李玲 楊麗霞 郭梅

（天津農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與生物工程學(xué)院，天津 300384）

成熟果實為人們提供日常生活所需的營養(yǎng)。果實成熟包括一系列的生理代謝過程，在分子層面上果實的生長、發(fā)育及成熟是由許多轉(zhuǎn)錄因子通過單獨或者協(xié)同調(diào)控特定的下游基因來實現(xiàn)的［1］。SPL（SQUAMOSA promoter-binding protein-like）是植物中特有的轉(zhuǎn)錄因子，參與植物葉、花和果實發(fā)育，發(fā)育時期轉(zhuǎn)化，植物激素和光信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，花青素合成，逆境脅迫等過程［2-12］。SPL7 和SPL14 分別通過配置銅元素和控制病原抗性來調(diào)節(jié)植物的脅迫應(yīng)答［13］。SPL 調(diào)控植物孢子產(chǎn)生和雌雄配體發(fā)育［14］。大多數(shù)SPL基因具有miR156/157 結(jié)合位點，在轉(zhuǎn)錄后水平受其調(diào)控［15-17］。miR156 調(diào)控擬南芥SPL3基因進(jìn)而在翻譯后抑制SPL3 蛋白［17］。miR156/157 的靶基因SPL在番茄莖尖、花和果實中高效表達(dá)［18］。Wang等［19］發(fā)現(xiàn)SPL 通過MADS box基因調(diào)控植物開花時間，提高SPL基因表達(dá)水平有助于MADS-box基因家族的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)開花。

CNR 是SPL 轉(zhuǎn)錄因子家族中一個比較特殊的成員，已經(jīng)被證明在果實的發(fā)育和成熟過程中起很重要的作用。Manning 等［20］通過使用定點克隆的方法，在第2 條染色體長臂上發(fā)現(xiàn)LeSPL-CNR基因。LeSPL-CNR基因啟動子區(qū)域發(fā)生表觀遺傳變異會影響果皮類胡蘿卜素生物合成和細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致果實不能正常成熟［20］。番茄突變體Cnr（Colourless non-ripening）果實表現(xiàn)出不成熟性狀，果皮為黃色，果實類胡蘿卜素合成量減少，果實不會變軟，與成熟相關(guān)酶基因的表達(dá)也受到影響［21-22］。Cnr突變體的多聚半乳糖醛酸酶和果膠酯酶的含量及活性比同時期野生型果實低［23］。Karlova 等［24］發(fā)現(xiàn)SlAP2a位于LeNAC-NOR、LeMADS-RIN和LeSPL-CNR的下游，LeSPL-CNR 能夠與SlAP2a的啟動子直接結(jié)合，SlAP2a也可以對LeSPL-CNR表達(dá)進(jìn)行反饋調(diào)節(jié)。總之，CNR 位于RIN、LeHB1、SlAP2a 和 SlTAGL1 的下游，對果實成熟起正調(diào)控作用［25］。

目前，由轉(zhuǎn)錄因子組成的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)是研究果實成熟分子機制的熱點，CNR 是調(diào)控番茄成熟的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。我們團隊已經(jīng)證明CNR 蛋白在破色期番茄果實中表達(dá)量最高，發(fā)揮了至關(guān)重要的作用［26］，但是其調(diào)控番茄果實成熟的機制和路徑尚不清楚。所以，本研究以野生型AC 和突變體Cnr番茄果實為材料，通過轉(zhuǎn)錄組測序（RNA-seq）篩選出差異表達(dá)基因，然后應(yīng)用qRT-PCR 技術(shù)進(jìn)一步確定差異基因，最后采用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（ChIP）確定轉(zhuǎn)錄因子CNR 直接調(diào)控的靶基因，以期為構(gòu)建以CNR 為中心的果實成熟調(diào)控網(wǎng)絡(luò)奠定理論基礎(chǔ)。這不僅能夠完善果實成熟的調(diào)控理論，而且可以從生物工程角度有效延緩果實成熟，保持果實品質(zhì)和延長果實貯藏期。

