賈珂珂， 孫文苑， 聶 睿， 崔麗艷

（北京大學(xué)第三醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100191）

免疫比濁法是將液相內(nèi)的沉淀反應(yīng)與現(xiàn)代光學(xué)儀器和自動(dòng)分析技術(shù)相結(jié)合的一種分析技術(shù)，常用方法為免疫散射比濁法和免疫透射比濁法。免疫透射比濁法普遍用于全自動(dòng)生化分析儀，具有自動(dòng)化程度高、分析時(shí)間短、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，然而在特定情況下，其測(cè)定結(jié)果受到一些干擾因素的影響。在生化分析儀上應(yīng)用的免疫透射比濁法主要為膠乳凝集免疫比濁法（latex agglutination turbidimetric immunoassay，LTIA）和顆粒增強(qiáng)免疫比濁法（particle-enhanced turbidimetric immunoassay，PETIA）。常見(jiàn)的溶血、脂血、黃疸等因素以及類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF）等自身抗體、M蛋白、嗜異性抗體等均會(huì)對(duì)免疫透射比濁法產(chǎn)生干擾，這些干擾因素可導(dǎo)致待測(cè)物的結(jié)果出現(xiàn)假性升高或降低，如果未被識(shí)別、糾正或提示臨床，就可能會(huì)給臨床診斷或治療監(jiān)測(cè)提供錯(cuò)誤的信息，導(dǎo)致不良事件的發(fā)生[1]。本文主要探討了免疫透射比濁法常見(jiàn)的干擾類型、干擾識(shí)別及應(yīng)對(duì)策略。

1 樣本性狀的干擾

免疫透射比濁法可通過(guò)設(shè)置雙波長(zhǎng)、樣本空白、樣本自動(dòng)稀釋等方式減少干擾因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，其對(duì)溶血、脂血、黃疸的抗干擾能力優(yōu)于免疫散射比濁法[2]。對(duì)于相同的檢測(cè)項(xiàng)目，不同檢測(cè)系統(tǒng)的免疫透射比濁法對(duì)溶血、脂血、黃疸的抗干擾能力有差異，需要具體評(píng)估。儀器如果能自動(dòng)檢測(cè)血清指數(shù)，如溶血指數(shù)（hemolytic index，HI）、脂血指數(shù)（lipemic index，LI）和黃疸指數(shù)（icteric index，II），建議選擇合適的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)置相應(yīng)的警告值，以便給臨床決策提供可靠的信息[3]。

1.1 溶血

溶血對(duì)免疫透射比濁法的干擾主要來(lái)自血紅蛋白（hemoglobin，Hb）本身吸光度（A）值的干擾。Hb主要在415、540和570 nm有較強(qiáng)的吸收峰[4]，如果待測(cè)物的檢測(cè)波長(zhǎng)也在540 nm，那么溶血產(chǎn)生的Hb就會(huì)影響反應(yīng)的A值。夏良裕等[3]評(píng)價(jià)了溶血對(duì)41個(gè)生化免疫項(xiàng)目的影響[檢測(cè)儀器為AU5800全自動(dòng)生化分析儀（簡(jiǎn)稱AUS5800，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司），試劑來(lái)自多個(gè)廠商]，其中14個(gè)項(xiàng)目采用免疫透射比濁法檢測(cè)，結(jié)果顯示，3個(gè)溶血組的免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）M、前白蛋白（prealbumin，PA）和RF結(jié)果均低于對(duì)照組（P＜0.05），其他項(xiàng)目與對(duì)照組比較，結(jié)果差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）或僅個(gè)別結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；綜合考慮，RF的溶血警告指數(shù)設(shè)置為3（重度溶血，Hb為2.0～2.99 g/L），其他13個(gè)免疫透射比濁法項(xiàng)目的溶血警告指數(shù)設(shè)置為4（嚴(yán)重溶血，Hb 3～5 g/L），當(dāng)溶血指數(shù)達(dá)到相應(yīng)警告指數(shù)時(shí)，溶血對(duì)該項(xiàng)目的干擾可判斷為有臨床意義。彭鳳等[2]比較了免疫透射比濁法和免疫散射比濁法檢測(cè)IgG、IgM和C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）的抗干擾能力，當(dāng)Hb為9.9、29.8 μmol/L時(shí)對(duì)免疫散射比濁法有明顯干擾，而對(duì)免疫透射比濁法均無(wú)明顯干擾。劉蕊等[5]的研究結(jié)果顯示，Hb濃度越高，免疫透射比濁法檢測(cè)尿白蛋白時(shí)受干擾的程度越高。

