劉 倩，王宗艷

陜西省人民醫(yī)院消化二科，陜西 西安 710068

胃癌為常見(jiàn)的消化道腫瘤之一，具有高發(fā)病率、高病死率，嚴(yán)重威脅人類的生命健康，胃癌發(fā)生與否受生活條件、飲食習(xí)慣、幽門(mén)螺桿菌(Hp)的影響[1]。我國(guó)胃癌發(fā)病率和病死率約占全球45.0%，而診治率低于10.0%，胃癌患者就診時(shí)大多已到中晚期，所以及早進(jìn)行胃癌篩查、早診早治對(duì)于胃癌患者具有重要意義，而檢測(cè)胃癌生物標(biāo)志物特別是血清標(biāo)志物是改善胃癌患者預(yù)后的關(guān)鍵。微小核糖核酸(miRNA)是胃癌患者血清中存在的一種腫瘤標(biāo)志物，能夠調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡[2]。本研究選取在本院行手術(shù)治療且術(shù)前未進(jìn)行過(guò)放療、化療的60例胃癌患者作為研究對(duì)象，探討其血清miRNA-647水平及臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年6月至2019年8月在本院行手術(shù)治療且術(shù)前未進(jìn)行過(guò)放療、化療的60例胃癌患者作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)癥狀及臨床診斷均符合胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)者；(2)臨床資料完整者；(3)患者及家屬簽署書(shū)面知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)全身性疾病，包括嚴(yán)重肝、肺、心、腎功能不全者；(2)預(yù)計(jì)生存期不足3個(gè)月者；(3)嚴(yán)重精神疾病患者；(4)合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤患者。同期選取本院胃潰瘍患者60例作為胃潰瘍組，以及體檢健康者60例作為對(duì)照組。觀察組男39例，女21例；年齡34～78歲，平均(56.17±5.36)歲；Hp陽(yáng)性34例，陰性26例；TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期22例，Ⅲ期20例，Ⅳ期7例；病灶直徑≥5 cm 37例，<5 cm 23例；分化程度：低分化27例，中分化22例，高分化11例。胃潰瘍組男30例，女30例；年齡32～74歲，平均(55.81±5.69)歲；Hp陽(yáng)性32例，陰性28例。對(duì)照組男32例，女28例；年齡35～75歲，平均(56.09±5.18)歲；Hp陽(yáng)性35例，陰性25例。3組患者性別、年齡等一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法 空腹抽取4 mL靜脈血，室溫下放置1 h，4 000 r/min離心10 min，取1.5 mL上清液轉(zhuǎn)至無(wú)RNA酶離心管，于-80 ℃冰箱中保存。血清miRNA提取采用長(zhǎng)沙維爾公司試劑盒，根據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，再根據(jù)北京康為生物公司提供的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行miRNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)條件：16 ℃ 30 min，42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 min。采取TRIzol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，根據(jù)美國(guó)Thermo Forma公司相關(guān)試劑盒操作進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，反應(yīng)條件：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，共40次循環(huán)。miRNA-647上游引物為5′-GCTACACAGAGGCCATTGAA-3′,下游引物為5′-TCCCGGAGTTCATCTATGTG-3′；內(nèi)參GAPDH上游引物為5′-TGCGACTTCAACAGCAACTC-3′，下游引物為5′-CTTGCTCAGTGTCCTTGCTG-3′。根據(jù)2-ΔΔCt計(jì)算miRNA-647相對(duì)水平。觀察比較各組研究對(duì)象血清miRNA-647水平及其與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者血清miRNA-647水平比較 觀察組血清miRNA-647相對(duì)水平(5.06±1.48)高于胃潰瘍組(1.85±0.73)和對(duì)照組(0.97±0.49)，且胃潰瘍組高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2血清miRNA-647水平與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 血清miRNA-647水平與胃癌患者年齡、性別、分化程度等無(wú)相關(guān)(P>0.05)，與患者腫瘤大小、TNM分期、Hp感染有相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.3血清miRNA-647、癌胚抗原(CEA)、糖類抗原199(CA199)診斷胃癌的效能比較 ROC曲線分析顯示，血清miRNA-647診斷胃癌的曲線下面積(AUC)高于CEA、CA199。見(jiàn)表2。

表1 miRNA-647相對(duì)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表2 血清miRNA-647、CEA、CA199診斷胃癌的效能比較

3 討 論

胃癌早期癥狀不明顯，容易復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，預(yù)后差，胃鏡檢查可診斷胃癌但不適應(yīng)于早期胃癌篩查，而血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)作為新型、無(wú)創(chuàng)的檢測(cè)手段，對(duì)胃癌的診斷有重要意義[3]。

miRNA由19～25個(gè)核苷酸構(gòu)成，為非編碼小分子RNA，長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸，可折疊形成前體轉(zhuǎn)錄物再合成為成熟的miRNA。miRNA配對(duì)結(jié)合靶mRNA致使其降解、翻譯改變蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)性調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，在細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞分化、新陳代謝、增殖及凋亡等生物學(xué)進(jìn)程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。血清miRNA與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)，不同生物體、不同疾病類型、不同細(xì)胞生長(zhǎng)周期，miRNA表達(dá)情況不同。在乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌等惡性腫瘤中miRNA-647水平較同，而關(guān)于胃癌組織miRNA-647水平的研究較少，調(diào)控機(jī)制尚不明確。有研究表明，胃癌組織miRNA-223水平較癌旁組織明顯升高[4]。血清miRNA的來(lái)源有3種：凋亡細(xì)胞破損后釋放；外泌體、穿梭囊泡運(yùn)輸，細(xì)胞膜包裹傳導(dǎo)；分泌中與RNA結(jié)合蛋白結(jié)合后釋放。miRNA可長(zhǎng)期儲(chǔ)存于人體血清、血漿中，可適應(yīng)酸堿變化、溫度變化。不同惡性腫瘤特異性miRNA不同，起源的組織或器官可由低分化腫瘤組織的miRNA水平確定，miRNA是檢測(cè)惡性腫瘤的理想血清標(biāo)志物[5]。

本研究結(jié)果顯示，觀察組血清miRNA-647水平顯著高于胃潰瘍組和對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明miRNA-647水平在胃癌患者血清中較胃潰瘍患者和體檢健康者明顯升高。本研究結(jié)果還顯示，血清miRNA-647水平與胃癌患者年齡、性別、分化程度等無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，與患者腫瘤大小、TNM分期、Hp感染有相關(guān)(P<0.05)，這與徐娟等[6]、周欣亮等[7]研究結(jié)果一致。

綜上所述，血清miRNA-647水平與胃癌腫瘤大小、TNM分期、Hp感染有關(guān)，對(duì)胃癌有較好的診斷效能。