1 材料與方法

1.1 材料

選取由美國康奈爾大學(xué)BTI 植物研究所提供的Alisa Craig野生型和Cnr突變體番茄種子，由本實驗室繁育保存。番茄種子種植于天津農(nóng)學(xué)院大棚，進(jìn)行常規(guī)管理。選取無機械損害、無病蟲害且大小均一的番茄果實進(jìn)行實驗。

1.2 方法

1.2.1 番茄果實總RNA 的提取 采用TRIzol 法提取破色期野生型AC 和突變體Cnr番茄果實總RNA，具體操作步驟依據(jù)《分子克隆實驗指南》［27］。將組織置于液氮中迅速研磨成干粉，放在10 mL 離心管中，加入4 mL TRIzol 提取液及80 μL β-巰基乙醇，充分混合均勻，室溫靜置10 min。向提取體系中加入60%氯仿/異戊醇（24∶1），15%無水乙醇，室溫靜置2 min，4℃ 5 000×g離心15 min。取上清液加入等體積氯仿/異戊醇，4℃ 5 000×g離心10 min，再吸取上清液加入兩倍體積的無水乙醇和五分之一體積的3 mol/L NaAC-HAC（pH 5.0）溶液，混合均勻，-20℃靜置1h。4℃ 5 000×g離心15 min 得到上清液，加等體積75%乙醇離心5 min，棄去上清，晾干內(nèi)壁殘留的乙醇溶液，用適量DEPC 水溶解沉淀。

1.2.2 RNA-seq 測序及數(shù)據(jù)分析 從野生型AC 和突變體Cnr番茄果實中提取的RNA 檢測合格后，用于構(gòu)建測序文庫，然后送至諾禾致源基因研究中心進(jìn)行高通量RNA-seq。每個樣本3 次生物學(xué)重復(fù)。最終的數(shù)據(jù)處理和分析參考Bemer 等［28］的方法。

1.2.3 GO 和KEGG 富集分析 Gene Ontology（簡稱GO，http：//www.geneontology.org）是基因功能國際標(biāo)準(zhǔn)分類體系，由基因本體聯(lián)合會（Gene Onotology Consortium）建立數(shù)據(jù)庫?；蚩梢酝ㄟ^ID 對應(yīng)或者序列注釋的方法找到與之對應(yīng)的GO 編號，而GO 編號可對應(yīng)到Term，即功能類別或者細(xì)胞定位。采用Goseq 軟件進(jìn)行GO 富集分析。KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）是系統(tǒng)分析基因功能、基因組信息，與Pathway 相關(guān)的主要公共數(shù)據(jù)庫，是進(jìn)行生物體內(nèi)代謝分析、代謝網(wǎng)絡(luò)研究的強有力工具。應(yīng)用KOBAS（2.0）軟件進(jìn)行Pathway富集分析。

1.2.4 qRT-PCR 表達(dá)差異分析 參照Brown 等［29］的方法進(jìn)行實時定量PCR 分析，檢測差異基因的表達(dá)量。qRT-PCR 使用的引物序列見表1。以Actin基因作為內(nèi)參，每個基因在AC 番茄果實中的表達(dá)量歸為1。Expression（2-ΔΔCt）表示為平均值±SE。

1.2.5 染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）分析 按照Upstate 試劑盒說明書和Li 的方法進(jìn)行ChIP 分析［30-31］。參照Zhu 等［32］的方法結(jié)合GE Health Ni Sepharose six 快速流動親和層析柱操作說明書進(jìn)行CNR 蛋白的原核表達(dá)和純化。然后將制備的高純度、有活性的CNR 蛋白免疫小鼠得到抗CNR 蛋白的多克隆抗體［26］?？贵w純化后用于ChIP 分析。

2 結(jié)果

2.1 轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量評估

野生型AC 和突變體Cnr番茄果實的總RNA 用于構(gòu)建測序文庫，然后在Illumina HiSeq 平臺上進(jìn)行高通量測序。從圖1 可以看出，野生型AC 番茄果實3 個重復(fù)樣本的R2均大于0.974，Cnr突變體番茄果實3 個重復(fù)的R2都大于0.971。說明樣品的重復(fù)性良好，數(shù)據(jù)非?？煽?。

