柯軼，王娜，魏瑜，周昀，余寶珍，張貴和，陳玉舜

摘要：對7株不同的蛹蟲草菌株進行比較分析，以期篩選得到高產(chǎn)活性成分的優(yōu)質(zhì)蛹蟲草菌株。通過對7株蛹蟲草菌株子實體的形態(tài)、產(chǎn)量、子實體中活性成分（蟲草素、蟲草酸、腺苷、蟲草粗多糖）的含量等進行對比研究。結(jié)果表明，菌株H05綜合品質(zhì)最好，子實體產(chǎn)量可達204 g·瓶-1，蟲草素含量為0523%、腺苷含量為0556%、蟲草酸含量為497%，蟲草粗多糖含量為989%。此菌株子實體產(chǎn)量高，活性成分含量也較高，經(jīng)濟價值高，值得開發(fā)利用。

關鍵詞：蛹蟲草;子實體;活性成分;高含量

中圖分類號：S 5673 文獻標志碼：A 文章編號：0253-2301（2021）02-0014-05

DOI： 1013651/jcnkifjnykj202102003

Screening of Cordyceps Militaris Strains Produced Highyield Active Ingredients

KE Yi1， WANG Na1， WEI Yu1， ZHOU Yun1， YU Baozhen2， ZHANG Guihe2， CHEN Yushun3

（1. Fujian Vocational College of Bioengineering， Fuzhou， Fujian 350008， China; 2. Fuzhou Huisheng Edible

Fungi Co.， Ltd.， Fuzhou， Fujian 350008， China; 3. HUNGKUANG University， Taichung， Taiwan 43302， China）

Abstract： Seven different strains of Cordyceps militaris were compared and analyzed in order to select the highquality strains of Cordyceps militaris with highyield active ingredients. The morphology， yield and content of active ingredients （cordycepin， cordycepic acid， adenosine and cordyceps crude polysaccharide） in the fruiting body of the seven strains of Cordyceps militaris were studied comparatively. The results showed that the strain H05 had the best comprehensive quality， and the yield of fruiting body was 20.4 g per bottle， the cordycepin content was 0.523%， adenosine content was 0.556%， cordycepic acid content was 4.97%， and the cordyceps crude polysaccharide content was 9.89%. The strain had high yield of fruiting body， high content of active ingredients and high economic value， and was worthy of development and utilization.

Key words： Cordyceps militaris; Fruiting body; Active ingredients; High content

蛹蟲草Cordyceps militaris又稱為北蟲草、北冬蟲夏草，隸屬于真菌界的子囊菌們Ascomycota、肉座菌目Hypocreales、麥角菌科Clavicip itaceae，是世界性廣布種＼[1＼]。在我國的遼寧、福建、陜西、云南、臺灣等地區(qū)均有分布＼[2-3＼]。通過對蛹蟲草的化學成分和藥理研究表明，其營養(yǎng)豐富，富含多種活性物質(zhì)，如蟲草素、蟲草酸、腺苷、蟲草多糖、氨基酸、麥角固醇、多酚等，具有鎮(zhèn)靜催眠、提高機體免疫力、抗腫瘤、防止衰老、保護心肺組織等多種藥理作用＼[4-6＼]。文獻報道蛹蟲草的成分與天然的冬蟲夏草十分相似，《全國中草藥匯編》記載：“蛹蟲草的子實體及蟲體也可作為冬蟲夏草入藥”，且藥用活性成分平均含量如蟲草素、氨基酸等，明顯高于冬蟲夏草＼[7-10＼]，這一特性，使得蛹蟲草可以作為冬蟲夏草的良好替代品?，F(xiàn)今，蛹蟲草已在全國各地實現(xiàn)了工業(yè)化栽培，具有廣闊的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展前景。但是菌種退化、產(chǎn)品質(zhì)量標準缺失、精品缺乏等問題依然困擾著產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

蛹蟲草的活性成分含量決定了蛹蟲草的保健價值＼[11＼]。沈陽師范大學蛹蟲草研究團隊于2008年提出了功能性蛹蟲草概念，重點圍繞菌種、成分、評價和產(chǎn)品四個方向開展研究工作＼[12＼]。目前關于蛹蟲草菌株篩選的研究，對綜合子實體產(chǎn)量及多種活性成分含量的研究較少，更多集中于子實體的生長速度、產(chǎn)量以及形態(tài)等方面，對子實體中活性成分含量的研究僅集中于1～2種活性成分上，如多糖、蟲草素等＼[13-22＼]。

本研究通過對7株不同的蛹蟲草菌株進行了子實體栽培試驗及4種活性成分（蟲草素、蟲草酸、腺苷、蟲草粗多糖）檢測，綜合蛹蟲草子實體形態(tài)、產(chǎn)量及4種活性成分含量作為評價指標，以期篩選得到具有高產(chǎn)活性成分的優(yōu)良蛹蟲草菌株，提升蛹蟲草的開發(fā)價值，為蛹蟲草產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供科學參考。

