殷素平

廣東省廣州市番禺區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)所 廣東廣州 511450

磺胺類和喹諾酮類藥物均是常見(jiàn)的合成抗生素，廣泛存在于水產(chǎn)養(yǎng)殖中，且可以通過(guò)多種途徑積蓄到人體中，尤其是喹諾酮類藥物會(huì)殘留于人體破壞造血系統(tǒng)，進(jìn)而導(dǎo)致溶血性貧血癥，嚴(yán)重時(shí)引發(fā)癌癥[1]。

1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)環(huán)節(jié)

所選用的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法采購(gòu)美國(guó)AB科技有限公司3200QTRAPLC/MS/MS。本次試驗(yàn)所選擇的色譜柱型號(hào)為AgilentEdipsePlusC182.5mm×100mm，5μm，柱溫控制為35℃，流量控制為0.8ml/min，進(jìn)取量設(shè)定為20μL。流動(dòng)相為甲醇-1%甲酸5mmol乙酸銨，經(jīng)過(guò)0-15min甲醇含量由最初的50%增加至90%，當(dāng)甲醇比例達(dá)到90%時(shí)各個(gè)化合物的出峰效果達(dá)到最佳狀態(tài)，嚴(yán)格將流速設(shè)定為0.8ml/min。表1是具體的磺胺類和喹諾酮類的檢測(cè)離子與條件。

2 試驗(yàn)操作環(huán)節(jié)

試驗(yàn)過(guò)程中先將樣品解凍，在50ml的離心管中準(zhǔn)確稱取5g的樣品，準(zhǔn)確加入50μL混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液，加入10g的無(wú)水硫酸鈉攪拌，然后再加入乙腈渦旋混合，確保各種物質(zhì)可以充分?jǐn)噭?，最?0000r/min離心5min分離。上清液中緩緩倒入已經(jīng)準(zhǔn)備好的正已烷溶液，充分振蕩確?？梢苑謱?，提取下層的清液倒入至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中。此過(guò)程中需要注意的一點(diǎn)是，殘?jiān)枰龠M(jìn)行一次提取，提取完成后合并兩次提取液到蒸發(fā)瓶中，確保蒸發(fā)近干，用1ml的流動(dòng)相經(jīng)渦流混合，過(guò)0.2μm濾膜，對(duì)濾液開(kāi)展3200QTRAPLC/MS/MS分析[2]。

3 試驗(yàn)結(jié)果分析

3.1 前處理?xiàng)l件的合理選擇

本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，磺胺類化合物在酸性條件下溶解度較大，如果選用酸化乙腈加以提取則可以進(jìn)一步提升提取效率。試驗(yàn)時(shí)在旋蒸至2-3ml時(shí)加入10ml的無(wú)水乙醇，以便確保提取液可以蒸發(fā)至近干，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)喹諾酮類藥物的提取效率較為穩(wěn)定，重復(fù)性良好。

3.2 質(zhì)譜條件的合理選擇

通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本次所選擇的5種化合物和2種內(nèi)標(biāo)均可以獲得較高的（M＋H）母離子，而通過(guò)調(diào)節(jié)毛管電壓和椎孔電壓，發(fā)現(xiàn)目標(biāo)物質(zhì)的信號(hào)響應(yīng)能力可以達(dá)到最高。將乙腈、甲醇和0.1%甲酸的5mmol/l乙酸銨溶液、0.1%甲酸溶液、0.1%甲酸的2mmol/l乙酸銨溶液作為流動(dòng)相。試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)甲醇作為流動(dòng)相時(shí)目標(biāo)物的靈敏度可以大大提升，且所形成的峰形更好，而如果將0.1%甲酸溶液作為流動(dòng)相時(shí)同樣可以得到良好的離子化效果。由此可以得出，在正離子模式下，最佳的質(zhì)譜條件為乙醇和0.1%甲酸5mmol/l乙酸銨溶液溶液。

3.3 基質(zhì)效應(yīng)分析

本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高效液相色譜-質(zhì)譜法對(duì)磺胺類藥物基質(zhì)有良好的抑制效應(yīng)作用，這對(duì)于提升檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的真實(shí)性具有十分重要的意義。本次試驗(yàn)采用內(nèi)標(biāo)法。在應(yīng)用試劑配制標(biāo)準(zhǔn)溶液這一方法時(shí)，質(zhì)量分?jǐn)?shù)控制為4.0μg/kg，發(fā)現(xiàn)無(wú)法開(kāi)展準(zhǔn)確的定量，繼而將質(zhì)量分?jǐn)?shù)控制為10.0μg/kg，發(fā)現(xiàn)恩諾沙星與氘代環(huán)丙沙星的回收率均可以達(dá)到94.7-112%，但磺胺類藥物的回收率卻僅僅只達(dá)到20-50%，且重復(fù)性不佳。應(yīng)用基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液這一方法時(shí)，先將質(zhì)量分?jǐn)?shù)控制為1.0μg/kg，發(fā)現(xiàn)回收率僅僅可以達(dá)到45-67%，重復(fù)性不佳。然后加入內(nèi)標(biāo)物，質(zhì)量分?jǐn)?shù)控制為0.20μg/kg，實(shí)際質(zhì)量分?jǐn)?shù)控制為0.163-0.255μg/kg，回收率可以達(dá)到87-120%。在應(yīng)用向空白樣本中加入標(biāo)準(zhǔn)品這一方法時(shí)，發(fā)現(xiàn)在處理過(guò)程中待測(cè)物質(zhì)均發(fā)生了不同程度的損失，尤其是本身含量較低的樣品損失更加明顯。

3.4 試驗(yàn)所得結(jié)論

本次試驗(yàn)通過(guò)應(yīng)用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定磺胺類及喹諾酮類共7種抗生素含量，以標(biāo)準(zhǔn)加入法開(kāi)展定量分析，可以有效減小基質(zhì)干擾，檢測(cè)準(zhǔn)確率得到較大程度的提升，尤其是在回收率方面能力更加突出，實(shí)際應(yīng)用效果較好，值得推廣。

表1 磺胺類和喹諾酮類的檢測(cè)離子與條件