薄震宇，劉欣超，周金星，靳二輝，李文超，胡忠澤，顧有方*

(1. 動物營養(yǎng)調(diào)控與健康安徽省重點實驗室，安徽 鳳陽 233100；2. 安徽科技學院動物科學學院，安徽 鳳陽 233100)

目前，羊在養(yǎng)殖業(yè)中占較大的比重，其飼養(yǎng)模式已從傳統(tǒng)的農(nóng)戶散養(yǎng)發(fā)展到大規(guī)模集約化飼養(yǎng)，這有利于統(tǒng)一管理，改善養(yǎng)殖場周圍的生態(tài)環(huán)境，能有效提高生態(tài)資源的利用率[1-2]。羊胃腸道線蟲病是危害羊健康的主要動物寄生蟲病，是不斷影響?zhàn)B羊業(yè)持續(xù)下降之一，大量感染導致羔羊死亡，對全球養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)生巨大威脅[3-5]。

養(yǎng)殖戶大量使用驅蟲藥以減少羊捻轉血矛線蟲感染。然而，捻轉血矛線蟲對常用的驅蟲藥具有耐藥性。所以，研發(fā)出預防捻轉血矛線蟲感染藥物迫在眉睫[6]。此外，肉、奶和其他產(chǎn)品中的驅蟲藥殘留影響人體健康，并引起公眾極大關注[7]。本文對捻轉血矛線蟲的感染情況及診斷方法作一簡要綜述。

1 羊捻轉血矛線蟲的感染現(xiàn)狀

1.1 總體感染

Raza等[8]和 Singh等[9]分別報道巴基斯坦旁遮普南部和印度馬圖拉地區(qū)山羊捻轉血矛線蟲的感染率為 31.10%和 53.34%。黃占欣等[10]研究中發(fā)現(xiàn)羊胃腸道中存在大量的蠕蟲，其中捻轉血矛線蟲的感染率達到了36.4%，并確定了捻轉血矛線蟲為邯鄲地區(qū)羊胃腸道蠕蟲中的優(yōu)勢蟲種，與許開云等[11]報道的結果相一致。陳亮等[12]使用飽和鹽水漂浮法對蘭州地區(qū)進行羊寄生蟲感染研究調(diào)查，結果發(fā)現(xiàn)捻轉血矛線蟲的感染為50%。林琳等[13]對山羊采取完全剖檢法進行調(diào)查，結果發(fā)現(xiàn)捻轉血矛線蟲的感染率為65.61%，福建省各地均有發(fā)生。萬繼成[14]對新蔡縣的初步研究中共調(diào)查了360份糞便樣品，其中感染捻轉血矛線蟲共有302份，感染率為83.89%，高于魏彩艷等[15]對榆林市的調(diào)查結果?？赡芤驗橛芰质性?003年的時候就已經(jīng)開始禁止對羊進行放牧散養(yǎng)，而且也在養(yǎng)殖規(guī)模中設置了不少的限制。

1.2 不同地區(qū)羊的感染

在我國，捻轉血矛線蟲廣泛分布，不同省份之間的感染率各不相同[16]。張玉仙等[17]對北京地區(qū)(平谷、房山、通州、順義、大興)5個不同區(qū)縣的不同規(guī)模的羊養(yǎng)殖場進行了捻轉血矛線蟲的感染調(diào)查，結果發(fā)現(xiàn)，該蟲的感染具有顯著的地區(qū)差異性，其中通州的感染率竟然高達100%，且與通州養(yǎng)殖戶的放牧時間以及放牧的形式有關。通州主要是早晚放牧，而且是散養(yǎng)，而平谷、房山和順義羊場集約化程度高，防治措施相對完善。

1.3 不同飼養(yǎng)模式羊的感染

黃占欣等[10]研究發(fā)現(xiàn)集約化飼養(yǎng)的羊群(11.7%)遠遠比放牧散養(yǎng)的羊群(90.5%)蠕蟲的感染率低。其中放牧散養(yǎng)中羊捻轉血矛線蟲感染率為66.1%，而集約化飼養(yǎng)的羊群胃腸道捻轉血矛線蟲感染率只有5%。關于集約化和放牧之間的差異極顯著，與王永利[18]在北京地區(qū)進行的相關的調(diào)查研究的結果是一致的。說明集約化飼養(yǎng)更有利于羊群的身體健康，降低捻轉血矛線蟲的感染，提高機體的生產(chǎn)性能。萬繼成[14]在調(diào)查河南新蔡縣山羊寄生蟲感染情況發(fā)現(xiàn)捻轉血矛線蟲為優(yōu)勢蟲種，克井鎮(zhèn)、大浴鎮(zhèn)、坡頭鎮(zhèn)和王屋鎮(zhèn)的4個不同地區(qū)的4個規(guī)?；B(yǎng)殖場分的感染率分別為71.11%、91.11%、73.33%和62.22%，而4個放牧散養(yǎng)戶的感染率分別為82.22%、97.78%、93.33%和100%，新蔡縣地區(qū)放牧散養(yǎng)戶捻轉血矛線蟲的平均感染率(93.33%)明顯高于規(guī)?；B(yǎng)殖戶(74.44%)，其中王屋鎮(zhèn)的散養(yǎng)戶感染率竟然達到了100%。

