馬文學(xué)

青海省大通縣城關(guān)鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，青海大通810102

鏈球菌廣泛分布于自然界，革蘭氏染色陽(yáng)性，臨床上可分為α 型、β 型溶血鏈球菌和γ 型鏈球菌3 種[1]，該菌能夠感染人和多種動(dòng)物，羊鏈球菌病是由溶血性鏈球菌引起的一種以病羊高熱、下頜淋巴結(jié)和咽喉腫脹、全身性出血性敗血癥為主要特征的急性、熱性傳染病。近些年，在西寧地區(qū)由溶血性鏈球菌引起羊只發(fā)病的情況呈多發(fā)趨勢(shì)，尤以青飼料缺乏、羊只抵抗力下降的冬春寒冷季節(jié)高發(fā)，呈地方性流行或散發(fā)[2]。本試驗(yàn)對(duì)大通縣城關(guān)鎮(zhèn)某羊場(chǎng)病死羊采樣進(jìn)行病原菌的分離培養(yǎng)與鑒定以及藥敏試驗(yàn)研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 發(fā)病情況

2020年3月，西寧市大通縣城關(guān)鎮(zhèn)某羊場(chǎng)2月齡山羊突然發(fā)病，患病羊發(fā)熱、不食，咽喉部腫脹、呼吸急促、眼結(jié)膜充血，鼻腔有膿性分泌物流出，60只山羊中死亡3 只，對(duì)病死羊剖檢發(fā)現(xiàn)以敗血性病變?yōu)橹?，主要臟器廣泛性出血，頜下淋巴結(jié)水腫、咽喉部水腫，膽囊腫大，肝臟、脾臟和腎臟有出血點(diǎn)，肺實(shí)質(zhì)出血，纖維性肺炎。取病死羊肺臟、腎臟、淋巴結(jié)等作病料進(jìn)行病原分離鑒定與藥敏試驗(yàn)。

2 材料與方法

2.1 材 料

1）病料。無(wú)菌采取大通縣城關(guān)鎮(zhèn)某羊場(chǎng)病死羊肺臟、脾臟、肝臟、淋巴結(jié)等病變器官和組織作病料。

2）主要試劑。鮮血營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板（本試驗(yàn)自制）；麥康凱培養(yǎng)基（購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司）；革蘭氏染液、微量生化反應(yīng)管以及藥敏紙片（購(gòu)自杭州濱和微生物試劑有限公司）。

2.2 方 法

1）菌株的分離培養(yǎng)。將病料接種在鮮血營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，觀察菌落形態(tài)和培養(yǎng)特性，并挑取單個(gè)菌落接種于麥康凱培養(yǎng)基上進(jìn)行純化培養(yǎng)（37 ℃培養(yǎng)24 h），觀察菌株生長(zhǎng)情況，同時(shí)將純培養(yǎng)物涂片，革蘭氏染色鏡檢。

2）生化鑒定。將分離出的菌株接種于細(xì)菌微量生化反應(yīng)管中，37 ℃恒溫培養(yǎng)24～36 h，觀察菌株生化試驗(yàn)結(jié)果。

3）藥敏試驗(yàn)。參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NC-CLS），通過(guò)K-B 紙片擴(kuò)散法[3]對(duì)病原菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)和結(jié)果判定。在血平板上均勻涂布培養(yǎng)過(guò)夜的菌液，再貼上藥敏紙片，經(jīng)37 ℃培養(yǎng)48 h 后測(cè)量抑菌圈直徑（Φ）。Φ＞15 mm：高度敏感（S），Φ＜10 mm：耐藥（R），10 mm≤Φ≤15 mm：中度敏感（I）。

3 結(jié) 果

1）病原菌培養(yǎng)特性和革蘭氏染色結(jié)果。病料在鮮血營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)24 h 后出現(xiàn)邊緣整齊的小菌落呈露珠樣，有明顯α 溶血，菌株在麥康凱培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，培養(yǎng)物經(jīng)革蘭氏染色鏡檢可見短鏈狀排列的圓形或卵圓形革蘭氏陽(yáng)性球菌。

2）菌株生化試驗(yàn)結(jié)果。由該分離菌株生化特性的鑒定結(jié)果（表1）可知，在糖發(fā)酵試驗(yàn)中，該病原菌分解麥芽糖、葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣（“+”表示產(chǎn)酸，“-”表示不產(chǎn)酸），分解乳糖、蔗糖、果糖，在其他生化試驗(yàn)中，山梨醇試驗(yàn)、MR 試驗(yàn)和硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性（“+”表示陽(yáng)性），甘露醇試驗(yàn)、V-P 試驗(yàn)等為陰性（“-”表示陰性），與鏈球菌的生化特性基本相符。

表1 分離菌株生化鑒定結(jié)果

3）藥敏試驗(yàn)結(jié)果。通過(guò)對(duì)分離菌株進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)（表2）可知，分離菌株對(duì)頭孢噻吩、頭孢他定、阿奇霉素以及磺胺間甲氧嘧啶高度敏感，對(duì)慶大霉素、環(huán)丙沙星中度敏感，對(duì)青霉素、鏈霉素、氟苯尼考、諾氟沙星、阿莫西林、紅霉素呈耐藥性。

表2 分離菌株藥敏試驗(yàn)結(jié)果

4 討 論

1）通過(guò)對(duì)大通縣城關(guān)鎮(zhèn)某羊場(chǎng)病死羊進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查初步診斷為鏈球菌感染，進(jìn)一步對(duì)分離菌株進(jìn)行生化試驗(yàn)鑒定，結(jié)果顯示該病原菌與鏈球菌的生物學(xué)特性基本相符，結(jié)合發(fā)病羊臨床癥狀、病理剖檢變化，最終判定該分離菌為鏈球菌。通過(guò)藥敏試驗(yàn)研究，結(jié)果顯示鏈球菌對(duì)頭孢噻吩、頭孢他定、阿奇霉素以及磺胺間甲氧嘧啶高度敏感，為臨床治療用藥提供了參考依據(jù)。

2）該養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生羊鏈球菌病與氣候寒冷、青飼料缺乏、養(yǎng)殖環(huán)境惡劣等因素密切相關(guān)，尤其是羊只抵抗力下降時(shí)極易誘發(fā)本病，且病死率較高，為此在本病多發(fā)的冬春季節(jié)要改善羊群養(yǎng)殖環(huán)境，供給營(yíng)養(yǎng)豐富的飼料，強(qiáng)化保暖措施，定期消毒并做好免疫接種工作，每年秋季，大小羊均皮下注射羊鏈球菌氫氧化鋁甲醛滅活苗3 mL/只，3月齡內(nèi)羔羊于2 周后加強(qiáng)免疫1 次[4]。

3）近些年，抗生素的大量使用致使鏈球菌耐藥種類與范圍的擴(kuò)增現(xiàn)象較為嚴(yán)重，這已被本次藥敏試驗(yàn)所證實(shí)，通過(guò)對(duì)分離菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)得知，菌株對(duì)本應(yīng)高度敏感的青霉素等抗菌藥物具有耐藥性，為此養(yǎng)羊場(chǎng)（戶）要摒棄憑借經(jīng)驗(yàn)使用抗菌藥物防治羊病的做法，嚴(yán)格遵守抗菌藥物的用量，注意藥物的輪換使用，從而最大限度延緩耐藥菌的產(chǎn)生。同時(shí)，相關(guān)部門應(yīng)加強(qiáng)抗生素類用藥的管理，加大可取代抗生素的新型制劑的研發(fā)力度，成為今后高效防控羊鏈球菌病的重點(diǎn)工作任務(wù)。