張 召，馬紅偉，魏 燁，李均平，阮坤祥，王世旗

(1.浠水長(zhǎng)流牧業(yè)有限公司，湖北 浠水 438200； 2.洛陽(yáng)普萊柯生物工程股份有限公司，河南 洛陽(yáng) 471000)

豬支原體肺炎是豬肺炎支原體引起的接觸性傳染病，豬肺炎支原體聚集并粘連在支氣管、細(xì)支氣管以及氣管上皮細(xì)胞上，損傷豬的呼吸道，最終引起豬支原體肺炎[1，2]。臨床主要表現(xiàn)為豬的咳嗽和氣喘，病變部位基本集中在肺臟心葉、尖葉、中間葉和膈葉前緣，呈肉樣實(shí)變。豬圓環(huán)病毒病是由致病性豬圓環(huán)病毒引起的接觸性傳染病。豬圓環(huán)病毒主要侵害豬的免疫系統(tǒng)，破壞淋巴細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)，抑制淋巴細(xì)胞的功能，最終造成機(jī)體免疫抑制和抗病力下降，導(dǎo)致病毒性及細(xì)菌性疾病的繼發(fā)感染[3]。豬圓環(huán)病毒病臨床以母豬繁殖障礙、仔豬抖抖病、仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征和皮炎腎病綜合征等為特征。豬圓環(huán)病毒和豬肺炎支原體是公認(rèn)的豬呼吸道傳染病的原發(fā)性病原[4]。豬瘟是由豬瘟病毒引起的以高熱稽留及彌散性出血為特征的烈性傳染病，最終導(dǎo)致發(fā)病豬大量死亡，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害非常嚴(yán)重[5]。

疫苗免疫是控制上述三種傳染病的有效手段。自2019年以來(lái)，開(kāi)始推行豬圓環(huán)病毒2型疫苗和豬肺炎支原體滅活疫苗的聯(lián)合免疫，一針多防，給養(yǎng)殖戶帶來(lái)便利。后非瘟?xí)r代，廣大從業(yè)者對(duì)更簡(jiǎn)便有效疫苗聯(lián)合免疫方式的呼聲越來(lái)越高。豬瘟活疫苗、豬肺炎支原體疫苗和豬圓環(huán)病毒2型疫苗，這三種疫苗能不能聯(lián)合免疫？聯(lián)合免疫的時(shí)間如何安排？這三種疫苗聯(lián)合免疫的效果如何？這些問(wèn)題亟待解決。

本試驗(yàn)先將豬圓環(huán)病毒2型基因工程疫苗(水佐劑)和豬肺炎支原體滅活疫苗(水佐劑)混合，然后用二者的混合液稀釋豬瘟活疫苗，注射健康仔豬，比較聯(lián)合免疫方式與常規(guī)免疫方式的免疫效果，為三種疫苗免疫程序的優(yōu)化提供實(shí)踐依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 疫苗

疫苗由洛陽(yáng)普萊柯生物工程股份有限公司提供，疫苗名稱、批號(hào)、劑量及數(shù)量如表1所示。 委托第三方專業(yè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)疫苗進(jìn)行檢測(cè)，并出具檢測(cè)報(bào)告。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 試驗(yàn)分組

試驗(yàn)在湖北金旭農(nóng)發(fā)集團(tuán)浠水長(zhǎng)流分公司進(jìn)行。試驗(yàn)選取7日齡健康仔豬500頭，分為A組和B組(表2)。試驗(yàn)開(kāi)始前將試驗(yàn)豬標(biāo)記組別，并稱重、采血、觀察是否有異常情況，做好相關(guān)記錄。A組：聯(lián)合免疫組(圓柯欣+柯喘寧+穩(wěn)柯健三苗聯(lián)合免疫)；B組：?jiǎn)蚊缑庖呓M(圓柯欣、柯喘寧、穩(wěn)柯健單苗免疫)。飼養(yǎng)管理按試驗(yàn)豬場(chǎng)日常管理程序進(jìn)行。

表1 疫苗名稱、批號(hào)、劑量及數(shù)量

表2 試驗(yàn)仔豬頭數(shù)和平均體質(zhì)量

1.2.2 疫苗接種

試驗(yàn)從仔豬7日齡開(kāi)始，到仔豬72日齡結(jié)束，試驗(yàn)日期為2019年10月7日-2019年12月12日。疫苗具體接種方案如表3所示。A組(聯(lián)合免疫組)仔豬21日齡首免，免疫劑量：每頭仔豬1 mL圓柯欣、2 mL柯喘寧和1頭份穩(wěn)柯健，圓柯欣與柯喘寧按照1∶2比例混合后，稀釋穩(wěn)柯??；55日齡二免，穩(wěn)柯健1頭份/頭。B組(單苗免疫組)仔豬免疫按照試驗(yàn)豬場(chǎng)現(xiàn)有的免疫程序進(jìn)行。所有仔豬均在出生當(dāng)天，偽狂犬病活疫苗滴鼻并注射保健針，在35日齡注射偽狂犬病活疫苗1.5頭份/頭，斷奶仔豬使用“化藥+中藥”進(jìn)行保健，連續(xù)使用10天。

