譯校│翟新驗(yàn) 杜建（中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

王慧強(qiáng)（北京市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

一、病例定義

在美國(guó)，全面必須報(bào)告禽流感（N A I）病例定義包括以下信息：主動(dòng)和被動(dòng)監(jiān)測(cè)（國(guó)家監(jiān)測(cè)單元），臨床和實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)，被動(dòng)和主動(dòng)觀察監(jiān)測(cè)的實(shí)質(zhì)內(nèi)容就是識(shí)別臨床癥狀和大體病變，對(duì)可疑病例立即啟動(dòng)進(jìn)一步調(diào)查，并且快速有效地采取適當(dāng)?shù)姆揽卮胧↘radel等，1986；Weaver等，2006），首發(fā)病例，實(shí)驗(yàn)室確診是必不可少的。

1.臨床癥狀描述。臨床癥狀曾在本文件前面介紹過(guò)。早期發(fā)現(xiàn)可疑的臨床病例有利于及時(shí)采樣，并把樣品送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，以確定發(fā)病或死亡是否由AI病毒的毒力毒株引起的。亞洲高致病性禽流感（HPAI）H5N1，具高死亡率和明顯的臨床癥狀。由于種類、年齡、性別、并發(fā)感染、毒株、飼養(yǎng)環(huán)境等因素不同，其他NAI H5/H7亞型毒株感染家禽引起的臨床癥狀和死亡率也會(huì)有所不同。家禽的消化、呼吸、神經(jīng)、生殖或循環(huán)系統(tǒng)會(huì)受到影響，只有輕微或無(wú)臨床癥狀的家禽同樣有可能感染H5/H7亞型低致病性禽流感（LPAI）病毒，這種隱性感染只能通過(guò)有計(jì)劃的監(jiān)測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)出來(lái)。盡管某些HPAI病毒株和一些LPAI H5/H7亞型毒株不會(huì)表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，但是下面將要描述的幾個(gè)臨床癥狀也有可能預(yù)示著NAI疫情的發(fā)生。鑒于這些特征，被動(dòng)和主動(dòng)監(jiān)測(cè)還要結(jié)合血清學(xué)監(jiān)測(cè)。

2.臨床癥狀定義。除了實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，臨床癥狀定義有助于正確診斷存在于商業(yè)養(yǎng)殖業(yè)、活禽交易市場(chǎng)體系（LBMS），如庭院養(yǎng)殖等非傳統(tǒng)家禽飼養(yǎng)系統(tǒng)中的NAI H5/H7亞型病毒。當(dāng)出現(xiàn)臨床癥狀時(shí)，符合臨床癥狀定義通常是啟動(dòng)下一步檢測(cè)的首要篩查方法。家禽感染NAI H5/H7亞型病毒后一般會(huì)出現(xiàn)一種或多種臨床癥狀和大體病變：叫聲變??；精神萎靡；結(jié)膜炎；產(chǎn)蛋量下降，產(chǎn)淺色蛋、畸形蛋或薄殼蛋；呼吸癥狀，如出現(xiàn)啰音、尖銳音，呼吸困難；共濟(jì)失調(diào)、歪頸等神經(jīng)癥狀；采食和飲水量減少；雞冠和肉髯腫脹或壞死；頭和腿腫脹；腿皮下出血；肺里充滿積液和血液；氣管炎和氣囊炎；器官斑點(diǎn)狀出血（Easterday等，1997）；或是禽群出現(xiàn)如下的死亡情況（Weaver等，2006）：

商業(yè)雞：連續(xù)兩天，每1 0 0 0羽雞死亡超過(guò)4羽；商業(yè)蛋雞：連續(xù)兩天，死亡數(shù)量為正常情況的4倍（2～50周齡蛋雞日均死亡率0.5/‰，5 0周齡后日均死亡率0.75/‰），或超過(guò)3天產(chǎn)蛋率下降5%；商業(yè)火雞：每天每1000羽火雞死亡超過(guò)2羽；庭院養(yǎng)殖家禽：只要出現(xiàn)突發(fā)的產(chǎn)蛋量下降或者明顯的雞只死亡時(shí)都應(yīng)予以調(diào)查。

依據(jù)病毒致病力，混合平養(yǎng)家禽可能會(huì)快速傳播并死亡，籠養(yǎng)家禽（如蛋雞、鵪鶉）其死亡進(jìn)程可能會(huì)稍慢，通常超過(guò)10～15天（Swayne，2006）。

