瓜幼苗生理特性的影響

2.2.1 不同類型木霉菌孢子處理對黃瓜幼苗葉綠素含量的影響 當(dāng)黃瓜幼苗長至三葉一心時(shí)，分別測定不同木霉分生孢子和厚垣孢子處理下黃瓜幼苗葉片的葉綠素含量，結(jié)果見圖1，對厚垣孢子而言，與CK相比，哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886以及棘孢木霉菌525施用下的黃瓜幼苗葉綠素含量均顯著升高，其中以擬康氏木霉菌886處理效果最佳，其顯著高于哈茨木霉菌809和棘孢木霉菌525，但哈茨木霉菌809與棘孢木霉菌525之間差異不顯著；3種木霉菌厚垣孢子處理下的黃瓜幼苗葉綠素含量均顯著高于CK，說明其對枯萎病菌具有抑制作用，且改善了黃瓜幼苗葉片生理活性。其中擬康氏木霉菌886、哈茨木霉菌809、棘孢木霉菌525處理下的葉綠素含量分別較CK增加97.47%、71.20%和59.43%。

對分生孢子而言，與CK相比，哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886以及棘孢木霉菌525施用下的黃瓜幼苗葉綠素含量均顯著升高，其中以擬康氏木霉菌886處理效果最佳，其顯著高于棘孢木霉菌525和哈茨木霉菌809處理，但棘孢木霉菌525和哈茨木霉菌809處理之間差異不顯著；3種木霉菌分生孢子處理下的黃瓜幼苗葉綠素含量均顯著高于CK，其中擬康氏木霉菌886、棘孢木霉菌525、哈茨木霉菌809處理下的葉綠素含量分別較CK增加77.46%、54.33%和49.03%。

2.2.2 不同類型木霉菌孢子處理對黃瓜幼苗根系活力的影響 當(dāng)黃瓜幼苗長至三葉一心時(shí)，分別測定不同木霉分生孢子和厚垣孢子下黃瓜幼苗的根系活力，結(jié)果見圖2，對厚垣孢子而言，與CK相比，哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886以及棘孢木霉菌525施用下的黃瓜幼苗根系活力均顯著升高，其中以擬康氏木霉菌886處理效果最佳，其顯著高于哈茨木霉菌809和棘孢木霉菌525處理，但哈茨木霉菌809與棘孢木霉菌525處理之間差異不顯著；3種木霉菌厚垣孢子處理下的黃瓜幼苗根系活力均顯著高于CK，說明其對枯萎病菌具有抑制作用，且改善了黃瓜幼苗根系生理活性。其中擬康氏木霉菌886、哈茨木霉菌809、棘孢木霉菌525處理下的根系活力分別較CK增加86.05%、60.27%和49.75%。

對分生孢子而言，與CK相比，哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886以及棘孢木霉菌525施用下的黃瓜幼苗根系活力均顯著升高，其中以擬康氏木霉菌886處理效果最佳，其顯著高于棘孢木霉菌525和哈茨木霉菌809，但棘孢木霉菌525和哈茨木霉菌809處理之間差異不顯著；3種木霉菌分生孢子處理下的黃瓜幼苗根系活力均顯著高于CK，其中擬康氏木霉菌886、棘孢木霉菌525、哈茨木霉菌809處理下的葉綠素含量分別較CK增加65.84%、45.87%和38.26%。

2.2.3 不同類型木霉菌孢子處理對黃瓜幼苗葉片可溶性糖含量的影響 當(dāng)黃瓜幼苗長至三葉一心時(shí)，分別測定不同木霉分生孢子和厚垣孢子下黃瓜幼苗葉片可溶性糖含量，結(jié)果見圖3。對厚垣孢子而言，與CK相比，哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886以及棘孢木霉菌525施用下的黃瓜幼苗葉片可溶性糖含量均顯著升高，其中以擬康氏木霉菌886處理效果最佳，其顯著高于哈茨木霉菌809和棘孢木霉菌525，但哈茨木霉菌809與棘孢木霉菌525之間差異不顯著；3種木霉菌厚垣孢子處理下的黃瓜幼苗葉片可溶性糖含量均顯著高于CK，說明其對枯萎病菌具有抑制作用，且改善了黃瓜幼苗葉片生理活性。其中擬康氏木霉菌886、哈茨木霉菌809、棘孢木霉菌525處理下的葉片可溶性糖含量分別較CK增加172.49%、119.59%和112.43%。

