奚小荔?周浩雄?楊碧蘭?吳斌?楊逸冬

【摘要】目的 研究富含亮氨酸的重復(fù)序列蛋白1（LRRC1）通過巨盤狀蛋白1（DLG1）/Yes相關(guān)蛋白（YAP）信號通路調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞增殖的機制。方法 在原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者的癌灶組織及配對癌旁組織中，檢測LRRC1的表達(dá)水平。使用小干擾RNA（siRNA）抑制HepG2及Huh7中LRRC1的表達(dá)后，檢測細(xì)胞增殖能力及YAP、細(xì)胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）表達(dá)水平。通過共聚焦顯微鏡，定位HepG2細(xì)胞中LRRC1與DLG1分布。結(jié)果 肝細(xì)胞癌患者癌灶中LRRC1表達(dá)量較癌旁組織升高。siRNA 抑制HepG2及Huh7細(xì)胞中LRRC1基因表達(dá)后，細(xì)胞增殖能力受到抑制，YAP、Cyclin D1及CDK4表達(dá)水平下降。鏡下發(fā)現(xiàn)HepG2細(xì)胞中LRRC1與DLG1均主要分布于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)面，兩者分布位置高度重疊。結(jié)論 LRRC1通過DLG1/YAP信號通路調(diào)控細(xì)胞周期，促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖。

【關(guān)鍵詞】肝細(xì)胞癌;富含亮氨酸的重復(fù)序列蛋白1;巨盤狀蛋白1;細(xì)胞周期;增殖

LRRC1 promotes proliferation of hepatocellular carcinoma cells via DLG1/YAP signaling pathway Xi Xiaoli， Zhou Haoxiong， Yang Bilan， Wu Bin， Yang Yidong. Department of Gastroenterology， the Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University， Guangzhou 510630， China

Corresponding author， Yang Yidong， E-mail： yangyd6@ mail. sysu. edu. cn

【Abstract】Objective To investigate the mechanism of leucine-rich repeat-containing protein 1 （LRRC1） in regulating the proliferation of hepatocellular carcinoma （HCC） cells through the discs large MAGUK scaffold protein 1/Yes associated transcriptional regulator （DLG1/YAP） signaling pathway. Methods The expression levels of LRRC1 protein in the cancer tissues and paired adjacent tissues of HCC patients were detected by Western blot and immunohistochemistry. After down-regulating the expression levels of LRRC1 protein by using small interfering RNA （siRNA） in liver cancer cell lines HepG2 and Huh7， cell proliferation ability was detected by cell counting kit-8 （CCK-8 kit） for three times. The expression levels of YAP protein， Cyclin D1 and cyclin dependent kinase 4 （CDK4） were detected by Western blot. Finally， the distribution of LRRC1 and DLG1 proteins expressed in HepG2 cells was located by immunofluorescence under confocal microscope. Results The expression level of LRRC1 protein in the cancer tissues of HCC patients was significantly higher than that in the paired adjacent tissues. After down-regulating the expression levels of LRRC1 protein in both HepG2 and Huh7 cell lines by siRNA， the cell proliferation ability was significantly inhibited， and the expression levels of YAP protein， Cyclin D1 and CDK4 were down-regulated. Confocal microscope demonstrated that LRRC1 and DLG1 proteins were mainly distributed on the inner surface of HepG2 cell membrane. The distribution patterns of them were highly overlapped. Conclusions LRRC1 can regulate the cell cycle through the DLG1/YAP signaling pathway， thereby promoting the proliferation of HCC cells.

【Key words】Hepatocellular carcinoma;Leucine-rich repeat-containing protein 1;