3.流行病學(xué)標(biāo)準(zhǔn)和限定條件。對(duì)一個(gè)病例定義，首先要明確監(jiān)測(cè)群體，這是首要的標(biāo)準(zhǔn)，監(jiān)測(cè)要限定于某一具有特殊流行病學(xué)特征的畜群、禽群或是養(yǎng)殖場(chǎng)所。通過(guò)行業(yè)、州和聯(lián)邦政府共同完成對(duì)商業(yè)、LBMS和庭院養(yǎng)殖禽群的監(jiān)測(cè)。

商業(yè)家禽企業(yè)監(jiān)測(cè)（包括許多獵鳥養(yǎng)殖場(chǎng)），主要通過(guò)國(guó)家家禽改良計(jì)劃（NPIP）項(xiàng)目開展；在全國(guó)雞肉理事會(huì)和國(guó)家火雞聯(lián)盟的倡議下，商業(yè)肉雞和肉火雞監(jiān)測(cè)也要達(dá)到或是高于NPIP商業(yè)家禽監(jiān)測(cè)的要求；LBMS監(jiān)測(cè)主要在動(dòng)植物衛(wèi)生檢疫局（APHIS）和參與州的動(dòng)物衛(wèi)生機(jī)構(gòu)共同合作下進(jìn)行，聯(lián)邦政府設(shè)立的項(xiàng)目是為了加強(qiáng)和統(tǒng)一各個(gè)州的項(xiàng)目及輔助各州達(dá)到在LBMS預(yù)防和控制LPAI H5/H7的目標(biāo)，各個(gè)州的監(jiān)測(cè)計(jì)劃通常會(huì)高于APHIS的最低標(biāo)準(zhǔn)；非傳統(tǒng)庭院養(yǎng)殖家禽監(jiān)測(cè)主要是各個(gè)州與APHIS合作完成。

4.實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)。亞臨床感染病例一般都要通過(guò)實(shí)驗(yàn)室診斷進(jìn)行確診，或者通過(guò)易感品種禽類的臨床癥狀、病理變化等做出判斷的臨床病例，需要通過(guò)一種或多種實(shí)驗(yàn)室診斷方法來(lái)確認(rèn)HPAI和LPAI。將樣品接種雞胚分離病毒，通過(guò)檢測(cè)血凝活性確定A型流感病毒的存在；通過(guò)血凝素和神經(jīng)氨酸酶抑制試驗(yàn)確定是否為H5/H7亞型；采用靜脈接種致病指數(shù)（IVPI）測(cè)定法鑒定是否為HPAI病毒分離株，通過(guò)靜脈接種4～8周齡雞，連續(xù)觀察10天，當(dāng)IVPI值大于1.2或?qū)е?5%以上雞死亡，則判定該毒株為HPAI病毒株。如果接種雞只沒有死亡；測(cè)定血凝素前體蛋白（HA0）裂解位點(diǎn)堿基序列，從而判斷病毒是否有突變?yōu)楦咧虏⌒缘哪芰?；如果毒株不符合HPAI診斷標(biāo)準(zhǔn)，則可把該毒株定義為L(zhǎng)PAI H5/H7亞型病毒。

5.疑似。實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RRT-PCR）在感染48小時(shí)后即可檢測(cè)到AI病毒（HPAI病毒感染24小時(shí)后）（Spackman，2006），以及抗原捕獲酶免疫試驗(yàn)（AC-EIA）在感染1～5天后即可檢出（Gelb和Ladman，2006）。RRT-PCR方法檢測(cè)糞便樣品（泄殖腔拭子），相較于氣管樣品病毒分離的敏感性和特異性要低。

6.NAI病例分類?？梢刹±夯谂R床病例定義做出NAI初步診斷，并經(jīng)各州的動(dòng)物衛(wèi)生官員和APHIS負(fù)責(zé)當(dāng)?shù)氐墨F醫(yī)會(huì)診；日常監(jiān)測(cè)中，有或無(wú)臨床癥狀，但經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)為陽(yáng)性結(jié)果。

疑似病例：滿足可疑條件或以下任一判定標(biāo)準(zhǔn)的病例：活禽氣管或泄殖腔拭子（或糞便）；死亡禽只糞便或是器官組織混樣，器官組織包括氣管、肺、氣囊、腸、脾、腎、腦、肝和心，接種雞胚（世界動(dòng)物衛(wèi)生組織，2005）。感染7～10天后即可檢出抗體，臨床癥狀一旦出現(xiàn)的急性期血清樣品和7～28天恢復(fù)期血清樣品。

