徐文雅 朱玉燕 徐啟航 李生娥 沈淑鈴 姚蘭英 鄭小林

(1浙江工商大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，浙江 杭州 310018；2德清秋水果汁有限公司，浙江 德清 313216)

獼猴桃(Actinidiaspp)采后的主要病害有軟腐病、蒂腐病、青霉病、炭疽病和灰霉病等[1]。其中，灰霉病可在獼猴桃的花期、幼果期和貯藏期等各個(gè)時(shí)期發(fā)生，對(duì)我國(guó)獼猴桃產(chǎn)業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。研究表明，灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起的獼猴桃采后腐爛率高達(dá)30%以上[3-4]。灰霉菌不僅具有較強(qiáng)的潛伏侵染能力，而且其生長(zhǎng)溫度范圍較寬，在低溫條件下也能正常生長(zhǎng)發(fā)育，如在0℃條件下可依舊保持致病力[5]。目前，生產(chǎn)實(shí)踐中常采用化學(xué)殺菌劑來(lái)防治灰霉病，但化學(xué)殺菌劑殘留影響果品的食用安全性。因此，開(kāi)發(fā)安全、有效、無(wú)毒的天然殺菌誘抗劑已成為獼猴桃采后研究的熱點(diǎn)之一。

傘形花內(nèi)酯，又名傘形酮、7-羥基香豆素，是蕓香科和傘形科香豆素類(lèi)中最簡(jiǎn)單的一種多酚物質(zhì)，主要存在于瑞香狼毒、雪蓮等中草藥中，具有抗菌、抗氧化、抗癌等多種藥理作用，但其含量在天然植物中較低，提取比較困難，目前獲得傘形花內(nèi)酯的途徑多為化學(xué)合成[6]。傘形花內(nèi)酯抗細(xì)菌和抗真菌活性中等，其中對(duì)真菌的最小抑制濃度(minimal inhibit concentration，MIC)為500～1 000 μg·mL-1，其對(duì)小鼠的半致死量(median lethal dose，LD50)為450 mg·kg-1[7]。研究表明傘形花內(nèi)酯對(duì)桃褐腐病菌、棉花紅腐病菌、草莓灰霉病菌、辣椒炭疽病菌均有抑菌作用，其中對(duì)草莓灰霉菌的MIC 為2 000 μg·mL-1[8]，說(shuō)明傘形花內(nèi)酯具有廣譜抑菌性。浙江工商大學(xué)鄭小林課題組前期研究發(fā)現(xiàn)傘形花內(nèi)酯能夠誘導(dǎo)提高獼猴桃采后果實(shí)對(duì)青霉病的抗性，有助于保持獼猴桃采后果實(shí)品質(zhì)[9]。為了進(jìn)一步明確傘形花內(nèi)酯對(duì)獼猴桃果實(shí)采后主要病害的控制效果，本試驗(yàn)研究了傘形花內(nèi)酯處理對(duì)采后損傷接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)的抗病機(jī)理，以期為傘形花內(nèi)酯應(yīng)用于獼猴桃果實(shí)采后病害防治提供理論依據(jù)和技術(shù)參數(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

美味獼猴桃徐香果實(shí)于2018年10月9日采摘自浙江省臺(tái)州市花積山獼猴桃種植基地，當(dāng)天運(yùn)回杭州實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理。

灰霉菌，浙江省果蔬保鮮與加工技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存菌株；傘形花內(nèi)酯(純度為99%)，杭州阿拉丁試劑公司。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-1800 型紫外分光光度計(jì)，日本島津公司；TGL-16M 型高速離心機(jī)，湘儀離心機(jī)儀器有限公司；HH-S型數(shù)顯恒溫水浴鍋，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；SW-CJ-2D 型超凈工作臺(tái)，上海滬粵明科學(xué)儀器有限公司；MIR-553 型恒溫培養(yǎng)箱，日本SANYO 公司；FMH-5型滅菌鍋，日本Takemura 公司；DM4000 型高倍顯微鏡，德國(guó)徠卡顯微系統(tǒng)公司；Milli-Q 型超純水裝置，美國(guó)MILLIPORE 公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 孢子懸浮液的制備 灰霉菌孢子懸浮液的制備參考邵興鋒等[10]的方法。將灰霉菌菌種在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(potato dextrose agar，PDA)上進(jìn)行多次活化，將活化好的灰霉菌接種于新PDA 平板，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，將含0.05% Tween-20 的無(wú)菌水放于長(zhǎng)滿灰霉菌的平板，并用無(wú)菌涂布棒刮菌，刮完用三層無(wú)菌紗布過(guò)濾，收集孢子于無(wú)菌錐形瓶，調(diào)節(jié)孢子懸浮液濃度為1.5×106個(gè)·mL-1，待用。