Discs large MAGUK scaffold protein 1;Cell cycle;Proliferation

肝細(xì)胞癌是肝癌最主要的病理分型，具有高發(fā)病率及高病死率的特點，但是，肝細(xì)胞癌的具體分子發(fā)病機制尚不明確。既往研究顯示，肝細(xì)胞癌與其他上皮來源的惡性腫瘤類似，組織結(jié)構(gòu)改變以及細(xì)胞極性丟失是導(dǎo)致肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展的重要機制，而極性蛋白LAP家族具有維持組織正常結(jié)構(gòu)和細(xì)胞極性的重要功能，其功能異?；蛘弋惓１磉_(dá)參與了多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[1]。富含亮氨酸的重復(fù)序列蛋白1（LRRC1）是一種524個氨基酸的蛋白，也稱為LANO蛋白，其屬于LAP蛋白家族[2]。研究顯示，LRRC1在肝癌中具有促進(jìn)癌細(xì)胞增殖的作用，但未對其具體分子機制進(jìn)行進(jìn)一步研究[3]。我們既往的肝癌基因芯片表達(dá)譜研究顯示，LRRC1在肝癌患者癌灶中異常高表達(dá)[4]。因此本研究旨在探索LRRC1是否影響肝癌的發(fā)生、發(fā)展及其可能存在的相關(guān)分子機制。

材料與方法

一、材料來源

肝細(xì)胞癌組織樣品共10例，收集2014年4月至12月在中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院通過肝細(xì)胞癌手術(shù)切除的病理組織標(biāo)本，配對癌旁組織在距離肝癌癌灶邊緣2 cm以上區(qū)域收集，通過HE染色對所有組織標(biāo)本進(jìn)行病理確認(rèn)。依據(jù)中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究倫理委員會制定的臨床倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行樣本收集，亦獲得倫理委員會的批準(zhǔn)（中大附三醫(yī)倫[2014]2-7號），標(biāo)本收集前已獲取患者的知情同意及簽署知情同意書。

二、實驗試劑及儀器

1.主要試劑及抗體

LRRC1抗體（GeneTex， 美國），巨盤狀蛋白1（DLG1）抗體（Santa Cruz， 美國），Yes相關(guān)蛋白（YAP）、細(xì)胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）抗體（CellSignaling Technology， 美國），β-actin抗體（Sigma-Aldrich， 美國），LRRC1 小干擾RNA（siRNA）（上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司），DAPI試劑（Invitrogen， 美國），DAB顯色液（DAKO， 丹麥;CCK-8試劑盒（Dojindo， 日本）;Lipofectamin 2000（Invitrogen， 美國）。DMEM培養(yǎng)液（Gibco， 美國）、胎牛血清（Gibco， 美國）、肝癌細(xì)胞系HepG2及Huh7由中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院中心實驗室惠贈。

2.主要儀器

NanoDrop2000微量紫外分光光度計（Thermo-Scientific，美國），PCR儀（Labnet，美國），SDS-PAGE電泳槽（BIO-RAD， 美國），轉(zhuǎn)膜儀（BIO-RAD， 美國），顯微鏡成像系統(tǒng)（Leica， 德國），激光共聚焦顯微鏡（Leica， 德國）等。

三、實驗方法

1.免疫組織化學(xué)染色及免疫細(xì)胞熒光染色后激光共聚焦顯微鏡觀察

肝癌病理標(biāo)本切小塊，甲醛固定后，經(jīng)過70%、95%、100%不同濃度乙醇階梯脫水，二甲苯組織透明后，浸蠟包埋，切片制成石蠟切片。石蠟切片后經(jīng)二甲苯脫蠟和100%、95%、70%不同濃度乙醇梯度水化后，放置于3%H2O2中10 min消除切片組織中的過氧化物酶，在Tris-EDTA抗原修復(fù)液（pH 9.0）中高壓抗原修復(fù)2 min，加入稀釋后的抗LRRC1（1∶100）一抗4℃孵育過夜;磷酸鹽吐溫緩沖液（PBST）浸泡5 min后，二抗37℃孵育2h，PBST浸泡15 min，滴加DAB進(jìn)行顯色反應(yīng)，適時以適量超純水清洗終止顯色反應(yīng)，蘇木素染核后，進(jìn)行樹脂封片，并于顯微鏡下觀察。HepG2種于35 mm玻底皿，使用細(xì)胞培養(yǎng)液（DMEM和10%胎牛血清）培養(yǎng)，細(xì)胞密度達(dá)40%后，使用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3次，使用4%多聚甲醛室溫固定20 min，加入0.5%曲拉通;加入稀釋后的一抗：抗LRRC1（1∶100）及抗DLG1（1∶100）4℃孵育過夜，PBS洗滌3次后加入488 nm及594 nm波長的二抗，避光條件下37℃孵育2 h，PBS洗滌3次，DAPI染核后，PBS洗滌3次，使用激光共聚焦顯微鏡觀察。