“邏輯”一詞源于德國(guó)哲學(xué)家黑格爾，是指事物發(fā)展的客觀規(guī)律。以我國(guó)扶貧歷史進(jìn)程為背景，分析和認(rèn)清土地扶貧的邏輯，是進(jìn)一步了解赫章縣乃至貴州省國(guó)土系統(tǒng)扶貧政策，取得扶貧成效，提煉扶貧工作經(jīng)驗(yàn)，服務(wù)全國(guó)扶貧工作的重要理論基礎(chǔ)。

肛咽拭子或環(huán)境樣品（LBMS）：經(jīng)瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）檢測(cè)出A型流感抗體，但無(wú)法解釋是否由疫苗造成的；隨后通過(guò)血凝抑制試驗(yàn)（HI）鑒定H5/H7亞型病毒；經(jīng)NPIP行政官批準(zhǔn)的商品化A型流感抗原檢測(cè)劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性，確定為H5/H7亞型病毒（USDA）；通過(guò)RRT-PCR檢測(cè)出A型流感病毒RNA，并確定為H5/H7亞型病毒。

確診病例：經(jīng)美國(guó)農(nóng)業(yè)部國(guó)家獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室（USDA NVSL）分離出A型流感病毒，并鑒定為H5或H7亞型（NAI）病毒，接下來(lái)確定其致病性（HPAI或LPAI H5/H7）。

7.報(bào)告要求。商業(yè)家禽NAI H5/H7感染，應(yīng)按照APHIS獸醫(yī)備忘錄第580.4項(xiàng)“疑似外來(lái)動(dòng)物疫病/新發(fā)動(dòng)物疫病（FAD/EDI）調(diào)查程序”和第565.14項(xiàng)“向OIE和貿(mào)易伙伴報(bào)告LPAI H5/H7”的要求進(jìn)行報(bào)告。此外，各州的動(dòng)物衛(wèi)生官員和APHIS負(fù)責(zé)當(dāng)?shù)氐墨F醫(yī)共同在場(chǎng)時(shí)，州的動(dòng)物衛(wèi)生官員按照NAHRS和OIE指南，通過(guò)國(guó)家動(dòng)物衛(wèi)生報(bào)告系統(tǒng)（NAHRS）向USDA報(bào)告商業(yè)養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生的NAI。

二、采樣方法

主動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)包括定期對(duì)家禽及其生活環(huán)境（如禽舍）等進(jìn)行采樣，檢測(cè)抗原或抗體的存在。主動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)主要用于檢測(cè)沒有出現(xiàn)高死亡率的養(yǎng)殖場(chǎng)LPAI H5/H7流行情況，也可檢測(cè)H5或H7亞型病毒。當(dāng)家禽中存在抗體時(shí)，實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)方法是非常敏感的，一般在感染AI病毒7～10天后就可以檢測(cè)出抗體，幾個(gè)月后抗體水平下降。這些檢測(cè)是有價(jià)值的，因?yàn)樵陂L(zhǎng)達(dá)幾個(gè)月內(nèi)，仍然能檢測(cè)到抗體。然后，當(dāng)出現(xiàn)幾個(gè)毒株混合感染或者是病毒一直在禽群流行時(shí)，抗體檢測(cè)方法就不能區(qū)分哪個(gè)毒株或者該毒株是否為當(dāng)前流行毒株。只要病毒仍在禽群中流行，抗原（病毒蛋白）檢測(cè)方法是敏感的。由于AI病毒排出期通常只有10天左右，所以處于流行階段時(shí)的檢測(cè)是較為敏感的，但隨著AI病毒排出逐漸減少，其抗原檢測(cè)敏感性也會(huì)下降。實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)對(duì)發(fā)現(xiàn)HPAI是有限的，反而通過(guò)觀察病毒感染家禽所引起的典型而嚴(yán)重的臨床癥狀，更容易發(fā)現(xiàn)疫情。