1.2 黃疸

膽紅素對(duì)免疫透射比濁法的干擾主要是由膽紅素及其衍生物在特定波長(zhǎng)下產(chǎn)生的本底對(duì)反應(yīng)A值的干擾引起的。膽紅素遇光和熱不穩(wěn)定，可生成膽綠素、膽褐素等衍生物，在360 nm及600～900 nm處形成新的吸收峰，造成吸收曲線漂移，因此雙波長(zhǎng)分析對(duì)消除本底的效果有時(shí)會(huì)不理想[6]。

不同的商品化試劑盒抗膽紅素干擾的能力不同[7-9]。采用免疫透射比濁法和免疫散射比濁法檢測(cè)IgG、IgM和CRP時(shí)，膽紅素對(duì)這2種方法均無(wú)明顯干擾[2]。劉蕊等[5]的研究結(jié)果顯示，膽紅素對(duì)免疫透射比濁法和免疫散射比濁法檢測(cè)尿白蛋白均呈明顯正干擾，當(dāng)尿膽紅素濃度為16.85 μmol/L（相當(dāng)于“1+”）時(shí)，對(duì)免疫透射比濁法的干擾率為22.94%，對(duì)免疫散射比濁法的干擾率為15.11%。另外，SIMONSON等[10]的研究結(jié)果顯示，膽紅素可干擾兔抗人單抗，而對(duì)鼠抗人單抗無(wú)影響。

1.3 脂血

有脂濁的血清樣本中含有大量的乳糜微粒和極低密度脂蛋白，其對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾主要是由于乳糜微粒具有光散射的特性，會(huì)產(chǎn)生濁度，從而影響反應(yīng)的A值或使產(chǎn)物的顏色發(fā)生變化。分光光度比色法、免疫透射比濁法、免疫散射比濁法均會(huì)受脂濁的影響，且受干擾的程度與濁度相關(guān)。

有研究結(jié)果顯示，當(dāng)檢測(cè)IgG、IgM和CRP時(shí)，免疫透射比濁法對(duì)脂濁的抗干擾能力優(yōu)于免疫散射比濁法[2]。國(guó)秀芝等[7]比較了3種檢測(cè)胱抑素C（cystatin C，Cys C）的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法試劑，以±10%為判斷標(biāo)準(zhǔn)，乳糜濁度≤6 200 FTU時(shí)，對(duì)試劑B、C均無(wú)明顯干擾；試劑A受干擾較明顯，僅在乳糜濁度≤1 240 FTU時(shí)無(wú)明顯干擾；對(duì)35份乳糜血清樣本采用高速離心處理后，檢測(cè)下層清亮血清，試劑C的所有檢測(cè)結(jié)果升高，符合預(yù)期；試劑B的結(jié)果有升有降，離心前后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；試劑A的結(jié)果下降，較離心前平均降低8.31%；原因可能與試劑A抗體包被的微粒子顆粒的大小有關(guān)，或與外源性乳糜顆粒和內(nèi)源性乳糜微粒的成分及顆粒大小不同有關(guān)。

1.4 樣本性狀的識(shí)別與應(yīng)對(duì)策略

目前，對(duì)樣本性狀的識(shí)別方法主要為肉眼識(shí)別或儀器自動(dòng)檢測(cè)血清指數(shù)。肉眼識(shí)別的方式依賴實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的主觀判斷，不能定量，樣本量較大時(shí)易疏漏，因此有較大缺陷。若采用血清指數(shù)方式識(shí)別樣本性狀，應(yīng)關(guān)注血清警告指數(shù)的設(shè)置。儀器和試劑廠商也應(yīng)在試劑說(shuō)明書(shū)中提供更多關(guān)于血清指數(shù)和警告指數(shù)的信息來(lái)幫助臨床[11]。表1中列舉了15項(xiàng)常用的免疫透射比濁法項(xiàng)目（均為儀器配套試劑）在AU5800和cobas c701/c702全自動(dòng)生化分析儀（簡(jiǎn)稱cobas c701/c702，瑞士羅氏公司）上血清指數(shù)的警告指數(shù)設(shè)置，對(duì)于開(kāi)放檢測(cè)系統(tǒng)，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)來(lái)自行設(shè)置相關(guān)參數(shù)。

