尚金燕，李桂榮，鄒小麗，邵明輝，李慶亮

（山東藥品食品職業(yè)學(xué)院·山東威?！?64210）

沙灘黃芩為唇形科黃芩屬植物沙灘黃芩Scutellaria strigillosa Hemsley 的干燥全草，為多年生草本植物，國(guó)內(nèi)主產(chǎn)于遼寧、河北、山東、江蘇、浙江等地，國(guó)外主要分布于俄羅斯、朝鮮、日本等國(guó)家。 沙灘黃芩生于海邊沙灘上，具有抗風(fēng)沙、耐瘠薄、耐鹽堿等特點(diǎn)，在4月上旬開始萌動(dòng)，4 月底5 月初全覆蓋地面，5 月中旬進(jìn)入花期，花期能夠持續(xù)到10 月底，觀賞價(jià)值極高，有鹽堿地“薰衣草”的美譽(yù)。該植物以全草入藥，具有清熱利濕、消腫止痛等功效[1-2]。

由于中藥材的質(zhì)量受氣候、土壤、栽培條件等因素的影響較大[3]，而沙灘黃芩目前有些已是人工栽培的品種。 由于栽培藥材經(jīng)過短期引種馴化，品質(zhì)混雜，藥材質(zhì)量不穩(wěn)定， 因此收集了威海地區(qū)不同產(chǎn)地的沙灘黃芩進(jìn)行質(zhì)量研究， 為篩選沙灘黃芩的優(yōu)良種質(zhì)提供依據(jù)。

1 沙灘黃芩中總黃酮的含量測(cè)定

1.1 儀器與試劑

T6 型紫外可見分光光度計(jì)( 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀( 上海亞榮儀器有限公司) 及各種常見玻璃儀器；蘆丁對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究所，批號(hào)：10080-201811）；所用試劑亞硝酸鈉、氫氧化鈉、無水乙醇、硝酸鋁均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 總黃酮含量測(cè)定

樣品溶液的制備：取沙灘黃芩中粉約0.3g，精密稱定，加70%乙醇40ml,加熱回流3h,放冷,濾過,濾液置100ml 量瓶中,用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,搖勻。 精密量取6ml,置50ml 量瓶中,加70%乙醇至刻度，搖勻，即得。

測(cè)定方法： 按照紫外可見分光光度法測(cè)定總黃酮含量，以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定其吸收值[4]。

2.1.1 線性關(guān)系考察

準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.24mg， 置50ml 量瓶中，加50%乙醇振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.204mg·ml-1）。分別精密量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液 0、1、2、3、4、5ml 于 25ml 容量瓶中， 各加 5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻靜置6min；再分別加10%硝酸鋁溶液1.0ml 搖勻靜置6min；最后各加入40%氫氧化鈉溶液1.0ml，以50%乙醇定容，搖勻，靜置15min，待測(cè)。

將蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液通過紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行全波段掃描，在500nm 處有最大吸收峰。在500 nm 下分別測(cè)其吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，詳見圖1。 結(jié)果顯示蘆丁質(zhì)量濃度在在0～0.02mg·ml-1范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。 回歸方程為 A=23.319C-0.0046，R2=0.9985。

圖1 總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

2.1.2 精密度試驗(yàn)

取供試品約0.3g，精密稱定，照上述方法制備供試品溶液，照紫外可見分光光度法在500nm 處連續(xù)5 次測(cè)吸收度值，詳見表 1。計(jì)算 RSD 為 0.68%（n=5），表明該測(cè)量方法的精密度良好。

表1 精密度試驗(yàn)考察表

2.1.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品約0.3g，精密稱定，照上述方法制備供試品溶液， 按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備的方法分別在0、15、30、45、60min，在 500nm 處測(cè)定各吸收值，詳見表 2。 計(jì)算后得到RSD 為0.58（n=5），試驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液在1h 內(nèi)穩(wěn)定性良好，可以滿足測(cè)定需要。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)考察表

2.1.4 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精確稱取5 份成山林場(chǎng)沙灘黃芩樣品各0.3g，按照2.1 方法制備供試品溶液， 照紫外可見分光光度法在500nm 處測(cè)定測(cè)定吸光度，詳見表3。 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方法測(cè)定黃酮含量。 計(jì)算 RSD 為 0.65%（n=5），表明該測(cè)量方法的精密度良好。

表3 重現(xiàn)性試驗(yàn)考察表

2.1.5 加樣回收率試驗(yàn)

供試品溶液的制備： 取已準(zhǔn)確測(cè)知含量（0.02082mg·g-1）的成山林場(chǎng)沙灘黃芩中粉約 0.15g，精密稱定，精密加入蘆丁對(duì)照品溶液（濃度為204.0μg·ml-1）1.5ml，加 70%乙醇 40ml,加熱回流 3h,放冷,濾過,濾液置100ml 量瓶中, 用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,搖勻。 精密量取6ml,置50ml 量瓶中,加70%乙醇至刻度﹐搖勻,即得。平行制備6 份，照上述方法分別測(cè)，計(jì)算含量。結(jié)果見表4。 結(jié)果表明，方法加樣回收率良好。

表4 加樣回收率試驗(yàn)表

2.2 不同地區(qū)沙灘黃芩黃酮含量分析

精確量取三種樣品溶液各三份，每份3ml,按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備的方法測(cè)定吸光度， 利用回歸方程計(jì)算黃酮含量，結(jié)果見表5。