2.細(xì)胞培養(yǎng)及處理

將HepG2及Huh7細(xì)胞分別接種于6孔板中，使用細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)，待細(xì)胞密度達(dá)60%后，細(xì)胞分別予空白對照siRNA（siNC組）及LRRC1基因沉默siRNA（siLRRC1組）處理細(xì)胞，每組3個重復(fù)孔，轉(zhuǎn)染操作流程按照Lipofectamin 2000試劑盒說明書，轉(zhuǎn)染后48 h收取細(xì)胞進(jìn)行下一步研究。

3.細(xì)胞總蛋白、組織蛋白提取以及蛋白電泳

細(xì)胞處理后，在6孔板中加入細(xì)胞裂解液（細(xì)胞裂解液中提前按照1∶100加入蛋白酶抑制劑PMSF），細(xì)胞刷輕輕刮下細(xì)胞，混勻后冰上裂解30 min，通過BCA法計算裂解液中蛋白濃度，100℃加熱5 min變性后，直接電泳或分裝后放置于-80℃保存。蛋白電泳操作步驟參考文獻(xiàn)[5]，按每孔相同的蛋白濃度取適量蛋白標(biāo)本進(jìn)行蛋白電泳并轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜后，5%脫脂牛奶封閉2 h，根據(jù)目標(biāo)蛋白的分子量分別將不同條帶浸泡至稀釋后的一抗稀釋液中：抗LRRC1（1∶1000）、抗DLG1（1∶500）、抗YAP（1∶1000）、抗Cyclin D1（1∶1000）、抗CDK4（1∶1000）、抗β-actin（1∶5000），4℃孵育一抗搖床過夜后，Tris-鹽酸鹽吐溫緩沖液（TBST）洗滌2次，每次10 min，常溫孵育二抗2 h后，TBST洗滌3次，每次10 min，暗房中ECL發(fā)光液發(fā)光后壓片曝光顯像。

4. 細(xì)胞活性測定

HepG2及Huh7經(jīng)siRNA處理后，將細(xì)胞從6孔板消化脫落后接種于96孔板，每孔接種細(xì)胞數(shù)量為1000個，每孔內(nèi)加入200 μl 細(xì)胞培養(yǎng)液，每組設(shè)3個重復(fù)孔，接種24 h細(xì)胞貼壁后，將每孔全部培養(yǎng)液吸出，每個檢測孔中加入100 μl檢測培養(yǎng)液（含10 μl的CCK-8檢測溶液和90 μl的DMEM培養(yǎng)液）。繼續(xù)在細(xì)胞培養(yǎng)箱避光孵育2 h，使用酶標(biāo)儀測定波長490 nm下每孔的吸光度，記為該檢測孔的細(xì)胞增殖活性，重復(fù)上述實驗共3次。

四、統(tǒng)計學(xué)處理

運用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。正態(tài)分布資料以表示，應(yīng)用獨立樣本t檢驗對2組獨立樣本進(jìn)行比較，應(yīng)用配對t檢驗對配對樣本進(jìn)行比較，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

一、人肝癌癌灶組織和配對癌旁組織中LRRC1蛋白表達(dá)分析

對人肝癌癌灶組織和配對癌旁組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，結(jié)果顯示在癌灶組織中，LRRC1蛋白陽性信號明顯多于其配對的癌旁組織（圖1A）。通過對10例肝癌組織樣品進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色后隨機挑選視野計數(shù)900個細(xì)胞LRRC1蛋白陽性表達(dá)情況，統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，LRRC1在肝癌癌灶組織[（71.3±8.9）%]中的表達(dá)高于配對的癌旁組織[（21.2±11.9）%]，t=20.37，P < 0.001。收集肝癌患者的臨床資料，分析肝癌癌灶中LRRC1表達(dá)與患者年齡、性別、HBV感染、腫瘤大小、TNM分期及肝硬化的相關(guān)性，結(jié)果顯示LRRC1表達(dá)與上述臨床指標(biāo)無相關(guān)性，組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均> 0.05），見表1。對人肝癌癌灶組織和配對癌旁組織進(jìn)行蛋白免疫印跡檢測，結(jié)果顯示LRRC1在肝癌癌灶組織與配對癌旁組織中的表達(dá)差異與免疫組織化學(xué)染色結(jié)果相一致（圖1B）。