與實(shí)驗(yàn)室采樣檢測(cè)相比，采用更主動(dòng)的觀察監(jiān)視也是監(jiān)測(cè)疫病的有效途徑。養(yǎng)殖者的利益和疫病防控效果、生物安全管理措施的執(zhí)行是息息相關(guān)的，按計(jì)劃要求積極觀察生產(chǎn)禽群，從而發(fā)現(xiàn)特定的臨床癥狀并向服務(wù)人員和獸醫(yī)人員報(bào)告。主動(dòng)的觀察監(jiān)視和主動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)一樣，都是依據(jù)制定的計(jì)劃安排開展，與實(shí)驗(yàn)室主動(dòng)監(jiān)測(cè)相比，它具有的優(yōu)勢(shì)是：更方便經(jīng)常性地操作，例如在大型商業(yè)養(yǎng)殖場(chǎng)每天可以開展1～2次觀察監(jiān)視，對(duì)于發(fā)現(xiàn)HPAI，這種主動(dòng)觀察監(jiān)視方式的優(yōu)勢(shì)更明顯，便于啟動(dòng)進(jìn)一步調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室采樣。幾乎所有的大型商業(yè)養(yǎng)殖場(chǎng)都可以通過(guò)主動(dòng)觀察監(jiān)視發(fā)現(xiàn)多種疫病，包括出現(xiàn)疑似AI病毒感染臨床癥狀的疫病。其他養(yǎng)殖場(chǎng)所，如小規(guī)模但高價(jià)值的養(yǎng)殖場(chǎng)，庭院養(yǎng)殖戶也可以使用主動(dòng)觀察監(jiān)視的方法，但這一般沒有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，也沒有切實(shí)可行的操作管理程序。

所有各類家禽業(yè)都應(yīng)使用被動(dòng)監(jiān)測(cè)方法，及時(shí)向上報(bào)告可疑死亡或臨床癥狀病例。與主動(dòng)的觀察監(jiān)視不同，這不是一個(gè)連續(xù)、定期地按計(jì)劃執(zhí)行的方法。自愿主動(dòng)報(bào)告病例的情況可能會(huì)隨著養(yǎng)殖場(chǎng)戶、疫病意識(shí)、實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)成本和禽群死亡率不同而有所不同。

根據(jù)國(guó)家禽流感監(jiān)測(cè)系統(tǒng)（NAISS）描述的養(yǎng)殖場(chǎng)類型不同而采取不同的監(jiān)測(cè)手段。主動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)手段（如血清學(xué)或病原學(xué)檢測(cè)）多應(yīng)用于大型商業(yè)養(yǎng)殖家禽，LBMS和高風(fēng)險(xiǎn)的候鳥，根據(jù)監(jiān)測(cè)目標(biāo)不同，采用不同的診斷檢測(cè)方法。

對(duì)遷徙中候鳥的主動(dòng)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)，主要目的是防止亞洲HPAI H5N1傳入美國(guó)，對(duì)候鳥的監(jiān)測(cè)多采用抗原檢測(cè)方法。

對(duì)LBMS中，用于生產(chǎn)的禽群多采用血清學(xué)的監(jiān)測(cè)方法；對(duì)于在市場(chǎng)上出售存活時(shí)間比較短的禽類多采用病原學(xué)的監(jiān)測(cè)方法；對(duì)市場(chǎng)場(chǎng)所采集環(huán)境拭子以檢測(cè)是否存在活的病毒。對(duì)所有病原學(xué)監(jiān)測(cè)方法，最終都要確定是否為亞洲HPAI H5N1病毒。

對(duì)于大型商業(yè)養(yǎng)殖場(chǎng)中HPAI的監(jiān)測(cè)，很大程度上依靠禽群死亡率報(bào)告做出判斷，在這些病例中，實(shí)驗(yàn)室診斷方法的目的不是為了早期發(fā)現(xiàn)，而是為了確定是否為HPAI病毒及其亞型。

由于HPAI會(huì)導(dǎo)致高死亡率和具有快速傳播能力，主動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)作為監(jiān)測(cè)手段對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)HPAI不是十分有效，除了對(duì)候鳥監(jiān)測(cè)/檢測(cè)HPAI外，USDA采用的主動(dòng)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)手段主要是用于發(fā)現(xiàn)LPAI H5/H7。

根據(jù)新的NPIP LPAI H5/H7防控指南，自愿參與者有責(zé)任向聯(lián)邦認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室提供一些檢測(cè)樣品，樣品來(lái)自不明原因引起的呼吸道疫病、產(chǎn)蛋量下降以及疑似禽流感引起的家禽死亡的病例。診斷監(jiān)測(cè)活動(dòng)按照NPIP對(duì)預(yù)防和控制LPAI H5/H7要求進(jìn)行，是需要向國(guó)家獸醫(yī)部門報(bào)告的一種疫病。

