陳 韜，劉 偉，王珍霞，韓洪波，段雪嬌，劉春迎，馬銘澤*

(1.空軍航空大學(xué)門診部，吉林 長春130021；2.解放軍第964醫(yī)院；3.長春市中心醫(yī)院；4.范家屯第三醫(yī)院)

近年來，國內(nèi)外心血管疾病的發(fā)病率和死亡率逐年增加，且趨于年輕化[1]。鹽酸異丙腎上腺素(ISO)臨床上主要用于治療心源性或感染性休克，還可治療完全性房室傳導(dǎo)阻滯等疾病[2]。在基礎(chǔ)研究中ISO可用于心血管模型的構(gòu)建，但長期使用ISO后可能會引發(fā)多個器官損傷，如肝臟、心臟和腎臟等。拉曼光譜(Raman spectra)是一種散射光譜，可用于蛋白分子結(jié)構(gòu)測定、細(xì)胞分析[3]。本實驗將探究拉曼光譜是否可以作為診斷ISO誘發(fā)心血管疾病后肝臟損傷的重要工具，報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、主要試劑及儀器雄性Wistar大鼠10只，體質(zhì)量180-220 g(吉林大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號：SCXKJ2007-0003)。鹽酸異丙腎上腺素(上海前塵生物科技有限公司)；MD-100自動生化分析儀(美國奈徹爾公司)；徠卡4215切片機(jī)(德國徠卡儀器公司)。

1.2 動物分組及給藥方式隨機(jī)將清潔級Wistar大鼠分為正常對照組和模型組(每組5只)。大鼠穩(wěn)定2天后，正常組大鼠給予生理鹽水刺激，模型組大鼠皮下多點一次性注射15 mg/kg ISO。

1.3 大鼠血生化指標(biāo)測定ISO造模72 h后正常組和模型組大鼠眼球取血(1次)，測定血清中AST、LDH、CK和CK-MB等酶學(xué)指標(biāo)。

1.4 大鼠心臟和肝臟形態(tài)學(xué)檢測ISO造模72 h后正常組和模型組大鼠脫臼處死，取心臟和肝臟組織，并立即置入新配4%多聚甲醛溶液中固定24 h。HE染色，200倍鏡視野照相。

1.5 心臟組織紫外-可見吸收光譜每組取3只大鼠心肌組織勻漿后，利用UV-2450光譜在200-1000 nm處檢測心肌組織勻漿液，分析心肌組織吸收強(qiáng)度的變化。

1.6 肝臟組織拉曼光譜檢測每組取3只大鼠肝臟組織勻漿后，利用拉曼光譜儀在1000-4000 cm-1處檢測肝臟組織勻漿液，分析肝臟組織拉曼強(qiáng)度的變化。

2 結(jié)果

2.1 大鼠血清酶學(xué)變化

ISO造模72 h后，大鼠血清中AST，LDH，CK和CK-MB檢測值較正常對照組增加(P<0.05)，說明ISO可能誘發(fā)了大鼠心肌組織的損傷，見表1。

表1 大鼠血清酶學(xué)變化

2.2 大鼠心肌HE染色

正常對照組大鼠心肌組織排列整齊，橫紋清晰，胞核明顯，無細(xì)胞腫脹。ISO造模72 h后，大鼠心肌組織出現(xiàn)點狀壞死，進(jìn)一步說明ISO已造成了心肌的損傷，見圖1。

2.3 大鼠肝臟HE染色

正常對照組大鼠肝臟組織排列整齊，橫紋清晰，胞核明顯，無細(xì)胞腫脹。ISO造模72 h后，大鼠肝臟組織可見急性炎癥，說明ISO可能造成了肝臟的損傷，見圖2。

2.4 心臟組織紫外-可見吸收光譜

正常組大鼠心臟組織在600-650 nm，800-850 nm和950-1000 nm出現(xiàn)較明顯的吸收峰；而ISO造模72 h后其吸收峰變?yōu)?00-450 nm和500-600 nm，進(jìn)一步說明ISO造成了心臟的損傷(圖3)。

2.5 肝臟組織拉曼光譜

正常組大鼠肝臟組織在1 500-1 750 cm-1，3 000-3 250 cm-1位置有較強(qiáng)的吸收峰；而ISO 造模72 h后大鼠肝臟組織的吸收峰變?yōu)? 000-1 750 cm-1，進(jìn)一步說明ISO誘發(fā)了肝臟的損傷(圖4)。