二、抑制LRRC1蛋白表達(dá)后肝癌細(xì)胞活性分析

使用siRNA抑制肝癌細(xì)胞HepG2及Huh7中LRRC1蛋白的表達(dá)后，利用CCK-8檢測試劑盒進(jìn)行細(xì)胞活性檢測，結(jié)果顯示HepG2及Huh7細(xì)胞中LRRC1蛋白表達(dá)抑制后，細(xì)胞活性下降（圖2），見表2、3。

三、抑制LRRC1蛋白表達(dá)后肝癌細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)情況

通過siRNA抑制HepG2及Huh7細(xì)胞中的LRRC1蛋白的表達(dá)后，通過蛋白免疫印跡法檢測各分組中DLG1、YAP及周期相關(guān)蛋白Cyclin D1、CDK4蛋白表達(dá)量。實驗結(jié)果顯示，siRNA下調(diào)細(xì)胞中的LRRC1蛋白的表達(dá)后，細(xì)胞中DLG1蛋白水平并無明顯改變，YAP及周期相關(guān)蛋白Cyclin D1、CDK4蛋白表達(dá)量均下降（圖3A）。

四、HepG2細(xì)胞內(nèi)LRRC1與DLG1分布研究

使用共聚焦顯微鏡對HepG2細(xì)胞中LRRC1及DLG1蛋白的分布進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，LRRC1及DLG1蛋白均主要分布于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)面，小部分游離分布于胞漿中，兩者的分布位置高度重疊（圖3B）。

討論

肝細(xì)胞癌是高發(fā)病率與高死亡率的惡性腫瘤，其具體發(fā)病機制有待進(jìn)一步研究探索。本實驗中，我們在肝癌患者病理組織及肝癌細(xì)胞系中進(jìn)行研究，結(jié)果顯示極性蛋白LRRC1在肝癌癌灶組織中異常高表達(dá)，在肝癌細(xì)胞中下調(diào)LRRC1，可抑制肝癌細(xì)胞增殖，進(jìn)一步的分子機制研究顯示，LRRC1可能通過與DLG1相互作用，上調(diào)YAP蛋白水平，從而通過調(diào)控細(xì)胞周期促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖。

上皮細(xì)胞形態(tài)具有極性，可分為頂端和基底端，表現(xiàn)為形態(tài)的不對稱，這種具有極性的形態(tài)作為上皮細(xì)胞的特點，極性蛋白通過調(diào)控細(xì)胞間黏附及信號通路級聯(lián)傳導(dǎo)，維持著細(xì)胞極性、形態(tài)，保持細(xì)胞間的緊密連接以及組織的正常三維結(jié)構(gòu)，共同發(fā)揮維持上皮組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)的重要作用[6-7]。肝細(xì)胞癌作為上皮來源的惡性腫瘤之一，肝細(xì)胞極性丟失伴隨增殖異常是導(dǎo)致肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展的重要機制，但肝癌細(xì)胞極性蛋白的具體作用機制仍未明了。多項研究提示，極性蛋白LRRC1在肝細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌等多種惡性腫瘤中均異常高表達(dá)[8-9]。有研究者認(rèn)為，LRRC1在肝癌中高表達(dá)與細(xì)胞中LRRC1基因啟動子區(qū)域去甲基化相關(guān)[9]。我們的前期基因芯片表達(dá)譜研究同樣發(fā)現(xiàn)，極性蛋白LRRC1在肝癌癌灶中異常高表達(dá)（GEO： GSE67764）[4]。在本研究中，我們通過免疫組織化學(xué)染色及蛋白免疫印跡法檢測證實了肝癌中LRRC1蛋白表達(dá)上調(diào)，提示LRRC1表達(dá)上調(diào)在肝癌中可能發(fā)揮重要作用。在往后的進(jìn)一步的實驗中，肝癌中LRRC1異常高表達(dá)的分子機制有待進(jìn)一步探索。研究顯示LRRC1的表達(dá)與肝癌患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，LRRC1可作為肝癌預(yù)后評估的標(biāo)志物之一[3]。在本研究中，我們分析了肝癌癌灶中LRRC1表達(dá)與患者年齡、性別、HBV感染、腫瘤大小、TNM分期及肝硬化等臨床特征間的相關(guān)性，結(jié)果顯示LRRC1表達(dá)與上述臨床特征無相關(guān)性，考慮到本研究納入的臨床標(biāo)本較少，今后我們將進(jìn)一步增加研究樣本量，針對LRRC1的臨床意義及作為肝癌預(yù)后標(biāo)志物之一的臨床價值進(jìn)行深入挖掘證實。