表5 不同產(chǎn)地沙灘黃芩黃酮含量

從表5 可知，不同產(chǎn)地沙灘黃芩中的黃酮，其中校園百草園黃酮含量最高， 平均值達(dá)到22.59 mg·g-1，其次為成山林場(chǎng)野生沙灘黃芩， 橋頭苗圃沙灘黃芩的黃酮含量最低。

3 沙灘黃芩中黃芩苷的含量測(cè)定

3.1 儀器與試藥

高效液相色譜儀 (島津,LC-20A）； 高效液相色譜儀-檢測(cè)器（島津，SPD-20A）；高效液相色譜儀-進(jìn)樣器（島津，SIL-20A）； 高效液相色譜儀-柱溫箱 （島津，CTO-10AS）； 色 譜 柱 （YMC-Triart C18，250×4.6mm 12nm）；電子天平（METTLED TOLEDO，LE204E）；電子天平（AND，GR202）；黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，20mg，97.4%， 110715-201821）；磷酸（分析純）（煙臺(tái)遠(yuǎn)東精細(xì)化工有限公司，20171214）；甲醇（色譜純）（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；乙醇（分析純）（萊陽經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠，20180201）；娃哈哈純凈水；沙灘黃芩（山東藥品食品職業(yè)學(xué)院百草園種植；威海成山林場(chǎng)采集；威海橋頭苗圃基地培育）。

3.2 含量測(cè)定方法

按照中華人民共和國(guó)藥典（2015 版二部）高效液相色譜法(通則0512)測(cè)定。

3.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)為流動(dòng)相﹔檢測(cè)波長(zhǎng)為 280nm。 理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

3.2.2 對(duì)照品溶液的制備

取在60℃減壓干燥4h 的黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml 含60μg 的溶液，即得。

3.2.3 供試品溶液的制備

取本品中粉約0.3g,精密稱定﹐加70%乙醇40ml,加熱回流3h,放冷,濾過,濾液置100ml 量瓶中,用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,搖勻。 精密量取1ml,置10ml 量瓶中,加甲醇至刻度﹐搖勻,即得。

3.2.4 測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。

3.3 不同地區(qū)沙灘黃芩黃芩苷含量分析

精確量取3 種產(chǎn)地的沙灘黃芩中粉， 照上述方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下，分別進(jìn)樣，測(cè)定供試品中黃芩苷的峰面積，計(jì)算含量。 結(jié)果見表6。 色譜圖見圖2-5。

圖2 黃芩苷對(duì)照品色譜圖

圖3 校園百草園沙灘黃芩色譜圖

圖4 成山林場(chǎng)野生沙灘黃芩色譜圖

圖5 橋頭苗圃沙灘黃芩色譜圖

表6 不同產(chǎn)地沙灘黃芩黃芩苷含量測(cè)定結(jié)果

由表6 可知，不同產(chǎn)地沙灘黃芩中的黃芩苷，校園百草園含量最高，達(dá)到4.45%，其次為成山林場(chǎng)野生沙灘黃芩，橋頭苗圃沙灘黃芩的黃芩苷含量最低。

4 結(jié)論

本文采集了威海不同地區(qū)的沙灘黃芩， 進(jìn)行了黃酮和黃芩苷含量分析，不同產(chǎn)地沙灘黃芩中的黃酮，校園百草園黃酮含量最高， 平均值達(dá)到22.59mg·g-1，其次為成山林場(chǎng)野生沙灘黃芩， 橋頭苗圃沙灘黃芩的黃酮含量最低。不同產(chǎn)地的黃芩苷含量，校園百草園含量最高，其次為在海邊砂礫地生長(zhǎng)的野生沙灘黃芩，在苗圃基地栽培的黃芩苷含量最低。

分析3 種栽培地土質(zhì)，校園百草園為砂壤土，成山林場(chǎng)是砂土，橋頭苗圃為壤土。在苗圃地栽培的沙灘黃芩生長(zhǎng)旺盛，植株高度和冠幅最高，但是黃酮和黃芩苷含量最低。 砂土地生長(zhǎng)的野生沙灘黃芩植株植株最為矮小，兩種物質(zhì)含量位于中間。校園百草園砂壤土生長(zhǎng)的沙灘黃芩黃酮和黃芩苷含量最高。 校園百草園的沙灘黃芩采自成山林場(chǎng)野生沙灘黃芩， 利用莖段繁殖的方式栽培，研究結(jié)果表明，沙灘黃芩的栽培土質(zhì)宜選用砂壤土。

中藥材的產(chǎn)地土壤直接影響中藥材的品質(zhì)， 土壤是不是符合生產(chǎn)最優(yōu)質(zhì)的中藥材要求， 是中藥材栽培生產(chǎn)中需要重視的關(guān)鍵問題。 隨著中藥現(xiàn)代化和產(chǎn)業(yè)化的快速發(fā)展， 中藥資源持續(xù)產(chǎn)業(yè)化和供需矛盾不斷劇烈，引種栽培成為了一種快捷的途徑，但應(yīng)加強(qiáng)產(chǎn)地生態(tài)環(huán)境要素與藥材品質(zhì)相關(guān)性的研究， 確保藥材的品質(zhì)。