對分生孢子而言，與CK相比，哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886以及棘孢木霉菌525施用下的黃瓜幼苗葉片可溶性糖含量均顯著升高，其中以擬康氏木霉菌886處理效果最佳，其顯著高于棘孢木霉菌525和哈茨木霉菌809處理，但棘孢木霉菌525和哈茨木霉菌809處理之間差異不顯著；3種木霉菌分生孢子處理下的黃瓜幼苗葉片可溶性糖含量均顯著高于CK，其中擬康氏木霉菌886、棘孢木霉菌525、哈茨木霉菌809處理下的葉片可溶性糖含量分別較CK增加102.66%、57.11%和47.76%。

2.2.4 不同類型木霉菌孢子對黃瓜幼苗葉片可溶性蛋白含量的影響 當(dāng)黃瓜幼苗長至三葉一心時(shí)，分別測定不同木霉分生孢子和厚垣孢子下黃瓜幼苗葉片可溶性蛋白含量，結(jié)果見圖4，對厚垣孢子而言，與CK相比，哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886以及棘孢木霉菌525施用下的黃瓜幼苗葉片可溶性蛋白含量均顯著升高，其中以擬康氏木霉菌886處理效果最佳，其顯著高于哈茨木霉菌809和棘孢木霉菌525處理，但哈茨木霉菌809與棘孢木霉菌525處理之間差異不顯著；3種木霉菌厚垣孢子處理下的黃瓜幼苗葉片可溶性蛋白含量均顯著高于CK，說明其對枯萎病菌具有抑制作用，且改善了黃瓜幼苗葉片生理活性。其中擬康氏木霉菌886、哈茨木霉菌809、棘孢木霉菌525處理下的葉片可溶性蛋白含量分別較CK增加201.91%、162.01%和150.42%。

對分生孢子而言，與CK相比，哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886以及棘孢木霉菌525施用下的黃瓜幼苗葉片可溶性蛋白含量均顯著升高，其中以擬康氏木霉菌886處理效果最佳，其顯著高于棘孢木霉菌525和哈茨木霉菌809處理，但棘孢木霉菌525和哈茨木霉菌809處理之間差異不顯著；3種木霉菌分生孢子處理下的黃瓜幼苗葉片可溶性蛋白含量均顯著高于CK，其中擬康氏木霉菌886、棘孢木霉菌525、哈茨木霉菌809處理下的葉片可溶性蛋白含量分別較CK增加146.79%、113.69%和103.58%。

對同一木霉菌厚垣孢子和分生孢子處理的效果而言，黃瓜幼苗葉綠素含量、根系活力、葉片可溶性糖含量和可溶性蛋白含量均表現(xiàn)為厚垣孢子處理高于分生孢子處理，其中哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886、棘孢木霉菌525厚垣孢子處理葉綠素含量分別高出分生孢子處理14.88%、11.28%和3.30%；根系活力則分別高出15.92%、12.19%和2.66%；可溶性糖含量分別高出48.61%、34.46%和35.21%；可溶性蛋白含量分別高出28.70%、22.34%和17.19%。