通過細(xì)胞活性實驗，我們證實了LRRC1具有促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的作用，此結(jié)果與既往研究結(jié)果相符[3]。極性蛋白LRRC1缺乏PDZ結(jié)構(gòu)域，是其區(qū)別于LAP家族其他蛋白成員的重要特點，雖然缺乏PDZ結(jié)構(gòu)域，LRRC1可以通過其C端的TSV序列，與具有PDZ結(jié)構(gòu)域的蛋白，如DLG1等相互作用，調(diào)控下游信號傳導(dǎo)[10]。既往肝癌細(xì)胞及肝癌患者組織標(biāo)本研究已證實DLG1蛋白的表達(dá)水平與YAP的活性呈負(fù)相關(guān)，DLG1蛋白具有抑制YAP活性的功能[11]。Hippo/YAP信號通路在生物生長、發(fā)育過程中具有調(diào)控細(xì)胞生長速度，限制器官體積等作用，YAP蛋白作為Hippo信號通路中的核心效應(yīng)蛋白，在其上游的LATS1/2作用下導(dǎo)致YAP磷酸化，磷酸化的YAP將滯留于胞漿中泛素化并降解，使YAP下游通路處于靜止?fàn)顟B(tài);當(dāng)受到氧化應(yīng)激、缺血缺氧、物理因素、G蛋白耦聯(lián)受體等途徑刺激后，可減少YAP降解，增多的YAP與TAZ結(jié)合并進(jìn)入細(xì)胞核與轉(zhuǎn)錄因子TEADs共同發(fā)揮信號轉(zhuǎn)錄功能，促進(jìn)靶基因的表達(dá)[12]。Hippo/YAP信號通路的調(diào)控異常，可促進(jìn)細(xì)胞異常增殖并拮抗凋亡，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，因此LRRC1通過DLG1調(diào)控YAP可能是LRRC1促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的機制[13]。在進(jìn)一步的分子機制研究中，我們發(fā)現(xiàn)LRRC1蛋白水平與YAP蛋白的表達(dá)水平呈正相關(guān);同時，LRRC1的表達(dá)水平與周期相關(guān)蛋白Cyclin D1及CDK4表達(dá)水平也呈正相關(guān)關(guān)系。通過激光共聚焦顯微鏡對LRRC1及DLG1蛋白進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)定位，提示兩者在細(xì)胞內(nèi)可能存在相互作用。LRRC1及DLG1的相互作用目前未完全明了，部分研究顯示正常狀態(tài)下極性蛋白之間的相互協(xié)同作用可增強極性蛋白維持細(xì)胞形態(tài)及正常的信號傳導(dǎo)功能。另有研究顯示，在疾病狀態(tài)下，如腫瘤細(xì)胞內(nèi)，異常增多的極性蛋白之間產(chǎn)生拮抗作用，導(dǎo)致極性蛋白的功能受到抑制[14-16]。本實驗的研究結(jié)果提示，肝癌細(xì)胞內(nèi)異常增多的LRRC1與DLG1結(jié)合后，可能抑制DLG1發(fā)揮其正常功能，導(dǎo)致YAP及下游通路的異常活化。在今后進(jìn)一步的實驗中，需要完善免疫共沉淀實驗、GST蛋白沉降實驗等方法證實LRRC1與DLG1的相互作用，并深入研究對下游YAP蛋白及細(xì)胞周期的影響及分子機制。

綜上所述，LRRC1在肝癌細(xì)胞中異常高表達(dá)，可能通過與DLG1相互作用，上調(diào)YAP蛋白水平，從而通過調(diào)控細(xì)胞周期而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖。本研究對LRRC1在肝癌的發(fā)生、發(fā)展的作用及可能機制提供了科學(xué)依據(jù)。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] Santoni MJ， Kashyap R， Camoin L， Borg JP. The Scribble family in cancer： twentieth anniversary. Oncogene，2020，39（47）：7019-7033.