圖1 大鼠心臟組織形態(tài)學(xué)變化 A.正常組，B.ISO 72 h組(×200) 圖2 大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)變化 C.正常組，D.ISO 72 h組(×200)

圖3 心臟組織吸收強(qiáng)度 A.正常組，B.ISO 72 h組 圖4 肝臟組織拉曼強(qiáng)度 A.正常組，B.ISO 72 h組

3 討論

目前，心血管疾病已成為我國公共衛(wèi)生領(lǐng)域的主要問題[4]。2012年衛(wèi)生部發(fā)布的《中國的醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)》白皮書數(shù)據(jù)顯示：我國目前確診的慢性疾病患者達(dá)2.6億之多，慢性疾病的患病率不斷增加[5]。慢性疾病主要包括心血管疾病、糖尿病、慢性呼吸道疾病、急性腦血管病、孕期和圍產(chǎn)期疾病及營養(yǎng)不良等疾病，其中心血管疾病居慢性疾病之首[5]。2015年世界衛(wèi)生組織報道，心血管疾病是世界范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病，已成為全球的頭號死因[6]。很多心血管藥物均可引起肝臟損傷，而心力衰竭本身即可導(dǎo)致肝臟功能受損[6]。ISO注射液主要成份為鹽酸異丙腎上腺素，為β受體激動劑，可使心收縮力增強(qiáng)，心率加快，骨骼肌血管和支氣管平滑肌舒張[7]。臨床上作為搶救藥，用于治療心源性或感染性休克、心搏驟停等[8]。那么，使用ISO是否可引起肝臟的損傷和如何檢測肝臟的損傷成為本文的關(guān)注點。拉曼光譜分析法是借鑒于印度科學(xué)家C.V.拉曼(Raman)所發(fā)現(xiàn)的拉曼散射效應(yīng)開發(fā)的設(shè)備，近年應(yīng)用于分子結(jié)構(gòu)檢測的一種分析方法[3]。本實驗結(jié)果顯示：注射ISO誘導(dǎo)的模型組大鼠血清酶學(xué)AST，LDH，CK和CK-MB較正常對照組增加(P<0.05)。這些結(jié)果說明ISO可能誘發(fā)了大鼠心肌的損傷。HE染色結(jié)果顯示：正常組大鼠心肌排列整齊，橫紋清晰，胞核明顯，無細(xì)胞腫脹。而ISO誘導(dǎo)的模型組出現(xiàn)點狀壞死，并有一定的炎癥發(fā)生，這些結(jié)果進(jìn)一步說明ISO誘發(fā)了心臟的損傷，由此說明ISO已成功誘發(fā)了心肌損傷模型。正常組大鼠肝臟排列整齊，橫紋清晰，胞核明顯，無細(xì)胞腫脹。ISO誘導(dǎo)的模型組出現(xiàn)點狀壞死，并有一定的炎癥發(fā)生，這些結(jié)果進(jìn)一步說明ISO誘發(fā)心血管疾病的同時，可能誘發(fā)了肝臟的損傷。紫外吸收光譜結(jié)果顯示：正常組大鼠心臟組織吸光度值在600-650 nm，800-850 nm和950-1 000 nm出現(xiàn)吸收峰；而ISO處理72小時后其吸收峰值在400-450 nm和500-600 nm出現(xiàn)吸收峰。這些結(jié)果進(jìn)一步說明，ISO誘發(fā)心肝臟的損傷。而拉曼光譜更精確地分析到正常組大鼠肝臟組織拉曼強(qiáng)度在1 500-1 750 cm-1，3 000-3 250 cm-1位置有吸收強(qiáng)度；而注射ISO 72 h后，大鼠肝臟拉曼強(qiáng)度在1 000-1 750 cm-1位置吸收強(qiáng)度變化明顯?；谝陨蠈嶒灁?shù)據(jù)推斷ISO誘發(fā)心血管疾病的同時，可造成肝臟的損傷。而拉曼光譜更精準(zhǔn)地分析到了大鼠肝臟的損傷，因此可作為肝臟損傷檢測的重要工具。