原始圖像數(shù)據(jù)文件通過CASAVA 堿基識別分析轉(zhuǎn)換成Raw Reads，Raw Reads 包含低質(zhì)量、帶接頭的Reads。所以Raw Reads 必需經(jīng)過濾得到Clean Reads 以保證轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)分析的質(zhì)量。后續(xù)的生物信息學(xué)分析都是基于Clean Reads。測序數(shù)據(jù)質(zhì)量情況如表2 所示，6 個樣本Q20 和Q30 的最小值分別是94.18%和88.92%，表明所有的測序數(shù)據(jù)均符合生物信息學(xué)分析的要求。

選用HISAT 軟件將經(jīng)過拼接的序列進(jìn)行比較分析和基因組定位。軟件的各項參數(shù)選擇默認(rèn)值，比對統(tǒng)計結(jié)果如表3 所示。各個樣本reads mapped 的比例為92.92%-94.77%均高于70%，這說明參考基因組選擇恰當(dāng)，且不存在實驗污染的情況，數(shù)據(jù)和測序結(jié)果可信。

2.2 野生型AC和突變體Cnr番茄果實差異基因的篩選結(jié)果

圖2 是野生型AC 和突變體Cnr番茄果實表達(dá)基因的venn 圖，以fpkm＞1 作為判斷基因表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)。從圖2 中可以看出，AC 表達(dá)了17 225 個基因，Cnr表達(dá)了19 389 個基因。二者之間共有的表達(dá)基因是16 653 個。不同番茄果實差異基因的篩選條件為padj＜0.05 且|log2fold change|＞1。如圖3 所示，野生型AC 和突變體Cnr番茄果實的差異基因有10 223 個，其中上調(diào)的差異基因4 341 個，下調(diào)的差異基因5 882 個。

從圖4 可以看出，與突變體Cnr番茄果實相比，野生型AC 番茄果實中與能量代謝相關(guān)具有顯著性表達(dá)差異的基因是68 個，上調(diào)基因28 個，下調(diào)基因40 個；有4 個與固碳作用相關(guān)的上調(diào)差異基因；與線粒體電子傳遞或ATP 合成相關(guān)的基因是11 個差異上調(diào)基因，14 個差異下調(diào)基因；與脂質(zhì)代謝有關(guān)的基因是22 個差異上調(diào)基因和33 個差異下調(diào)基因；6 個基因負(fù)調(diào)控肌醇磷酸鹽代謝；與氨基酸代謝相關(guān)的是24 個差異上調(diào)基因和39 個差異下調(diào)基因；存在9 個與核酸代謝有關(guān)的差異上調(diào)基因和14個差異下調(diào)基因；6 個上調(diào)基因和6 個下調(diào)基因與氧化還原狀態(tài)有關(guān)；2 個下調(diào)基因與谷胱甘肽代謝相關(guān)；與次生代謝相關(guān)的基因有7 個差異上調(diào)和10個差異下調(diào)；與細(xì)胞壁及細(xì)胞膜完整性相關(guān)的基因包括18 個上調(diào)基因和19 個下調(diào)基因；3 個基因與番茄紅素合成相關(guān)，其中2 個上調(diào)，1 個下調(diào)；4 個上調(diào)基因與乙烯生物合成相關(guān)；與乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的差異基因有4 個上調(diào)表達(dá)，4 個下調(diào)表達(dá)；8 個上調(diào)差異基因和15 個下調(diào)差異基因與植物激素相關(guān)；與植物MAPK 信號途徑相關(guān)的是1 個上調(diào)表達(dá)的差異基因；3 個下調(diào)基因與植物防御應(yīng)答相關(guān)；2個上調(diào)和8 個下調(diào)基因與植物病原途徑相關(guān)；3 個上調(diào)基因和1 個下調(diào)基因與植物非生物脅迫有關(guān)；2個差異上調(diào)基因與維生素代謝相關(guān)。