1.4 不同品種羊的感染

研究表明，一些綿羊品種對捻轉血矛線蟲具有天然抵抗力[19]。由于感染引起免疫應答的相對能力不同，不同品種之間的捻轉血矛線蟲易感性差異更大，阿薩姆邦山羊的最低感染率可能是由于土著動物有更強的抗病能力[20]。González等[21]比較了加納利群島上2個綿羊品種對捻轉血矛線蟲的易感性，綿羊試驗感染了20 000個幼蟲，感染后第7天和28天剖檢動物，對未成熟的蠕蟲計數(shù)中沒有發(fā)現(xiàn)綿羊品種之間的差異。但是，與綿羊品種相比，絨毛綿羊的平均糞便卵數(shù)比其他品種綿羊的低，子宮內(nèi)卵數(shù)和雌蟲發(fā)育不良的數(shù)量也較低。表明絨毛綿羊品種對捻轉血矛線蟲感染有更強的抵抗力，而且這種抵抗力可能在成蟲水平上起作用。魏彩艷等[15]對榆林市榆陽區(qū)4個不同羊品種進行了寄生蠕蟲的初步調(diào)查，結果表明不同羊品種的捻轉血矛線蟲感染率和感染強度各不相同，其中陜北絨山羊的感染率為57.5%，小尾寒羊感染率為37.5%；當?shù)厣窖蚝屯练N綿羊感染率分別為37.5%和27.5%。土種山羊和綿羊對該蟲的感染率普遍低于其他地區(qū)引進來的山羊和綿羊，可能是因為當?shù)匮驅Ρ就恋哪磙D血矛線蟲感染具有一定適應性，習慣了本地的飼養(yǎng)模式與環(huán)境，而引進來的羊對本地水土不服，導致身體機能下降，抗病能力降低，感染捻轉血矛線蟲的程度較高。

1.5 不同季節(jié)羊的感染

岳建偉等[22]研究發(fā)現(xiàn)臨河地區(qū)舍飼羔羊消化道線蟲排卵的季節(jié)動態(tài)，捻轉血矛線蟲全年呈現(xiàn)1個高峰期，為9月份、 6月份出生的夏羔，在9月齡前并沒有觀察到捻轉血矛線蟲的感染，而3月份生的春羔在翌年的9月份首次檢出捻轉血矛線蟲，由此推斷，捻轉血矛線蟲的感染時間為6到10月份，夏季感染較為嚴重。Durani 等[23]也報道了7到8月份捻轉血矛線蟲的最高感染率，水分的存在有利于幼蟲的發(fā)育，這與早期觀察到感染情況相似。秦建華等[24]報告河北省壩上高原地區(qū)綿羊主要胃腸道線蟲的季節(jié)性發(fā)病情況。結果表明，年內(nèi)有2個高峰期(3至6月份；9至次年1月份)感染，并且捻轉血矛線蟲有明顯的春季上升現(xiàn)象。宋銘忻等[25]報道中國黑龍江省松花江地區(qū)綿羊捻轉血矛線蟲成蟲的卵產(chǎn)量和蠕蟲感染的季節(jié)性發(fā)生率，發(fā)現(xiàn)年內(nèi)捻轉血矛線蟲成蟲的卵產(chǎn)量和蠕蟲感染達到2個高峰，從 4 月下旬到 5 月下旬，卵的產(chǎn)量和蠕蟲感染增加，并在 5 月下旬達到峰值，然后立即下降，直到 7 月下旬，在8 月初達到第2個高峰再次下降，然后一直保持較低水平，直到明年4月份。7月份最熱，松花江地區(qū)冬季寒冷多雨，夏季炎熱多雨，平均氣溫在 20～25 ℃，而1月最冷，平均溫度低于-20 ℃，且年降水量約500 mm。顯然，夏季的溫暖天氣將促進這兩個地區(qū)的捻轉血矛線蟲的發(fā)展，而冬季的寒冷天氣會抑制其發(fā)展，從而導致季節(jié)動態(tài)。

羅拉體等[26]對涼山州高寒山區(qū)和二半山區(qū)進行調(diào)查研究，發(fā)現(xiàn)捻轉血矛線蟲是羊的優(yōu)勢蟲種，危害最大，感染率分別為24%和45%。而且在高寒山區(qū)和二半山區(qū)的羊感染最高峰都是在當?shù)貧鉁乇容^高的5月份和9月份，二半山區(qū)的氣溫普遍高于高寒山區(qū)，致使前者的感染率也高于后者。周才瑛等[27]對瀏陽黑山羊進行捻轉血矛線蟲感染調(diào)查，發(fā)現(xiàn)不同季度的感染情況不同，春、夏、秋、冬四季分別感染39.1%、46.7%、81.3%、53.3%。感染呈上升趨勢。說明氣溫是影響寄生蟲感染的主要因素。