1材料與方法

11材料、試劑和儀器

柯軼等：高產(chǎn)活性成分蛹蟲草菌株的篩選2021年第2期2021年第2期柯軼等：高產(chǎn)活性成分蛹蟲草菌株的篩選111供試菌株蛹蟲草菌株H01、H02、H03來自臺灣弘光科技大學陳玉舜教授實驗室，菌株H04來自福州惠生食用菌有限公司自有菌株，菌株H05、H06、H07來自福建生物工程職業(yè)技術(shù)學院柯軼老師實驗室。

112主要試劑和儀器標準品腺苷、蟲草素（3′脫氧腺苷）、D無水葡萄糖均來自中國食品藥品鑒定研究院，純度99%;試劑乙腈、磷酸二氫鉀為色譜純，磷酸鉀、過碘酸鈉、硫酸、硫代硫酸鈉、碘化鉀、VB1、VB2、硫酸鎂為分析純。

113主要設備LC2030 3D高效液相色譜儀（日本島津株式會社）、T6可見/紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限公司）。

12培養(yǎng)基

液體種子培養(yǎng)基：土豆200 g、葡萄糖20 g、KH2PO4 5 g、MgSO4 2 g、VB1 10 mg、VB2 5 mg、水1000 mL、pH 64 的比例配成液體種子培養(yǎng)基。

固體培養(yǎng)基：按土豆200 g、葡萄糖20 g、KH2PO4 2 g、MgSO4 1 g、VB2 5 mg、水1000 mL、瓊脂20 g、pH 64的比例配成固體培養(yǎng)基。

大米栽培培養(yǎng)基：將大米和水按（1∶1～1∶11）的比例范圍加入透明的食品級玻璃瓶中，瓶口密封，每瓶大米裝料量為35 g。

137株蛹蟲草子實體的培養(yǎng)

131原種制作在無菌條件下將菌株接種至固體培養(yǎng)基平板活化，22℃黑暗培養(yǎng)。

132栽培種選擇菌絲潔白無轉(zhuǎn)色，長勢旺盛的原種平板，在無菌條件下，取2～3塊05 cm2的菌塊接種到500 mL三角瓶中，裝液量約為瓶容量的35%，22℃、150 r·min-1黑暗振蕩培養(yǎng)5～7 d。

133人工栽培選取菌液澄清透明，菌絲呈球狀、片狀和絲狀均勻分布，無異味，無雜菌的栽培種，在無菌條件下，以2 mL·瓶-1的接種量接入栽培瓶。接種后的培養(yǎng)基移入培養(yǎng)室，溫度18～22℃，濕度60%～70%，避光培養(yǎng)17～20 d，待菌絲布滿整個瓶面并深扎到瓶底，開始見光培養(yǎng)，光照強度控制在（200±50） lx，光照時間 （10±1）h·d-1，溫度（20±2）℃，濕度65%～75%，培養(yǎng)至原基出現(xiàn)。調(diào)整光照時間為 8 h·d-1，溫度（18±1）℃，濕度控制在85%～90%，培養(yǎng)45～50 d至子實體成熟并長滿全瓶時收獲，記錄每瓶子實體產(chǎn)量及菌株形態(tài)。

14活性成分測定

樣品經(jīng)60℃烘至恒重后測定蟲草粗多糖、蟲草素、蟲草酸、腺苷的含量。蟲草粗多糖提取采用先醇提再水提的方法進行，含量測定采用苯酚硫酸法進行。蟲草酸的檢測采用滴定法進行檢測。核苷類成分采用高效液相色譜法進行檢測，其中蟲草素的檢測條件色譜柱為ZORBAX SBAq （250 mm×46 mm），流動相為乙腈∶水（10∶90），流速為1 mL·min-1，檢測波長：260 nm，柱溫：30℃，進樣量：20 μL＼[23＼];腺苷的檢測條件為，色譜柱：RP18e（250 mm×46 mm，merck），流動相：乙腈∶001 mol·t-1 NaHPO4（5∶95），流速：1 mL·min-1，檢測波長：260 nm，柱溫：30℃，進樣量：20 μL＼[11＼];每個檢測樣品做3個平行試驗。

15品質(zhì)評價

為了便于不同單位、不同量級的指標能夠進行比較和加權(quán)，利用最大-最小歸一化算法處理＼[24＼]，Y=（X-Xmin）/（Xmax-Xmin）進行歸一化處理，對7株蛹蟲草菌株中活性成分含量及子實體產(chǎn)量進行分析。再綜合各成分所得的分值，繪制雷達圖，進行品質(zhì)綜合評價。

16數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 170進行試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，計算平均值和標準差，并進行單因素Anova分析，以Duncan′s分析比較差異顯著性。

2結(jié)果與分析

217株蛹蟲草菌株人工栽培形態(tài)比較分析

從圖1和表1可以看出，7株蛹蟲草子實體中，菌株H05、H03的長勢較好，粗細均勻，子實體長度較長，出草率高，菌株H01的長勢最差，幾乎不出草。

227株蛹蟲草菌株子實體產(chǎn)量比較分析

在相同培養(yǎng)條件下栽培得到7個蛹蟲草菌株子實體，針對菌株固體栽培生長情況進行產(chǎn)量測定。從表2可知，7株菌株的子實體產(chǎn)量存在極顯著差異，說明，菌株是影響子實體產(chǎn)量的最重要因素。其中菌株H05的子實體產(chǎn)量最高，為（204±032） g·瓶-1，其次為菌株H03。