2.3 差異表達(dá)基因GO和KEGG分析

GO 分 為 分 子 功 能（Molecular Function）、生物進(jìn)程（Biological Process）和細(xì)胞組分（Cellular Component）3 部分。通過對野生型和突變體番茄差異表達(dá)基因（DEGs）進(jìn)行GO 富集分析，以揭示哪些生物進(jìn)程、分子功能和細(xì)胞組分與CNR 轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)。如圖5 所示，生物進(jìn)程極顯著的集中在次級代謝物生物合成、次級代謝、含硫化合物代謝、α-氨基酸代謝、對高光強度的應(yīng)答、有機酸生物合成、羧酸生物合成、谷胱甘肽代謝和對脂類的細(xì)胞應(yīng)答；細(xì)胞組分顯著性的存在于色素體、葉綠體、細(xì)胞器亞單位、質(zhì)體類囊體、質(zhì)體基質(zhì)、葉綠體類囊體、類囊體、葉綠體基質(zhì)、質(zhì)體包膜、類囊體膜、葉綠體被膜、色素體類囊體膜、葉綠體類囊體膜；分子功能顯著性的集中于鐵離子束、亞鐵血紅素結(jié)合物、單加氧酶活性、氧化還原酶活性、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、四吡咯結(jié)合物、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶活性、轉(zhuǎn)移酶活性。

表1 用于qRT-PCR 驗證的引物序列

圖1 番茄果實樣本的相關(guān)性

表2 數(shù)據(jù)產(chǎn)出質(zhì)量情況一覽表

表3 Reads 與參考序列比對情況一覽表

在生物體內(nèi)，不同基因相互協(xié)調(diào)行使其生物學(xué)功能，通過Pathway 顯著性富集能確定差異表達(dá)基因參與的最主要代謝途徑和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。對差異表達(dá)基因進(jìn)行KEGG Pathway 富集分析，根據(jù)P＜0.05，選取26 個差異最顯著的 KEGG 通路，如圖6 所示。野生型AC 和突變體Cnr番茄的差異基因主要富集在谷胱甘肽代謝、MAPK 信號途徑、類黃酮化合物代謝、半胱氨酸和甲硫氨酸代謝、類胡蘿卜素合成、脂代謝、糖代謝、苯丙素生物合成、萜類化合物合成、植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等途徑。

圖2 野生型AC 和突變體Cnr 番茄果實差異基因維恩圖

圖3 野生型AC 和突變體Cnr 番茄果實基因差異表達(dá)分析火山圖

圖4 野生型AC 和突變體Cnr 番茄果實差異基因的篩選結(jié)果

2.4 qRT-PCR驗證AC和Cnr番茄果實中差異基因的相對表達(dá)量

選擇AC 和Cnr番茄果實中有極顯著差異的一些代表性基因進(jìn)行qRT-PCR 驗證。由表4 可知，AC 番茄果實中參與果糖和甘露糖代謝的甘露聚糖-1，4-β-甘露糖苷酶基因（Solyc01g008710.2）的表達(dá)量是Cnr番茄果實的2 500 倍。亞油酸9S-脂氧合酶參與亞油酸代謝，AC 番茄果實中該酶基因（Solyc08g014000.2）的相對表達(dá)量是Cnr番茄果實的10 000 倍。參與細(xì)胞壁果膠代謝的果膠酯酶基因（Solyc07g064180.2）在AC 番茄果實中的相對表達(dá)量與亞油酸9S -脂氧合酶基因相似。發(fā)現(xiàn)一個新基因（novel.9194）參與番茄紅素合成，在AC 番茄果實中的表達(dá)量是Cnr番茄果實的100 倍。1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸合成酶基因（Solyc05g050010.2）在乙烯生物合成中起重要作用，該基因在AC 番茄果實的表達(dá)量是Cnr番茄果實的180 倍。脫落酸和環(huán)境應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白TAS14 基因（Solyc02g084850.2）參與植物激素代謝。硫胺素噻唑合酶基因（Solyc07g064160.2）參與硫胺素代謝。促分裂原活化蛋白激酶基因（Solyc02g084870.2）在Cnr 番茄果實中的相對表達(dá)量是0.069 7。以上這些基因在AC 番茄果實中上調(diào)表達(dá)。