表1 15項(xiàng)免疫透射比濁法項(xiàng)目在2種檢測(cè)系統(tǒng)上的血清性狀警告指數(shù)的設(shè)置

溶血是臨床不合格樣本最常見(jiàn)的類型。實(shí)驗(yàn)室可以通過(guò)設(shè)置適當(dāng)?shù)母辈ㄩL(zhǎng)或采用Hb單克隆抗體處理樣本來(lái)降低干擾，但此方法臨床較少應(yīng)用。如果用公式對(duì)結(jié)果進(jìn)行校正，可能會(huì)引入新的誤差，所以一般不推薦采用公式校正[1，12]。重新采血可能會(huì)因患者采血困難等因素而無(wú)法實(shí)現(xiàn)，重新檢測(cè)也會(huì)造成結(jié)果報(bào)告時(shí)間的延遲。比較有效的方式可能是檢驗(yàn)科與臨床溝通，結(jié)合溶血指數(shù)、患者的狀態(tài)、檢驗(yàn)的目的、受影響的項(xiàng)目在臨床決策中的地位來(lái)決定暫時(shí)采用這個(gè)受影響的結(jié)果，擇期重新采血還是立即采血復(fù)查[1，13]。

對(duì)于黃疸引起的干擾，臨床實(shí)驗(yàn)室?？赏ㄟ^(guò)設(shè)置合適的副波長(zhǎng)，或?qū)颖具M(jìn)行預(yù)稀釋來(lái)減少黃疸對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的干擾。

目前常見(jiàn)的去除乳糜的方法有：血清稀釋法、生理鹽水稀釋法、高速離心法、磷鎢酸-鎂法、聚乙二醇法、乙醚萃取法、脂質(zhì)清除劑法等[14]。HUNSAKER等[15]在3種測(cè)定銅藍(lán)蛋白的檢測(cè)系統(tǒng)上評(píng)價(jià)了高速離心法、脂質(zhì)清除劑法和去離子水1∶5稀釋法3種方法去除乳糜的效果，結(jié)果顯示，高速離心法去除乳糜的效果最優(yōu)；脂質(zhì)清除劑法效果居中，但有脂質(zhì)清除不完全的情況；稀釋法效果稍差，尤其對(duì)于低值樣本，稀釋后可能低于分析下限，但操作最簡(jiǎn)便。HUNSAKER等[16]提示廠商提供的脂血指數(shù)是采用大豆來(lái)源的脂肪乳作為乳糜添加劑，由于人類脂蛋白種類的多樣性，內(nèi)源性的乳糜對(duì)應(yīng)的脂血指數(shù)與廠商提供的脂血指數(shù)不一致，因此在采用廠商提供的脂血指數(shù)作為警告指數(shù)時(shí)應(yīng)引起注意。

針對(duì)溶血、黃疸和脂血的干擾，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)因地制宜，選擇可行的方案來(lái)糾正干擾。

2 內(nèi)源性干擾

內(nèi)源性干擾對(duì)免疫檢測(cè)的干擾常被忽視和低估，尤其是在使用全自動(dòng)生化分析儀或免疫分析儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)量非常大，很難被識(shí)別，往往在臨床醫(yī)生反饋檢測(cè)結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符時(shí)才會(huì)被發(fā)現(xiàn)。有患者因RF干擾導(dǎo)致促甲狀腺激素假性升高，被誤診為甲狀腺功能減低，進(jìn)行了數(shù)年的治療[17]。目前研究較多的內(nèi)源性干擾物質(zhì)有RF、嗜異性抗體、人抗動(dòng)物抗體、自身抗體、M蛋白等。