237株蛹蟲草菌株活性成分含量比較分析

對相同培養(yǎng)條件下獲得的7株蛹蟲草菌株子實體中的腺苷、蟲草素、蟲草粗多糖、蟲草酸等活性成分進行檢測分析。從表3可知，7株蛹蟲草菌株中的活性成分差別較大，各菌株間蟲草素、腺苷、蟲草酸、蟲草粗多糖的含量均達到極顯著差異（P<001），其中腺苷H05菌株的含量最高，H01菌株的含量最低;蟲草素H05菌株的含量最高，H06菌株的含量最低;蟲草粗多糖H06菌株含量最高，H02菌株的含量最低;蟲草酸H06菌株的含量最高，H02菌株的含量最少。

247株蛹蟲草菌株品質(zhì)評價結(jié)果分析

從表3可以看出，H05菌株的腺苷、蟲草素含量及子實體的產(chǎn)量最高，H06菌株的蟲草粗多糖、蟲草酸含量較高。對7株蛹蟲草菌株中的活性成分的含量及子實體的產(chǎn)量進行歸一化算法后，得分情況見表4。雷達圖可以較為直觀地反映出菌株中各組分的分布情況。利用對不同菌株各組分進行最大-最小歸一化算法得出的具體分值作圖3，從圖3可知，菌株H05的各組分分布較為均勻，說明其綜合品質(zhì)較高，且組分都處于較高水平。

3討論與結(jié)論

范志微＼[19＼]對14株野生蛹蟲草菌株進行人工栽培子實體生長狀況篩選試驗;吳憲等＼[20＼]對6株蛹蟲草菌株進行子實體栽培及蟲草素和多糖含量進行檢測，篩選獲得的優(yōu)質(zhì)菌株中，蟲草素的含量最高可達046%;于海洋等＼[21＼]對8株蛹蟲草菌株的菌絲生長速度、菌落平均直徑、液體發(fā)酵菌絲體干重、培養(yǎng)周期以及子實體形態(tài)、重量、粗多糖含量的對比研究，篩選優(yōu)良蛹蟲草菌株;張俊等＼[22＼]用4個蓖麻蠶品種的5齡4 d幼蟲和4株蛹蟲草菌Cordyceps militaris菌株培育蠶蛹蟲草，以蓖麻蠶感染僵化率、出草率以及蠶蛹蟲草中腺苷、蟲草素、噴司他丁含量為指標，篩選最佳配對蓖麻蠶品種及蛹蟲草菌株，其蟲草素含量為148～194 mg·g-1、腺苷含量為069～082 mg·g-1;朱麗娜等＼[24＼]對市售的16株蛹蟲草子實體樣本中的活性成分進行研究，發(fā)現(xiàn)市售樣品中，各活性組分含量具有極大差異，蟲草素含量平均值為032%，最高為037%，多糖含量平均為304%，最高為48%，腺苷含量平均為0153%，最高為019%。先前的關于蛹蟲草菌株選育的研究大多數(shù)集中于對菌株的菌絲、子實體生長方面，對活性成分的研究相對較少，且大多數(shù)研究結(jié)果活性成分的含量低于本次篩選得到的菌株。

本研究通過對閩臺兩岸7株不同來源的蛹蟲草菌株中蟲草素、蟲草粗多糖、腺苷、蟲草酸的含量進行檢測，綜合菌株人工栽培情況，篩選出H05菌株為較為優(yōu)質(zhì)的菌株，其子實體中腺苷量可達0556%，蟲草素含量可達0523%，蟲草粗多糖含量可達989%，蟲草酸含量可達497%，平均子實體產(chǎn)量可達204 g·瓶-1。

但本研究僅對蛹蟲草菌株進行了簡單的篩選，采用的是常規(guī)的培養(yǎng)方法，并未對培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，也未對菌株進行遺傳穩(wěn)定性的研究，不能保證菌株的優(yōu)良特性能得以延續(xù)。因此如果想要獲得更高的活性成分含量，還需進一步的研究，優(yōu)化培養(yǎng)條件及培養(yǎng)基配方，并對菌株的遺傳穩(wěn)定性進行研究，獲得穩(wěn)定高產(chǎn)的菌株。

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（責任編輯：柯文輝）

柯軼，王娜，魏瑜，等高產(chǎn)活性成分蛹蟲草菌株的篩選＼[J＼]福建農(nóng)業(yè)科技，2021，51（2）：14-18.

收稿日期：2021-01-12

作者簡介：柯軼，女，1986年生，講師，主要從事食用菌栽培、食品微生物學應用方向研究。

基金項目：福州市農(nóng)業(yè)科技星火項目（2019-N-18）;福建省中青年教師教育科研項目（JAT171014）。