郭 鑫 張雨欣 李治建 霍仕霞

1.烏魯木齊市婦幼保健院藥劑科，新疆烏魯木齊 830001；2.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所藥劑室，新疆烏魯木齊 830049

木尼孜其賽甫拉合劑是民族醫(yī)常用的制劑，由睡蓮花、菊苣根、天山堇菜等8 味藥材組成。能夠調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、抗炎、提高機體免疫力、改善新陳代謝[1-2]。目前該合劑作為院內(nèi)制劑，應(yīng)用于各大維吾爾醫(yī)醫(yī)院，治療白癜風、銀屑病和濕疹等皮膚病效果顯著[3-5]；在治療盆腔炎性疾病后遺癥、乳腺增生等婦科病方面也有廣泛應(yīng)用[6]。目前木尼孜其賽甫拉合劑質(zhì)量標準為院內(nèi)制劑內(nèi)部標準，除常規(guī)制劑檢查以外，沒有定性或定量方法，造成成品質(zhì)量差異較大，為了控制其質(zhì)量，本研究對該制劑中的各藥材進行了系統(tǒng)的研究，建立合劑中睡蓮花、菊苣薄層色譜（TLC）鑒別和秦皮乙素含量測定，初步建立木尼孜其賽甫拉合劑的質(zhì)量控制方法。

1 材料

1.1 儀器

LC-2030D 高效液相色譜儀（日本島津）；SQP 電子天平（賽多利斯，萬分之一）；WD-9403A 型雙光觀察照相儀（北京沃德）；WG1-070 超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)）；DHG-9123A 型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏）；XMTD-7000 電熱恒溫水浴鍋（北京永光明）。

1.2 試藥

秦皮乙素對照品（批號：11731-200501）、煙花苷對照品（批號：112007-201602），紫云英苷對照品（批號：20180725），菊苣對照藥材（批號：121388-20092）均購自中國食品藥品檢定研究院。天山堇菜（批號：201705001）、菊苣根（批號：201702001）、菊苣子（批號：201709001）均購自北京時珍堂（宜昌）藥業(yè)有限公司；睡蓮花（批號：H30180804）、刺糖（批號：Z30091305）均購自新疆麥迪森維藥有限公司飲片廠；玫瑰花（批號：171203）購自毫州市云中藥業(yè)有限公司；紅棗（批號：201810001）購自湖北一方制藥有限公司，經(jīng)維吾爾醫(yī)藥研究所閆明研究員鑒定為正品。木尼孜其賽甫拉合劑（批號：181002-8）為新疆維吾爾醫(yī)藥研究所自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 睡蓮花 取木尼孜其賽甫拉合劑10 mL，水浴蒸干，殘渣加甲醇10 mL，超聲30 min，濾過，取續(xù)濾液濃縮至2 mL，作為供試品。取睡蓮花藥材2 g，同法制備睡蓮花樣品。另分別取煙花苷、紫云英苷對照品適量，加甲醇分別制成均含1 mg/mL 的對照品。同時制備陰性樣品。吸取對照品溶液3 μL、供試品、陰性、睡蓮花各7 μL，點于同一HSGF254 板，以乙酸乙酯∶甲酸∶水（10∶1∶2）上層為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液顯色，105℃烘干，365 nm 下檢視[7-9]，供試品色譜中，與對照品、睡蓮花相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾。見圖1。

圖1 木尼孜其賽甫拉合劑中睡蓮花薄層色譜圖

2.1.2 菊苣根、菊苣子 取木尼孜其賽甫拉合劑20 mL，加石油醚（60～90℃）30 mL，超聲30 min，濾過，取續(xù)濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯∶甲醇（1∶1）混合液1 mL 溶解，作為供試品。另取菊苣對照藥材1 g，同法制備對照藥材溶液。同時制備陰性樣品。吸取上述溶液各10 μL，點于同一GF254 板，以石油醚-二氯甲烷（1∶4）為展開劑，4℃下展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液顯色，105℃烘干，于365 nm 下和日光下檢視[10-16]，供試品色譜與對照藥材相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點或斑點。見圖2。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 Inertsil ODS-SP 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；甲醇-乙腈-0.2%H3PO4水溶液（9∶6∶85）；342 nm，1.0 mL/min；柱溫：30℃[17-22]。