圖5 野生型AC 和突變體Cnr 番茄果實GO 顯著性富集分析

圖6 KEGG 顯著富集通路

已糖載體基因（Solyc02g079220.2）在Cnr突變體中的相對表達(dá)量是101.640 3，鈣轉(zhuǎn)運ATP 合成酶基因（Solyc01g096190.2）在Cnr突變體中的相對表達(dá)量是6.597 4。脂氧合酶基因（Solyc08g029000.2）在Cnr番茄果實中的表達(dá)量是AC 果實中的276 367倍。過氧化物酶基因（Solyc02g082090.2）與氧化還原狀態(tài)有關(guān)，在Cnr番茄果實中的表達(dá)量是AC 果實中的1 233 倍。谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶基因（Solyc09g011630.2）參與谷胱甘肽代謝，在Cnr番茄果實中的相對表達(dá)量是5 383.808 2。果膠酯酶基因（Solyc09g075330.2）在Cnr番茄果實中的表達(dá)量是AC 番茄果實中的1 026 倍。番茄紅素ε-環(huán)化酶基因（Solyc12g008980.1）參與番茄紅素代謝，在Cnr突變體中的表達(dá)量是15.691 3。乙烯響應(yīng)蛋白抑制因子1 基因（Solyc08g080630.2）位于乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，在Cnr番茄果實中的相對積累量為222.453 4。植物生長素載體組分基因（Solyc07g006900.1）在植物激素代謝過程有重要作用，其在Cnr番茄果實中的相對表達(dá)量是 254.237 6，相對表達(dá)量較高。葡聚糖-1，3-β-葡萄糖苷酶B 基因（Solyc01g060020.2）與防御應(yīng)答相關(guān)，在Cnr突變體果實中的表達(dá)量是AC 果實中的71 倍。

2.5 CNR靶基因啟動子區(qū)域的ChIP檢測

為了證明CNR 在番茄果實體內(nèi)直接結(jié)合的靶基因，我們進(jìn)行了ChIP 檢測。染色質(zhì)從粉紅期果實中提取并與蛋白質(zhì)交聯(lián)。用抗CNR 的鼠IgG 免疫沉淀CNR 及其相關(guān)DNA-蛋白復(fù)合物（ChIP）。陰性對照為正常小鼠的免疫球蛋白G（IgG）。ChIP-qPCR 顯示八氫番茄紅素合成酶基因（PSY）、多聚半乳糖醛酸酶基因（PG）、1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸合成酶基因（ACS）、亞油酸9S-脂氧合酶基因和果膠酯酶基因的GTAC 基序顯著富集（圖7）。八氫番茄紅素合成酶基因的結(jié)合能力最強，果膠酯酶基因結(jié)合能力最弱。ChIP-qPCR 結(jié)果說明在番茄果實體內(nèi)CNR 直接結(jié)合在PSY、ACS、LOX、PE以及PG基因的啟動子區(qū)域，這些基因是轉(zhuǎn)錄因子CNR 的靶基因。

3 討論

番茄果實的成熟和衰老過程是復(fù)雜而有序的，包括顏色、質(zhì)地、風(fēng)味、香氣成分和其他新陳代謝的變化，同時又與基因調(diào)控過程高度相關(guān)。野生型AC 和突變體Cnr番茄果實的差異基因涉及番茄果實生長發(fā)育的多個方面，包括能量相關(guān)代謝途徑、固碳作用、線粒體電子傳遞、ATP 合成、脂代謝、磷酸肌醇代謝、氨基酸代謝、核酸代謝、氧化還原狀態(tài)、谷胱甘肽代謝、次生代謝、細(xì)胞壁、細(xì)胞膜完整性、番茄紅素合成、乙烯生物合成、乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、植物激素、植物防御應(yīng)答、植物病原相關(guān)、非生物脅迫、維生素代謝和MAPK 信號通路。