2 診斷方法

到目前為止，捻轉血矛線蟲感染的臨床診斷取決于臨床體征和體外培養(yǎng)幼蟲的鑒定。死后診斷是調(diào)查過程中最常用的方法。此外，近年來也采用了基于蟲體核酸的分子診斷方法。

2.1 形態(tài)學鑒定

根據(jù)形態(tài)學鑒定血矛線蟲卵。對比進行幼蟲體外培養(yǎng)和L3幼蟲的鑒定是一種較好的方法[28]。體外培養(yǎng)是通過收集的新鮮糞便中加入適量的鋸末或蛭石進行直接培養(yǎng)，然后利用貝爾曼氏收集并鑒定。該方法存在檢測靈敏度較低的缺點，尤其是在樣本中蟲體數(shù)量較少時，檢測效果更差。

2.2 血清學檢測

替代診斷包括ELISA在內(nèi)的血清學技術，在短時間內(nèi)更具準確性和更有診斷能力[29]。主要是基于不同抗原(如體細胞和排泄分泌(ES)抗原)的免疫分析，已經(jīng)被應用來檢測特定抗體，主要缺點是共享抗原組成而產(chǎn)生交叉反應[30-31]。ESPs由于具有良好的敏感性和特異性而被廣泛用作抗原診斷，發(fā)揮重要的免疫作用。肌球蛋白(TpMy)也可檢測山羊捻轉血矛線蟲早期(感染后14 d)感染；潛在的早期免疫診斷抗原，以肌球蛋白為基礎的間接ELISA對山羊感染捻轉血矛線蟲的診斷具有較高的敏感性和特異性，這也是一種血清學診斷方法，比常規(guī)顯微鏡檢查更靈敏可靠[32]。免疫印跡在靶蛋白的選擇中也起著初步的作用，免疫印跡法和優(yōu)化酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測山羊早期感染過程中的捻轉血矛線蟲[33]。一些發(fā)現(xiàn)證明，與常規(guī)顯微鏡檢查相比，基于rHc-TpMy的血清診斷是更準確的檢測捻轉血矛線蟲感染的工具。據(jù)報道，ELISA和免疫印跡分析是檢測山羊感染捻轉血毛線蟲的潛在診斷工具[34]，Naqvi等[35]以重組肝細胞癌相關抗原59為基礎，聯(lián)合間接ELISA和免疫印跡建立了診斷羊捻轉血矛線蟲感染方法。

2.3 PCR檢測

PCR具有靈敏度高、特異性強、適用于低感染率動物的檢測等突出優(yōu)點，比顯微鏡和血清學更快速和準確。Elmahalawy等[36]開發(fā)了用于檢測反芻動物中的毛圓線蟲感染的PCR方法。該檢測由4個基因特異性的引物/探針組成，能夠在多重感染的情況下對目標DNA進行敏感和特異的擴增。在過去的10年里，已開發(fā)出多種基于PCR(基于hmcp 3和 hmcp 6半胱氨酸蛋白酶基因、ITS1序列、Hcher-1基因等)的檢測方法作為輔助診斷。

3 展望

捻轉血矛線蟲病傳播危害極大，要對其危害有充分的認識。目前，各地羊胃腸道線蟲感染依然嚴重，無論是急性還是慢性，都對飼養(yǎng)戶帶來嚴重的經(jīng)濟損失，為了減少養(yǎng)殖戶的損失，需要加強捻轉血矛線蟲病的宣傳和學習，讓養(yǎng)殖者具備基礎診斷和治療能力。除此尚需開展更多相關研究工作，以實施更具成本效益的控制策略。諸如為了盡早發(fā)現(xiàn)耐藥性的緊急情況并監(jiān)測其發(fā)展以減少耐藥性的不利影響，應評估更高效、更準確的現(xiàn)場檢測耐藥性方法的效果，在全國范圍內(nèi)調(diào)查耐藥性的嚴重程度；開發(fā)出更靈敏、更具體的方法，以便在現(xiàn)場使用和檢測混合感染。進一步開展與該寄生蟲的生物學及其與宿主相互作用有關的基礎研究，以建立更有用的診斷方法，開發(fā)有效的藥物和治療方法。

捻轉血矛線蟲病防控單靠藥物治療是遠遠不夠的，為了加快我國羊養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，必須加大捻轉血矛線蟲病的防控力度，加強飼養(yǎng)管理，通過補充蛋白質、微量元素、維生素等方法提高羊的免疫力。