2.3 不同類型木霉菌孢子處理對黃瓜枯萎病盆栽試驗(yàn)防治效果的影響

當(dāng)黃瓜幼苗長至三葉一心時(shí)，調(diào)查不同木霉分生孢子和厚垣孢子下黃瓜幼苗的發(fā)病率和發(fā)病情況，計(jì)算病情指數(shù)及盆栽防治效果，結(jié)果如表2，對厚垣孢子而言，與CK相比，哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886以及棘孢木霉菌525施用下黃瓜幼苗的發(fā)病率、病情指數(shù)均顯著低于CK，其中擬康氏木霉菌886處理最低，其顯著低于哈茨木霉菌809和棘孢木霉菌525處理，且后二者之間差異不顯著；而對于防治效果，擬康氏木霉菌886處理最高，達(dá)到81.46%，顯著高于哈茨木霉菌809和棘孢木霉菌525處理，且后二者之間差異不顯著。對分生孢子而言，與CK相比，哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886以及棘孢木霉菌525施用下黃瓜幼苗的發(fā)病率、病情指數(shù)均顯著低于CK，擬康氏木霉菌886發(fā)病率最低，但擬康氏木霉菌886與棘孢木霉菌525之間差異不顯著，且二者均顯著低于哈茨木霉菌809；擬康氏木霉菌886病情指數(shù)最低，其顯著低于哈茨木霉菌809和棘孢木霉菌525處理，而哈茨木霉菌809和棘孢木霉菌525病情指數(shù)之間差異不顯著；以防治效果而言，擬康氏木霉菌886處理最高，達(dá)到78.32%，其顯著高于哈茨木霉菌809和棘孢木霉菌525處理，且后二者之間差異不顯著。對同一木霉菌厚垣孢子和分生孢子處理的盆栽防治效果而言，3種木霉均表現(xiàn)為厚垣孢子處理高于分生孢子處理。

表2 不同類型木霉菌孢子處理對黃瓜枯萎病防效的影響

3 討 論

木霉是目前應(yīng)用最為廣泛的生防真菌之一，對腐霉菌、立枯絲核菌、鐮刀菌、灰霉病菌、白絹病菌等引起的植物病害具有良好的防治作用[26]。利用木霉菌防治土傳病害已有較多的研究，如莊敬華等[27]報(bào)道了黃瓜幼苗經(jīng)綠色木霉(T.viride)T23分生孢子和厚垣孢子處理后，黃瓜枯萎病的病情指數(shù)由33.69分別降至13.12和10.28；覃柳燕等[28]報(bào)道了香蕉經(jīng)棘孢木霉菌株P(guān)Z6盆栽試驗(yàn)處理后，病情指數(shù)為37.50，防治效果為48.28%；張晶晶等[29]采用盆栽試驗(yàn)法比較了木霉Trichodermaspp.厚垣孢子和分生孢子制劑對黃瓜灰霉病防效的差異，在噴施后7 d和12 d厚垣孢子的防效分別為98.80%、90.12%，分生孢子的防效則分別為89.02%和72.09%，厚垣孢子的防效均顯著高于分生孢子制劑。而本研究中的3株木霉菌即哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886、棘孢木霉菌525，對黃瓜枯萎病的防效均高于66%，病情指數(shù)降低到17以下；3種木霉菌厚垣孢子的防效均高于分生孢子，擬康氏木霉菌886厚垣孢子的防效最高，達(dá)到81.46%，與以上研究結(jié)果相類似，只是病情指數(shù)和防效略有差異。