2.2.2 對照品的配制 取秦皮乙素適量，精密稱定，置棕量瓶中，加甲醇制成1 mL∶800 μg 的對照品貯備液。

圖2 木尼孜其賽甫拉合劑中菊苣根、菊苣子薄層色譜圖

2.2.3 供試品 精密吸取木尼孜其賽甫拉合劑2 mL 置10 mL 棕量瓶中，甲醇稀釋定容，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性樣品 按處方比例，取除地錦草、菊苣根、菊苣子、天山堇菜外的其余藥味，按照木尼孜其賽甫拉合劑制備方法制得陰性樣品。

2.2.5 專屬性 分別精密吸取秦皮乙素對照品、供試品、陰性樣品測定。結(jié)果陰性樣品色譜峰在秦皮乙素相應(yīng)的保留時間未出峰，表明該方法專屬性好。見圖3。

圖3 陰性樣品、秦皮乙素對照品、木尼孜其賽甫拉合劑高效液相色譜圖

2.2.6 線性關(guān)系 取對照品貯備液逐步稀釋成163.04、81.52、40.76、20.38、10.19、5.09 μg/mL 的標準溶液。濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，Y=39 920X+9163，r=1.0 000，表明秦皮乙素在濃度5.09～163.04 μg/mL 內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.7 精密度 取秦皮乙素對照品溶液連續(xù)進樣6 次，RSD 為0.19%，表明儀器精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性 取同一木尼孜其賽甫拉合劑制備6 份供試品進樣，RSD 為1.34%，表明該方法重復(fù)性好。

2.2.9 穩(wěn)定性 取同一木尼孜其賽甫拉合劑，分別于0、2、4、6、8、12 h 進樣，RSD 為0.44%，表明供試品在12 h 內(nèi)較為穩(wěn)定。

2.2.10 加樣回收率 精密量取已知含量的木尼孜其賽甫拉合劑9 份，分別加入高、中、低濃度的秦皮乙素對照品溶液，混勻，加甲醇稀釋定容，測定，平均回收率為100.99%，RSD 為1.56%。見表1。

表1 加樣回收率（n=9）

2.2.11 樣品含量測定 取7 批木尼孜其賽甫拉合劑處理后測定，按外標法計算，結(jié)果7 批木尼孜其賽甫拉合劑中秦皮乙素平均含量為0.1032 mg/mL。

3 討論

木尼孜其賽甫合劑是新疆維吾爾自治區(qū)各地維吾爾醫(yī)醫(yī)院常用的院內(nèi)制劑，療效得到了廣大患者的認可，但因質(zhì)控標準低，造成成品質(zhì)量差異較大，層次不齊。本研究對處方中的各藥材進行成分分析、比對，采用薄層色譜法及高效液相色譜法進行定性定量研究。木尼孜其賽甫拉合劑中睡蓮花的TLC 鑒別以乙酸乙酯∶甲酸∶水（10∶1∶2）上層為展開劑，噴硫酸乙醇溶液顯色后，供試品與對照品在相同位置顯相同斑點。木尼孜其賽甫拉合劑中菊苣子和菊苣根的TLC 鑒別，耐用性試驗表明溫度對展開效果影響較大，4℃溫度下展開效果及分離度最佳，斑點清晰。秦皮乙素是菊苣、天山堇菜、地錦草等藥材的共有有效成分，研究[23-25]發(fā)現(xiàn)秦皮乙素具有良好的抗炎、抗菌、抗氧化及抗腫瘤活性等藥理作用。本研究以秦皮乙素為指標性，優(yōu)選出最佳色譜條件，色譜峰保留時間適中，分離度較好，能夠滿足分析要求。所建立的定性定量方法可作為木尼孜其賽甫拉合劑的質(zhì)控標準，為其臨床用藥的安全性、有效性提供質(zhì)量保證。