1.3.2 試驗(yàn)處理 選取表面無(wú)機(jī)械損傷、無(wú)病蟲(chóng)害、無(wú)斑且大小和成熟度基本一致的徐香獼猴桃果實(shí)，用1%次氯酸鈉溶液浸泡2 min 后，再分別用0、0.5 和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯溶液浸泡10 min，其中以0 mg·mL-1組為對(duì)照(CK)。浸泡完畢自然晾干后放入22℃環(huán)境中貯藏48 h，之后用含75% 酒精棉球?qū)ΛJ猴桃赤道部位消毒，用滅菌的鐵釘在獼猴桃赤道部位等間距刺3 個(gè)3 mm×3 mm 大小的傷口，1 h 后于每個(gè)傷口接種20 μL 1.3.1 中制備的灰霉菌孢子懸浮液，分批按每框35 個(gè)放入框中，框里放入濕潤(rùn)的紙巾以保持高濕度(相對(duì)濕度為85%～90%)，在框外套厚度為0.05 mm 的聚乙烯薄膜袋，袋上扎數(shù)個(gè)小孔，袋口不封口且自然合攏，置于22℃條件下貯藏。接菌當(dāng)天按0 d 算，之后每2 d 取一次樣，每次取40 個(gè)果，取病斑周?chē)? cm 處果肉作為試驗(yàn)樣品，果肉切碎混勻，將CK和處理果實(shí)果肉分成三組，用液氮進(jìn)行速凍并保存在-80℃冰箱，用于后續(xù)相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定。每個(gè)指標(biāo)重復(fù)測(cè)定3 次。

1.3.3 灰霉菌孢子萌發(fā)率和體外菌落直徑的測(cè)定孢子萌發(fā)率:灰霉菌孢子萌發(fā)率的測(cè)定參考鄭劍等[9]的方法。用直徑7 mm 無(wú)菌打孔器選取無(wú)菌的PDA餅，將PDA 餅放置在滅過(guò)菌的玻片上，然后將玻片置于中央有潤(rùn)濕濾紙片的培養(yǎng)皿中。在PDA 餅上分別加入30 μL 清水(含無(wú)水乙醇)、0.5 mg·mL-1和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯溶液，待干后，加入20 μL 1.3.1制備的灰霉菌孢子懸浮液，培養(yǎng)8 h 后，在顯微鏡下觀察灰霉菌孢子的萌發(fā)情況并測(cè)定其萌發(fā)率(孢子芽管長(zhǎng)度等于或大于孢子直徑的一半即視為萌發(fā))，每組重復(fù)3 次。

體外菌落直徑的測(cè)定:灰霉菌體外菌落直徑的測(cè)定參考鄭劍等[9]的方法。經(jīng)滅菌后的PDA 冷卻至55～60℃時(shí)，加入清水(含無(wú)水乙醇)和傘形花內(nèi)酯使PDA 中傘形花內(nèi)酯濃度為0、0.5 和1.0 mg·mL-1，然后倒入培養(yǎng)基中，待冷卻凝固后備用。在培養(yǎng)皿中央放入直徑為1 cm 的無(wú)菌圓形濾紙片，并在上面加入100 μL 1.3.1 制備的灰霉菌孢子懸浮液，26℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，并分別于第3、第5、第7 天用十字交叉法測(cè)定菌落直徑。每組重復(fù)5 次。

1.3.4 獼猴桃病斑面積的測(cè)定 獼猴桃經(jīng)損傷接種灰霉菌后，于22℃條件下貯藏，分別在第0、第2、第4、第6、第8 天觀察果實(shí)發(fā)病情況并用十字交叉法測(cè)定其病斑直徑，計(jì)算病斑面積，每組每次30 個(gè)果，10 個(gè)果為1 次重復(fù)。

1.3.5 幾丁質(zhì)酶和β-1，3-葡聚糖酶活性的測(cè)定幾丁質(zhì)酶(chitinase，CHT) 活性的測(cè)定參考Boller等[11]的方法。以每秒鐘每克樣品(鮮重)中酶分解膠狀幾丁質(zhì)所產(chǎn)生的1 μmolN-乙酰葡萄糖胺作為一個(gè)CHT 活性單位(U)，用U·g-1FW 表示。每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3 次。

β-1，3-葡聚糖酶(β-1，3-glucanase，GLU)活性的測(cè)定參考Zong 等[12]的方法。以每秒鐘每克樣品(鮮重)中酶分解昆布多糖產(chǎn)生1×10-9mol 葡萄糖作為一個(gè)GLU 活性單位(U)，用U·g-1FW 表示。