血清樣品通過(guò)ELISA抗體檢測(cè)方法或AGID方法進(jìn)行初步篩查；若經(jīng)ELISA方法檢測(cè)為陽(yáng)性樣品，則需再次通過(guò)AGID進(jìn)一步確認(rèn)。確認(rèn)為陽(yáng)性樣品之后則應(yīng)進(jìn)行下列調(diào)查，在該陽(yáng)性樣品場(chǎng)重新采樣進(jìn)行病毒分離，并將樣品送至USDA NVSL進(jìn)行亞型鑒定和致病性測(cè)定。AI病原學(xué)RRT-PCR檢測(cè)方法用于檢測(cè)H5和H7亞型，但需要在聯(lián)邦批準(zhǔn)的診斷實(shí)驗(yàn)室開展。所有H5或H7亞型病毒都必須進(jìn)行下一步致病性分析，以鑒定其是否為HPAI病毒株，例如亞洲HPAI H5N1。

主動(dòng)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)采樣主要是由商業(yè)養(yǎng)殖者、聯(lián)邦與州政府之間合作完成，以下將會(huì)介紹一些采樣要求：不同的家禽業(yè)參與者，對(duì)其家禽的采樣方法會(huì)有所不同。例如，不是美國(guó)所有的州都有活禽交易市場(chǎng)，不是美國(guó)所有的州都有LBMS項(xiàng)目。另外，由于NPIP項(xiàng)目主要是由商業(yè)家禽養(yǎng)殖的48個(gè)州共同合作建立的，所以不是所有的養(yǎng)殖者都會(huì)參與NPIP項(xiàng)目；不同類型的家禽抽樣方法都建立在一定國(guó)家規(guī)定的最低標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上（聯(lián)邦行政法規(guī)（CFR），第9卷，第145～147部分）。

每個(gè)州的項(xiàng)目都需要達(dá)到國(guó)家規(guī)定的最低標(biāo)準(zhǔn)，但可以選擇收集其他的相關(guān)數(shù)據(jù)。這里所描述和分析的只是最低標(biāo)準(zhǔn)；雖然在這些監(jiān)測(cè)計(jì)劃中對(duì)檢測(cè)方法有規(guī)定，但不是每個(gè)參與實(shí)驗(yàn)室都有權(quán)開展所有的檢測(cè)項(xiàng)目。所以，每個(gè)州的檢測(cè)方案并不是統(tǒng)一的，而是應(yīng)考慮所在州的實(shí)驗(yàn)室能否進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)；盡管在一些州LPAI H5/H7檢測(cè)項(xiàng)目已經(jīng)獲得了通過(guò)，但針對(duì)商業(yè)肉雞采樣計(jì)劃所用的抗原檢測(cè)方法（RRT-PCR和ELISA抗原檢測(cè)方法），還未建立明確的最低標(biāo)準(zhǔn)。一些企業(yè)可能會(huì)選擇符合FSIS要求的方法進(jìn)行屠宰前檢測(cè)，從而免去檢測(cè)成品。這些公司根據(jù)采樣計(jì)劃開展抗原篩查，如前CFR第9卷、第146部分，LPAI H5/H7自主控制方案，主要采用抗體檢測(cè)方法，肉雞應(yīng)在屠宰前10天進(jìn)行抗體檢測(cè)。

這份文件中沒有提及屠宰場(chǎng)監(jiān)測(cè)的作用，因?yàn)閷?duì)這種監(jiān)測(cè)效果進(jìn)行評(píng)定比較困難。然而，事實(shí)上幾乎所有的肉雞包括大型、小規(guī)模肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)生產(chǎn)的肉雞都會(huì)在屠宰前經(jīng)FSIS或國(guó)家檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)檢測(cè)。如果家禽出現(xiàn)明顯的呼吸道感染癥狀，例如氣囊炎，依據(jù)疫病嚴(yán)重程度決定是否銷毀，養(yǎng)殖者被告知每批屠宰家禽損失率。對(duì)于高的病變或是銷毀情況，行業(yè)獸醫(yī)或服務(wù)人員還會(huì)對(duì)家禽的感染來(lái)源進(jìn)行調(diào)查。