[2] Saito H， Santoni MJ， Arsanto JP， Jaulin-Bastard F， Le Bivic A， Marchetto S， Audebert S， Isnardon D， Adéla?de J， Birnbaum D， Borg JP. Lano， a novel LAP protein directly connected to MAGUK proteins in epithelial cells. J Biol Chem， 2001， 276（34）：32051-32055.

[3] Li Y， Zhou B， Dai J， Liu R， Han ZG. Aberrant upregulation of LRRC1 contributes to human hepatocellular carcinoma. Mol Biol Rep，2013，40（7）：4543-4551.

[4] Yang Y， Guo Y， Tan S， Ke B， Tao J， Liu H， Jiang J， Chen J， Chen G， Wu B. β-Arrestin1 enhances hepatocellular carcinogenesis through inflammation-mediated Akt signalling. Nat Commun，2015，6：7369.

[5] 雷一鳴， 楊逸冬， 譚嗣偉， 林顯藝， 吳斌. TNF-α通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞自噬并促進(jìn)增殖的研究. 新醫(yī)學(xué)， 2017， 48（11）：770-774.

[6] Choi J， Troyanovsky RB， Indra I， Mitchell BJ， Troyanovsky SM. Scribble， Erbin， and Lano redundantly regulate epithelial polarity and apical adhesion complex. J Cell Biol， 2019， 218 （7）：2277-2293.

[7] Schmidt A， Peifer M. Scribble and Dlg organize a protection racket to ensure apical-basal polarity. Proc Natl Acad Sci U S A，2020， 117（24）：13188-13190.

[8] Wu H， Mu X， Liu L， Wu H， Hu X， Chen L， Liu J， Mu Y， Yuan F， Liu W， Zhao Y. Bone marrow mesenchymal stem cells-derived exosomal microRNA-193a reduces cisplatin resistance of non-small cell lung cancer cells via targeting LRRC1. Cell Death Dis， 2020， 11（9）：801.

[9] Hua S， Ji Z， Quan Y， Zhan M， Wang H， Li W， Li Y， He X， Lu L. Identification of hub genes in hepatocellular carcinoma using integrated bioinformatic analysis. Aging （Albany NY），2020， 12（6）：5439-5468.

[10] Yamanaka T， Ohno S. Role of Lgl/Dlg/Scribble in the regulation of epithelial junction， polarity and growth. Front Biosci， 2008， 13：6693-6707.

[11] Wu D， Liu G， Liu Y， Saiyin H， Wang C， Wei Z， Zen W， Liu D， Chen Q， Zhao Z， Zou L， Huang H， Jiang S， Yu L. Zinc finger protein 191 inhibits hepatocellular carcinoma metastasis through discs large 1-mediated yes-associated protein inactivation. Hepatology，2016， 64（4）：1148-1162.

[12] Boopathy GTK， Hong W. Role of hippo pathway-YAP/TAZ signaling in angiogenesis. Front Cell Dev Biol，2019， 7：49.

[13] Webb Strickland S， Brimer N， Lyons C， Vande Pol SB. Human Papillomavirus E6 interaction with cellular PDZ domain proteins modulates YAP nuclear localization. Virology，2018， 516：127-138.

[14] Elsum I， Yates L， Humbert PO， Richardson HE. The Scribble-Dlg-Lgl polarity module in development and cancer： from flies to man. Essays Biochem，2012， 53：141-168.

[15] Stephens R， Lim K， Portela M， Kvansakul M， Humbert PO， Richardson HE. The scribble cell polarity module in the regulation of cell signaling in tissue development and tumorigenesis. J Mol Biol，2018， 430（19）：3585-3612.

[16] Bonello TT， Peifer M. Scribble： a master scaffold in polarity， adhesion， synaptogenesis， and proliferation. J Cell Biol，2019， 218（3）：742-756.

（收稿日期：2020-12-18）

（本文編輯：楊江瑜）