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        瓊脂糖明膠在組織脫水前預(yù)包埋中的應(yīng)用

        2021-04-25 03:24:34時維平史海磊付廣明趙樹超戚慧陽付海洋
        臨床與實驗病理學(xué)雜志 2021年3期
        關(guān)鍵詞:恒溫箱瓊脂糖細(xì)小

        時維平,史海磊,付廣明,趙樹超,戚慧陽,付海洋

        優(yōu)質(zhì)的HE切片是病理診斷的前提條件,在病理工作中占據(jù)重要地位[1]。HE染色與諸多環(huán)節(jié)有關(guān),組織包埋質(zhì)量是其中重要的一環(huán),正確的組織包埋是HE制片及診斷的基礎(chǔ)[2]。在日常工作中,雖然大部分組織均能被正確包埋,但仍會遇到一些問題,如細(xì)小、零碎的標(biāo)本使用紗布或脫水紙進行包裹,脫水后易黏附在紗布或脫水紙上,包埋時無法進行完整剝離,造成人為標(biāo)本丟失;特殊標(biāo)本如內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)(endoscopic submucosal dissection, ESD)等脫水后需查找正確的包埋面,否則會出現(xiàn)診斷失誤;取材時某些組織與腫瘤或息肉粘連不緊密,脫水后易發(fā)生剝離或斷裂的現(xiàn)象,對診斷工作造成一定影響[3]。本科室經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn),使用瓊脂糖明膠在脫水前對組織標(biāo)本進行預(yù)包埋,脫水后不影響組織原固有形態(tài),包埋省時、省力,對HE及免疫組化無影響,現(xiàn)介紹如下。

        1 材料與方法

        1.1 標(biāo)本收集日常工作中息肉或腫瘤與組織粘連處較小的標(biāo)本,如腫瘤與周圍組織粘連處較小、膽囊息肉等標(biāo)本,以及ESD標(biāo)本、婦科刮宮、腦科手術(shù)室等細(xì)小零碎的標(biāo)本。

        1.2 儀器櫻花VP1脫水機,Leica切片機,Roche HE 600單獨滴染染色機,DAKO全自動免疫組化機Link 48,冰箱,一次性藥碗,電熱恒溫箱,水浴箱。

        1.3 試劑瓊脂糖購自上海藍(lán)季公司,明膠購自國藥集團,HE染色試劑為Roche HE 600染色套裝,CKpan一抗購自DAKO公司。

        1.4 方法(1)配制瓊脂糖明膠:0.5 g瓊脂糖加入100 mL蒸餾水中,加熱至完全融化后放入60 ℃恒溫箱中備用。1 g明膠加入100 mL蒸餾水,加熱至完全融化后放入60 ℃恒溫箱中備用。使用時將兩者按1 ∶1進行混勻。(2)取材:先將一部分凝膠倒入一次性藥碗中,稍冷卻,然后放入組織定型,再倒入瓊脂糖明膠完全包被組織,置于冰箱中冷藏,1~2 min后瓊脂糖明膠冷卻成形,取出后進行修整,使其大小及厚度與包埋盒一致(圖1)。(3)包埋:組織脫水,透明,浸蠟。(4)HE染色:石蠟切片3 μm厚,65 ℃烘烤切片15 min,使用Roche HE 600染色機染色,染色模式設(shè)置為H2A2E4。(5)免疫組化染色:石蠟切片3 μm厚,65 ℃烘烤切片60 min,脫蠟水化后進行抗原修復(fù),上機前打開試劑蓋檢查試劑是否充足,采用免疫組化EnVision法染色。

        圖1 組織使用瓊脂糖-明膠進行預(yù)包埋:A.細(xì)小破碎的腦組織標(biāo)本;B.肝腫瘤與周圍組織粘連的標(biāo)本;C.胃組織的特定切緣面標(biāo)本;D.胃鏡ESD標(biāo)本

        2 結(jié)果

        本組經(jīng)瓊脂糖明膠包裹的組織,脫水良好,組織原固有狀態(tài)保持完好,未發(fā)現(xiàn)剝離或斷裂現(xiàn)象。細(xì)小破碎的腦組織等標(biāo)本,無需使用易黏附標(biāo)本的紗布等包裹,包埋時也不會發(fā)生遺失現(xiàn)象,充分保證了組織的完整性。ESD或特定切緣面等標(biāo)本進行包裹后,不會在脫水盒中發(fā)生位置偏移(圖2),包埋時無需費時費力查找特定包埋面,組織-瓊脂糖明膠塊方便易取,可直接放入包埋底模中,省時、省力。經(jīng)HE及免疫組化染色,組織形態(tài)保持完好,染色效果佳(圖3、4)。

        ②③④

        3 討論

        在日常工作中,經(jīng)常遇到組織脫水后破裂或損傷的現(xiàn)象,包埋時遺失、組織包埋面不易確認(rèn)等現(xiàn)象為后續(xù)的制片及診斷埋下隱患。楊洋等[4]報道的斜面包埋手法用于解決ESD組織包埋面的問題,其對包埋技巧及速度有一定的要求;曾曉蓓等[5]報道使用瓊脂作為細(xì)胞蠟塊的凝膠劑,本組將其應(yīng)用于組織預(yù)包埋中,發(fā)現(xiàn)效果不理想,主要原因是瓊脂濃度太高、融化需要較長時間,太低凝形不成功,且濃度高低均對后續(xù)脫水有影響,不方便操作。

        本實驗使用的瓊脂糖明膠較好的解決了上述問題。瓊脂糖與瓊脂相比,其結(jié)構(gòu)和成分更單一,且生物安全性已得到廣泛證實[6],其凝膠后具有一定的力學(xué)性能,如硬度、粘彈性等;而明膠作為一種凝膠劑,具有更低的液化點和凝固點。經(jīng)過反復(fù)實驗,兩者單獨使用效果不佳,配合使用效果較好,一方面為了降低各自的濃度,達(dá)到降低融點、提高融化速度的目的,另一方面兩者配合增加凝固后的硬度,方便后續(xù)操作。經(jīng)過瓊脂糖明膠預(yù)包埋的組織,既維持組織原始固有形態(tài),又避免了組織在脫水包埋過程中的損傷或損失。對于息肉等細(xì)小的粘連性標(biāo)本,可以維持其與組織的原始位置,不會發(fā)生剝離的現(xiàn)象;臨床送檢的細(xì)小零碎標(biāo)本不會再出現(xiàn)粘連在紗布或脫水紙上,保證了取材標(biāo)本的完整性;對于其他標(biāo)本則節(jié)省了時間,提高了工作效率。我們對細(xì)胞蠟塊反復(fù)進行瓊脂糖明膠包埋實驗,發(fā)現(xiàn)其效果較好。另外,在對組織進行預(yù)包埋時,可以使用冰袋促使其凝固,便于組織在凝膠中定型。

        瓊脂糖明膠在整個過程中僅僅起支撐作用,與細(xì)胞蠟塊的混合離心不同,未滲透至組織內(nèi)部中,對HE、免疫組化及分子檢測等無影響。在使用瓊脂糖明膠對組織進行預(yù)包埋需要注意以下問題:(1)使用前進行瓊脂糖和明膠的混合,降低了融點,節(jié)約了時間;(2)組織固定后、脫水前進行預(yù)包埋,然后直接進入脫水程序,避免組織固定不佳或瓊脂糖明膠吸水膨脹導(dǎo)致脫水失敗;(3)瓊脂糖明膠包埋完成后進行適當(dāng)修整,以免無法放入脫水盒中。

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