2.1 RF

RF是目前常見(jiàn)的干擾免疫透射比濁法的內(nèi)源性干擾物質(zhì)。RF是1種抗人或動(dòng)物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體，也可認(rèn)為是一種廣義的嗜異性抗體。70%～80%的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者、一些其他結(jié)締組織病患者[18]、5%的健康人均可出現(xiàn)RF水平升高[19]。RF主要為IgM型，但也有IgG、IgA、IgD和IgE型。RF對(duì)雙抗體夾心法的干擾比較常見(jiàn)，可干擾多種免疫檢測(cè)項(xiàng)目，如激素[17]、心肌標(biāo)志物[20]、腫瘤標(biāo)志物[21]、病原標(biāo)志物[22]、藥物[23]等。

RF對(duì)免疫透射比濁法的干擾機(jī)制主要為RF與試劑2中包被抗體的膠乳顆粒發(fā)生非特異聚集反應(yīng)，造成反應(yīng)體系的濁度增加。OHTAKE等[24]的研究結(jié)果顯示，RF對(duì)血清CRP檢測(cè)有正干擾?；|(zhì)金屬蛋白酶3（matrix metalloproteinase-3，MMP-3）是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的一個(gè)標(biāo)志物。KITAAKI等[25]的研究結(jié)果顯示，患者樣本中的RF、M蛋白、嗜異性抗體會(huì)干擾MMP-3的檢測(cè)。黃佳芝等[26]報(bào)道了1例RF干擾Cys C測(cè)定的病例，該患者尿素、肌酐結(jié)果均在參考區(qū)間內(nèi)，Cys C異常升高；RF的檢測(cè)結(jié)果為2 690 IU/mL（試劑說(shuō)明書(shū)提示RF≤1 200 IU/mL對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯干擾）；采用試劑A檢測(cè)時(shí)，Cys C結(jié)果為負(fù)值，0.9%氯化鈉溶液4倍稀釋后Cys C結(jié)果仍異常升高（16.6 mg/L），而試劑B的Cys C檢測(cè)結(jié)果為0.70 mg/L，4倍稀釋后結(jié)果為0.76 mg/L，未受到RF干擾。因此，試劑中是否添加足夠的抗RF抗體直接影響其抗RF干擾的能力。

2.2 嗜異性抗體

嗜異性抗體是由已知或未知抗原刺激人體產(chǎn)生的一類具有足夠滴度、能與多個(gè)物種的Ig發(fā)生相對(duì)弱結(jié)合的多重特異性Ig。采用免疫學(xué)方法的檢測(cè)試劑使用的抗體大多為動(dòng)物來(lái)源，嗜異性抗體可與多種動(dòng)物Ig的Fc或Fab表位非特異性結(jié)合。嗜異性抗體干擾免疫學(xué)檢測(cè)的機(jī)制為：（1）嗜異性抗體可同時(shí)結(jié)合標(biāo)記抗體和捕獲抗體，使檢測(cè)結(jié)果假性升高；（2）嗜異性抗體分別結(jié)合捕獲抗體或標(biāo)記抗體，干擾反應(yīng)中抗原的識(shí)別，使檢測(cè)結(jié)果假性降低[27]。嗜異性抗體可影響所有類型的免疫測(cè)定方法。在免疫透射比濁法試劑中，一般在試劑2中含有包被檢測(cè)抗體的膠乳顆粒，嗜異性抗體可結(jié)合該檢測(cè)抗體，發(fā)生聚集反應(yīng)，使?jié)岫壬撸瑢?duì)檢測(cè)造成正干擾。

2.3 人抗動(dòng)物抗體

人抗動(dòng)物抗體是一種高親和力的特異性多克隆抗體，一般具有明確的動(dòng)物血清接觸史或是使用了動(dòng)物來(lái)源的生物制劑等，包括人抗鼠抗體、人抗兔抗體等，主要為IgG或IgM型。人抗動(dòng)物抗體可視為一種廣義的嗜異性抗體。通常所指的嗜異性抗體針對(duì)的抗原不確定，并且與抗原結(jié)合較弱，而人抗動(dòng)物抗體針對(duì)特定的動(dòng)物抗原，并且與靶抗原親和力較高。人抗動(dòng)物抗體對(duì)于免疫學(xué)檢測(cè)方法的干擾機(jī)制與嗜異性抗體基本相同。當(dāng)試劑中抗體的動(dòng)物來(lái)源與患者血清中人抗動(dòng)物抗體針對(duì)的動(dòng)物來(lái)源一致時(shí)，這種干擾更為明顯，如在心肌肌鈣蛋白的檢測(cè)中，人抗小鼠抗體是一個(gè)重要的干擾來(lái)源[28]。有研究結(jié)果顯示，在用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和免疫濁度法檢測(cè)患者D-二聚體時(shí)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果低于診斷臨界值，而免疫濁度法的檢測(cè)結(jié)果高于診斷臨界值，原因是患者血清中存在人抗鼠抗體，干擾了免疫濁度法的檢測(cè)，造成假陽(yáng)性的結(jié)果[29]。