表3 疫苗接種方案

1.2.3 樣品采集與指標(biāo)分析

觀察記錄仔豬21日齡免疫后兩天及育肥至中期的表現(xiàn)。觀察統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)豬在整個(gè)試驗(yàn)期的免疫應(yīng)激(嘔吐、發(fā)燒、死亡、精神沉郁、不食)情況、死淘率、日增重、均勻度等。在21日齡免疫前、21日齡免疫后(A組：三種疫苗聯(lián)合免疫；B組：各疫苗單苗免疫)的第四周、第八周采血，A組每次采樣17份，B組每次采樣10份，檢測(cè)血清中的豬瘟病毒抗體和豬圓環(huán)病毒2型抗體。血清抗體的檢測(cè)采用ELISA法。

2 結(jié)果

2.1 仔豬生產(chǎn)性能、免疫應(yīng)激、免疫后健康狀況和死亡情況

仔豬21日齡免疫后兩天及育肥至中期的表現(xiàn)如表4所示。聯(lián)合免疫組個(gè)別仔豬免疫后采食量稍有下降，但兩組仔豬免疫后兩天的采食量無(wú)顯著差異(數(shù)據(jù)未列出)。兩組仔豬免疫后兩天的精神狀態(tài)良好，體溫正常。兩組均沒(méi)有出現(xiàn)豬只的死亡。聯(lián)合免疫組和單苗免疫組仔豬在育肥至中期期間，無(wú)咳嗽、氣喘等情況，采食情況正常。

表4 仔豬21日齡免疫后兩天及育肥至中期的表現(xiàn)

仔豬在整個(gè)試驗(yàn)期的死淘、應(yīng)激及生長(zhǎng)情況如表5所示。聯(lián)合免疫組仔豬的總應(yīng)激次數(shù)為8次，單苗免疫組總應(yīng)激次數(shù)為13次，單苗免疫組豬應(yīng)激比例高于聯(lián)合免疫組。應(yīng)激仔豬均沒(méi)有出現(xiàn)嚴(yán)重的免疫副反應(yīng)。聯(lián)合免疫組仔豬整個(gè)試驗(yàn)期間的平均日增重為348 g，單苗免疫組仔豬整個(gè)試驗(yàn)期間的平均日增重為334 g，聯(lián)合免疫組豬只每天多增加14 g。

表5 仔豬在整個(gè)試驗(yàn)期的死淘、應(yīng)激及生長(zhǎng)情況

2.2 單苗免疫豬和聯(lián)合免疫組的豬瘟抗體變化情況

21日齡免疫前、21日齡免疫后的第四周及第八周，仔豬血清豬瘟抗體水平如圖1所示。從圖1可以看出，單苗免疫組和聯(lián)合免疫組的豬瘟抗體水平，在21日齡免疫前、21日齡免疫后的第四周及第八周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，均無(wú)顯著差異。

圖1 不同免疫方式豬瘟抗體變化情況

2.3 單苗免疫組和聯(lián)合免疫組的圓環(huán)抗體變化情況

21日齡免疫前、21日齡免疫后的第四周及第八周，仔豬血清圓環(huán)抗體水平如圖2所示。從圖2可以看出，單苗免疫組和聯(lián)合免疫組的圓環(huán)抗體水平，在21日齡免疫前、21日齡免疫后的第四周及第八周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，均無(wú)顯著差異。

圖2 不同免疫方式圓環(huán)抗體變化情況

3 討論

在本試驗(yàn)中，豬瘟活疫苗、圓環(huán)病毒2型基因工程疫苗、豬肺炎支原體滅活疫苗三種疫苗同時(shí)免疫，相互之間不干擾，聯(lián)合免疫比單苗免疫表現(xiàn)出更好的生長(zhǎng)性能，表明聯(lián)合免疫安全有效。張敬峰等[6]的研究表明，在圓環(huán)病毒陽(yáng)性豬場(chǎng)，免疫圓環(huán)病毒疫苗能夠顯著增強(qiáng)豬瘟疫苗的免疫效果。朱子健等[7]發(fā)現(xiàn)，用圓環(huán)病毒滅活疫苗稀釋豬瘟活疫苗，進(jìn)行免疫，可產(chǎn)生針對(duì)兩種病原的免疫抗體，且兩種抗體間互不影響。王科文等[8]發(fā)現(xiàn)，用豬肺炎支原體疫苗與豬圓環(huán)病毒2型疫苗聯(lián)合免疫豬只，免疫效果與兩種疫苗單獨(dú)免疫的效果是一樣的。朱巧艷等[9]發(fā)現(xiàn)，用圓環(huán)病毒-支原體二聯(lián)苗稀釋豬瘟活疫苗，進(jìn)行一次性注射免疫，各疫苗的免疫效力均不受影響。上述研究表明，圓環(huán)病毒疫苗、支原體疫苗、豬瘟活疫苗兩兩組合或三種組合，進(jìn)行聯(lián)合免疫，對(duì)各種疫苗的免疫效果沒(méi)有不良影響。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在后續(xù)育肥過(guò)程中，兩組豬的發(fā)病率、飼料消耗情況沒(méi)有明顯的區(qū)別，印證了豬瘟疫苗、圓環(huán)病毒疫苗、支原體疫苗三種疫苗聯(lián)合免疫，相互之間不干擾，進(jìn)一步表明圓柯欣、柯喘寧、穩(wěn)柯健三種疫苗可以聯(lián)合一起，同時(shí)免疫。在非洲豬瘟流行的環(huán)境下，應(yīng)盡量減少豬只與外界的接觸。在不影響抗體水平的情況下，圓柯欣、柯喘寧、穩(wěn)柯健聯(lián)合免疫可以減少破皮行為，減少交叉感染的風(fēng)險(xiǎn)，減少豬的應(yīng)激，同時(shí)提高勞動(dòng)效率。