木霉菌不僅能防治各類植物的土傳病害，還具有促進(jìn)植物生長、提高植物生理活性等功能，從而達(dá)到對植物的防病促生作用。如張春秋等[30]利用棘孢木霉T.asperellum525、哈茨木霉T.harzianum610和擬康氏木霉T.pseudokoningii886處理黃瓜，3種木霉均可以提高黃瓜幼苗生理指標(biāo)、促進(jìn)幼苗生長，其中以擬康氏木霉T.pseudokoningii886促進(jìn)效果最強(qiáng)，黃瓜葉綠素含量、硝態(tài)氮含量、硝酸還原酶活性、根系活力、根系總吸收面積、根系活躍吸收面積、根系比表面積增加幅度分別達(dá)到38.7%～49.5%、32.1%～33.6%、29.5%～66.3%、10.8%～21.5%、19.6%～23.5%、17.9%～25.0%和4.9%～13.1%，株高、莖粗和全株鮮質(zhì)量增加幅度分別達(dá)到20.7%～28.8%、29.7%～35.1%和10.0%～10.70%；楊興堂等[31]研究發(fā)現(xiàn)棘孢木霉ACCC30536能改善黃花蒿的光合能力，促進(jìn)干物質(zhì)積累，從而提高其葉的產(chǎn)量；姜傳英等[32]研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)棘孢木霉誘導(dǎo)后，山新楊樹苗株高、地徑及生物量等均有不同程度增加，并能有效提高山新楊的光合能力，促進(jìn)其生長。而本研究中，與對照相比，哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886、棘孢木霉菌525分生孢子或厚垣孢子處理黃瓜幼苗后，其株高、莖粗、根體積、葉面積、全株鮮質(zhì)量均顯著增高，同一木霉厚垣孢子處理下的效果均高于分生孢子處理，其中以擬康氏木霉菌886厚垣孢子增加幅度最高，其對黃瓜幼苗株高、莖粗、根體積、葉面積、全株鮮質(zhì)量的增加幅度分別達(dá)到85.33%、108.43%、235.29%、144.38%和272.32%；同時(shí)，可以看到，哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886、棘孢木霉菌525分生孢子或厚垣孢子處理亦能提高黃瓜幼苗根系活力和葉片葉綠素、可溶性糖、可溶性蛋白含量，同一木霉厚垣孢子處理效果均高于分生孢子處理，且以擬康氏木霉菌886促進(jìn)效果最顯著，擬康氏木霉菌886厚垣孢子對黃瓜幼苗根系活力、葉片葉綠素、可溶性糖、可溶性蛋白含量增加幅度分別達(dá)到86.05%、97.47%、172.49%和201.91%，與前人研究結(jié)果相類似。木霉之所以具有促生作用，國內(nèi)外學(xué)者也進(jìn)行了相關(guān)研究，如Mazhabi等[33]證實(shí)了木霉菌可以通過產(chǎn)生吲哚乙酸(IAA)來促進(jìn)植株生長；Osiewaz[34]在木霉的代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)赤霉素(GA3)，并證實(shí)其能夠顯著促進(jìn)植株生長；Valérie等[35]的研究指出，哈茨木霉的代謝產(chǎn)物中含有IAA，能有效促進(jìn)溫室番茄幼苗根系的生長，番茄產(chǎn)量也得到相應(yīng)的提高；Cai等[36]從哈茨木霉SQR-T037的代謝產(chǎn)物中分離得到植物生長調(diào)節(jié)因子harzianolide，在盆栽試驗(yàn)中驗(yàn)證得到在harzianolide濃度為0.1 ppm時(shí)能顯著促進(jìn)番前幼苗生長，其干質(zhì)量是對照組的2.5倍。本研究探討木霉菌分生孢子和厚垣孢子對黃瓜幼苗生長、生理特性和枯萎病的盆栽試驗(yàn)防治效果，與大田試驗(yàn)存在一定的差異，因此，木霉菌對黃瓜生產(chǎn)的田間影響效果需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

哈茨木霉菌809、擬康氏木霉菌886、棘孢木霉菌525分生孢子和厚垣孢子通過改善黃瓜幼苗生理代謝活性，提高了幼苗質(zhì)量，增強(qiáng)了對黃瓜枯萎病的抗性；以擬康氏木霉菌886厚垣孢子應(yīng)用效果最好，對黃瓜枯萎病的防效達(dá)到 81.46%，黃瓜幼苗株高、莖粗、根體積、葉面積、全株鮮質(zhì)量分別較CK增加了85.33%、108.43%、235.29%、144.38%和272.32%，黃瓜幼苗葉綠素含量、根系活力、葉片可溶性糖含量、葉片可溶性蛋白含量分別較CK增加了97.47%、86.05%、172.49%和201.91%。