2.4 自身抗體

自身抗體主要干擾對(duì)應(yīng)的自身抗原的檢測(cè)，如抗胰島素抗體可干擾胰島素的檢測(cè)[30]，抗心肌肌鈣蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）抗體可干擾cTnI的檢測(cè)[31]。這些項(xiàng)目大多采用化學(xué)發(fā)光法，尚無(wú)免疫透射比濁法檢測(cè)試劑，因此相關(guān)的干擾報(bào)道較少見(jiàn)。RF是一種自身抗體，也可視為一種廣義的嗜異性抗體，其造成的干擾在前文已提及。

2.5 M蛋白

M蛋白是由漿細(xì)胞或B淋巴細(xì)胞單克隆惡性增殖產(chǎn)生的一種異常Ig。M蛋白可在特定條件下形成沉淀，干擾分光光度比色法、比濁法和免疫學(xué)檢測(cè)方法。M蛋白可對(duì)血糖、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶、總膽紅素、高密度脂蛋白膽固醇、CRP、Ig等項(xiàng)目[30-33]以及凝血功能實(shí)驗(yàn)[34]、藥物檢測(cè)[35]等產(chǎn)生明顯干擾。

沈敏娜等[33]評(píng)價(jià)了M蛋白對(duì)24種常規(guī)生化項(xiàng)目的干擾，提示M蛋白對(duì)CRP的干擾程度與M蛋白濃度無(wú)關(guān)，而CRP濃度越高，負(fù)干擾越嚴(yán)重。M蛋白干擾出現(xiàn)的頻率與M蛋白濃度和類型相關(guān)，干擾常見(jiàn)于lgG λ和κ型，且M蛋白濃度越高，出現(xiàn)干擾的頻率越高。干化學(xué)分析儀檢測(cè)不受M蛋白的干擾，可作為復(fù)檢的選擇，也可用0.9%氯化鈉溶液稀釋的方法去除M蛋白干擾。SMOGORZEWSKA等[32]發(fā)現(xiàn)M蛋白干擾主要發(fā)生在反應(yīng)的第1步，即試劑1與含M蛋白的血清樣本發(fā)生沉淀反應(yīng)，形成濁度，造成終點(diǎn)法的A值升高，產(chǎn)生正干擾（如總膽紅素），或造成兩點(diǎn)法的本底過(guò)高，產(chǎn)生負(fù)干擾（如高密度脂蛋白膽固醇）；而用稀釋的方式只能部分糾正M蛋白對(duì)反應(yīng)的干擾，因此嘗試在膽紅素反應(yīng)曲線的第12和14點(diǎn)設(shè)置A值報(bào)警提示參數(shù)，如果此2點(diǎn)的A值＞0.035則報(bào)警提示[32]。該思路也可用于免疫透射比濁法，但常規(guī)實(shí)驗(yàn)室自行設(shè)置參數(shù)有一定難度，如果儀器或試劑廠商能提供這樣的參數(shù)將有助于臨床實(shí)驗(yàn)室識(shí)別M蛋白的干擾。某些試劑廠商也嘗試調(diào)節(jié)試劑pH值和離子強(qiáng)度來(lái)減少蛋白沉淀，或添加表面活性劑來(lái)促進(jìn)蛋白質(zhì)溶解[36]，但并不能完全消除M蛋白的影響。有研究結(jié)果顯示，相對(duì)于免疫散射比濁法，免疫透射比濁法受M蛋白干擾更明顯，其原因可能是免疫散射比濁法在檢測(cè)前先對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)稀釋，降低了M蛋白的干擾[37]。