脂氧合酶（LOX）是高等植物中的一種非血紅素鐵蛋白，參與香氣成分合成、果實成熟和衰老、氧脅迫、脂質(zhì)過氧化等過程，對細(xì)菌感染和不利的外部條件有很好的防御作用［33-34］。LOX 的反應(yīng)產(chǎn)物可能通過參與乙烯對躍變型果實的觸發(fā)而加速果實成熟。另一方面，LOX 通過催化不飽和脂肪酸的氧化影響植物成熟和衰老。亞油酸9S-脂氧合酶基因（Solyc08g014000.2）在AC 番茄果實中表達(dá)量較高，脂氧合酶基因（Solyc08g029000.2）的相對表達(dá)量在AC 番茄果實中降低。果膠酯酶在植物組織和微生物中分布較為廣泛，作用于細(xì)胞壁降解、細(xì)胞分裂，果實軟化及植物抗病［35］。與Cnr突變體番茄果實相比，AC 番茄果實中的果膠酯酶基因（Solyc07g064180.2）上調(diào)，另一個果膠酶基因（Solyc09g075330.2）下調(diào)。以上結(jié)果表明，脂氧合酶和果膠酯酶是由多基因家族編碼的，各個基因在番茄果實成熟和軟化過程中起不同作用。

表4 AC 和Cnr 番茄果實差異基因的相對表達(dá)量

圖7 鑒定CNR 在番茄果實體內(nèi)結(jié)合的順式元件

過氧化物酶催化涉及過氧化氫的各種氧化反應(yīng)，有多重氧化還原進(jìn)程。谷胱甘肽過氧化物酶基因（Solyc08g080940.2）參與上述反應(yīng)。過氧化物酶的積累可以應(yīng)對由不良傷害和非生物脅迫引起的活性氧（ROS）過量產(chǎn)生。過氧化物酶基因（Solyc02g082090.2）在AC 番茄果實中下調(diào)表達(dá)。谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）屬于蛋白質(zhì)超家族，當(dāng)植物受到非生物脅迫時，它可以清除活性氧并保護(hù)植物細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整和蛋白質(zhì)的活性［36］。AC 番茄果實的谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶基因（Solyc09g011630.2）下調(diào)。絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）信號通路在植物免疫反應(yīng)中起重要作用，該酶基因（Solyc02g084870.2）在Cnr突變體番茄果實中沒有表達(dá)，僅在AC 番茄果實中檢測到，這揭示CNR 轉(zhuǎn)錄因子與MAPK 途徑密切相關(guān)。番茄紅素具有抗氧化性能，能夠保護(hù)機體免受氧化帶來的損傷，同時可以介導(dǎo)細(xì)胞通訊對內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)控［37］。本研究發(fā)現(xiàn)了一個與番茄紅素合成相關(guān)的新基因（novel.9194），該基因在AC 番茄果實中上調(diào)表達(dá)；番茄紅素ε-環(huán)化酶基因（Solyc12g008980.1）在AC 番茄果實中下調(diào)表達(dá)，這兩個基因在番茄果實的著色過程中共同起作用。

乙烯是一種激素，影響成熟相關(guān)基因的表達(dá)，在水果的生長過程中起重要的調(diào)節(jié)作用［38］。AC 番茄果實中ACS基因（Solyc05g050010.2）呈上調(diào)表達(dá)，Cnr突變體中該基因不表達(dá)，無乙烯合成。乙烯響應(yīng)蛋白抑制因子1 基因（Solyc08g080630.2）在AC番茄果實中呈負(fù)調(diào)控。LOX 途徑是植物特有的芳香物質(zhì)合成途徑，一些揮發(fā)性化合物通過LOX 途徑合成，如LOX 通過亞麻酸途徑參與醛香物質(zhì)的合成［39］。也有研究發(fā)現(xiàn)，在香氣物質(zhì)的形成過程中乙烯發(fā)揮了重要作用。LOX 途徑中與香氣相關(guān)的基因Tomlox C表達(dá)降低，說明番茄果實LOX 途徑中香氣物質(zhì)的產(chǎn)生依賴乙烯［40］。氨基酸代謝途徑的差異表達(dá)基因決定野生型AC 和突變體Cnr番茄果實具有不同風(fēng)味，但是番茄果實香氣的組成和形成機理仍需進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

CNR 轉(zhuǎn)錄因子的功能涉及番茄果實生長發(fā)育階段的各個方面。CNR 通過直接結(jié)合八氫番茄紅素合成酶基因（PSY）、1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸合成酶基因（ACS）、亞油酸9S-脂氧合酶基因（LOX）、果膠酯酶基因（PE）以及聚半乳糖醛酸酶基因（PG）的啟動子來調(diào)控番茄的成熟軟化過程。