2.6 內(nèi)源性干擾的識(shí)別與應(yīng)對(duì)策略

內(nèi)源性抗體或Ig干擾可導(dǎo)致多種生化、免疫項(xiàng)目出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果，為臨床的診斷、治療提供錯(cuò)誤信息，因此實(shí)驗(yàn)室應(yīng)關(guān)注文獻(xiàn)報(bào)道過(guò)的受干擾項(xiàng)目或方法，注重與臨床的溝通，同時(shí)在下列情況中應(yīng)考慮是否有內(nèi)源性抗體或Ig的干擾：（1）臨床反饋患者的檢測(cè)結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符合；（2）同時(shí)檢測(cè)的臨床意義相似的幾個(gè)指標(biāo)，結(jié)果不符合，如肌酐、尿素正常，Cys C明顯升高；（3）患者近期有接受單克隆抗體藥物治療、輸血等；（4）患者有自身免疫性疾病史等。

當(dāng)懷疑有內(nèi)源性干擾時(shí)，可以采取以下措施進(jìn)行確認(rèn)和糾正：（1）0.9%氯化鈉溶液倍比稀釋，觀察待測(cè)物濃度是否呈線性。但即使稀釋后結(jié)果呈線性，也不能完全排除內(nèi)源性抗體或Ig的干擾[38]；（2）采用不同檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行復(fù)檢，但當(dāng)檢測(cè)結(jié)果一致時(shí)，也不能完全排除，有可能都受到干擾；（3）直接檢測(cè)可能產(chǎn)生干擾的內(nèi)源性Ig，如RF、M蛋白等；（4）在樣本中加入待測(cè)物，進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)；（5）采用相應(yīng)的抗體阻斷劑，如檢測(cè)前在樣本中加入動(dòng)物血清、動(dòng)物源Ig或商品化封閉劑[20]等；（6）采用聚乙二醇對(duì)樣本進(jìn)行前處理，去除沉淀后再進(jìn)行檢測(cè)[39]。

臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)注意以上措施并不能完全消除內(nèi)源性干擾。隨著技術(shù)的進(jìn)步，檢測(cè)系統(tǒng)的改進(jìn)也是一個(gè)重要的趨勢(shì)。免疫透射比濁法試劑可通過(guò)調(diào)整試劑1的pH值至3～4，或添加1～40 g/L N-羥基琥珀酰亞胺來(lái)降低RF的干擾，有的廠商在試劑1中添加抗RF抗體來(lái)結(jié)合RF，以降低干擾。試劑生產(chǎn)廠商應(yīng)在試劑說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明可能造成干擾的內(nèi)源性干擾因素及抗干擾能力，以便給臨床實(shí)驗(yàn)室更多的提示。另外，方法學(xué)的改進(jìn)也是一個(gè)重要的方向，如質(zhì)譜法的檢測(cè)特異性高，受交叉反應(yīng)的干擾較小，但不適合高通量檢測(cè)的需求。

3 檢測(cè)中的鉤狀效應(yīng)

3.1 鉤狀效應(yīng)

在抗體量恒定的溶液中加入抗原，免疫復(fù)合物的生成量隨著抗原量的增加而增加，當(dāng)達(dá)到峰值之后，則隨著抗原量的增加而減少，這一現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(yīng)，通常將抗體過(guò)量現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象，抗原過(guò)量則稱為后帶現(xiàn)象。當(dāng)待測(cè)物濃度過(guò)高時(shí)，免疫散射比濁法和免疫透射比濁法均可能出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果假性降低。鉤狀效應(yīng)是影響其結(jié)果準(zhǔn)確性的一個(gè)重要因素。楊杰等[40]分析了13個(gè)免疫散射比濁項(xiàng)目和14個(gè)免疫透射比濁項(xiàng)目，其中RF、心型脂肪酸結(jié)合蛋白、高敏C反應(yīng)蛋白（high-sensitivity C-reactive protein，hs-CRP）、CRP的臨床可見(jiàn)最高值可超出參考區(qū)間上限的100倍，β2-微球蛋白、RF、視黃醇結(jié)合蛋白（retinol-binding protein，RBP）、脂蛋白（a）濃度常超出分析測(cè)量范圍上限，因此這些項(xiàng)目具有較高的發(fā)生鉤狀效應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，需引起關(guān)注。尿微量白蛋白（microalbumin，mAlb）濃度也經(jīng)常超出分析測(cè)量上限[41]。楊杰等[42]對(duì)ASO、mAlb、hs-CRP、β2-微球蛋白、RBP和Cys C 6個(gè)項(xiàng)目分別用5種免疫透射比濁法試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，不同試劑盒的抗原過(guò)量安全范圍差異很大，部分試劑盒受鉤狀效應(yīng)影響嚴(yán)重。試劑盒的性能與添加抗體的濃度有關(guān)，抗體濃度越高，所能檢出的抗原濃度越高，提高試劑配方中的抗體濃度是減少鉤狀效應(yīng)的方案之一，但會(huì)增加試劑成本。

3.2 鉤狀效應(yīng)的識(shí)別與應(yīng)對(duì)策略

目前，針對(duì)鉤狀效應(yīng)常用的解決方案一般有3種。（1）樣本預(yù)稀釋：如瑞士羅氏公司、德國(guó)西門(mén)子公司的檢測(cè)系統(tǒng)中有部分項(xiàng)目采用此方法，將樣本進(jìn)行10～21倍預(yù)稀釋，該對(duì)高濃度樣本可有效減少鉤狀效應(yīng)，但稀釋會(huì)引入更多的分析前變異，對(duì)于低濃度樣本，稀釋會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性[40]；（2）抗原或抗體的二次添加：即在反應(yīng)過(guò)程中再次加入一定量的試劑（抗體）或樣本（抗原），隨著反應(yīng)的進(jìn)行，根據(jù)時(shí)間-反應(yīng)進(jìn)程曲線是否發(fā)生改變、拐點(diǎn)的上升或下降來(lái)判斷是否存在抗原過(guò)量[40]，如有過(guò)量，再進(jìn)行稀釋?？乖渭尤敕ㄏ鄬?duì)較常用，瑞士羅氏公司的檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)mAlb即采用此方法。但此方法會(huì)相對(duì)增加試劑成本，也會(huì)降低反應(yīng)速度；（3）反應(yīng)曲線特征識(shí)別和報(bào)警：根據(jù)不同項(xiàng)目的抗原-抗體反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特征，在反應(yīng)曲線的特定時(shí)間點(diǎn)監(jiān)測(cè)生成的免疫復(fù)合物的A值，計(jì)算反應(yīng)不同時(shí)段的A值變化的比值，與預(yù)設(shè)的參數(shù)進(jìn)行比較，自動(dòng)識(shí)別鉤狀效應(yīng)。瑞士羅氏公司、美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司、深圳邁瑞公司的封閉檢測(cè)系統(tǒng)部分項(xiàng)目均可提供參數(shù)采用此方式進(jìn)行報(bào)警，對(duì)于開(kāi)放檢測(cè)系統(tǒng)，臨床實(shí)驗(yàn)室可通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果在生化分析儀上自行設(shè)置參數(shù)來(lái)對(duì)鉤狀效應(yīng)進(jìn)行識(shí)別和報(bào)警[40-44]。

4 其他干擾因素

其他可能影響免疫透射比濁法的因素包括攜帶污染、藥物等。另外，隨著生物制劑應(yīng)用的增多，一些單抗類藥物可能直接對(duì)免疫學(xué)檢測(cè)方法產(chǎn)生影響，或使人體產(chǎn)生嗜異性抗體，干擾免疫學(xué)檢測(cè)方法。

5 總結(jié)

樣本性狀、內(nèi)源性干擾、鉤狀效應(yīng)以及藥物等各種干擾因素是影響免疫透射比濁法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的重要因素之一。從臨床實(shí)驗(yàn)室的角度來(lái)說(shuō)，檢驗(yàn)人員應(yīng)關(guān)注和了解這些因素，重視與臨床的溝通。從試劑生產(chǎn)廠商的角度來(lái)說(shuō)，應(yīng)在試劑說(shuō)明書(shū)中提示該項(xiàng)目可能存在的干擾因素并提供解決方案。隨著檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步，抗干擾試劑盒的開(kāi)發(fā)，檢測(cè)方法的更新?lián)Q代，臨床檢測(cè)中的干擾問(wèn)題會(huì)逐步得到解決。