1.3.6 苯丙氨酸解氨酶和4-香豆酰-輔酶A 連接酶活性的測(cè)定 苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyase，PAL)活性的測(cè)定參考Liu 等[13]的方法。以每小時(shí)每克樣品(鮮重)酶促反應(yīng)體系吸光度值增加0.01 為一個(gè)PAL 活性單位(U)，用U·g-1FW 表示。

4-香豆酰-輔酶A 連接酶(4-coumarate coenzyme A ligase，4-CL)活性的測(cè)定參考黃玉平等[14]的方法。以每分鐘每克樣品(鮮重)酶促反應(yīng)體系吸光度值增加0.01為一個(gè)4-CL 活性單位(U)，用U·g-1FW 表示。

1.3.7 過(guò)氧化物酶和多酚氧化酶活性的測(cè)定 過(guò)氧化物酶(peroxidase，POD)活性的測(cè)定參考Srivastava等[15]的方法。以每分鐘每克樣品(鮮重)的吸光度值變化0.01 為一個(gè)POD 活性單位(U)，用U·g-1FW 表示。

多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)活性的測(cè)定參考Sugumaran 等[16]的方法。以每分鐘每克樣品(鮮重)的吸光度值變化0.001 為一個(gè)PPO 活性單位(U)，用U·g-1FW 表示。

1.3.8 總酚、類(lèi)黃酮和木質(zhì)素的測(cè)定 總酚含量的測(cè)定參考Kaur 等[17]的方法。測(cè)定樣品液在765 nm 波長(zhǎng)處的吸光度值，根據(jù)吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的沒(méi)食子酸含量(μg)，計(jì)算總酚含量。

類(lèi)黃酮含量的測(cè)定參考Wang 等[18]的方法。測(cè)定樣品液在325 nm 波長(zhǎng)處的吸光度值，根據(jù)吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的蘆丁含量(mg)，計(jì)算類(lèi)黃酮含量。

木質(zhì)素含量的測(cè)定參考Syros 等[19]的方法，略作修改。測(cè)定樣品液在280 nm 波長(zhǎng)處的吸光度值，木質(zhì)素含量用OD280·g-1FW 表示。

1.4 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)

采用 Microsoft Office Excel 2016 繪圖，SPSS statistics 23.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，顯著性水平設(shè)置為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 傘形花內(nèi)酯對(duì)灰霉菌孢子萌發(fā)率和體外菌落直徑生長(zhǎng)的影響

由圖1-A 可知，灰霉菌經(jīng)8 h 培養(yǎng)后，CK、0.5 和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理組的灰霉菌孢子萌發(fā)率分別是92.33%、54.87%和24.54%，表明0.5 和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理均能顯著抑制灰霉菌孢子的萌發(fā)(P＜0.05)。由圖1-B 可知，離體條件下，灰霉菌菌落直徑隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而擴(kuò)展，但2 個(gè)濃度傘形花內(nèi)酯處理組在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中均顯著抑制了灰霉菌菌落直徑的擴(kuò)展(P＜0.05)。

2.2 傘形花內(nèi)酯處理對(duì)獼猴桃果實(shí)損傷接種灰霉菌后病斑面積的影響

由圖2可知，獼猴桃采后果實(shí)損傷接種灰霉菌后，果實(shí)的病斑面積隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷擴(kuò)大。與CK 相比，0.5 和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理均顯著抑制整個(gè)貯藏期間果實(shí)病斑面積的擴(kuò)展(P＜0.05)；但2 個(gè)濃度傘形花內(nèi)酯處理的抑制效果在接種后4～8 d 無(wú)顯著差異。說(shuō)明適當(dāng)濃度傘形花內(nèi)酯處理能夠有效抑制果實(shí)損傷接種灰霉菌后的病情發(fā)展。

2.3 傘形花內(nèi)酯處理對(duì)獼猴桃果實(shí)損傷接種灰霉菌后CHT 和GLU 活性的影響

由圖3-A 可知，獼猴桃果實(shí)損傷接種灰霉菌后，CK 和處理組CHT 活性均呈先上升后下降的趨勢(shì)；CK和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理組果實(shí)CHT 活性在接種后第4 天出現(xiàn)高峰，而0.5 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理組果實(shí)的CHT 活性在接種第6 天出現(xiàn)高峰。此外，除1.0 mg·mL-1處理組果實(shí)接種后第8 天處，2 個(gè)濃度傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的CHT 活性在貯藏期間均顯著高于CK(P＜0.05)。

由圖3-B 可知，CK 獼猴桃果實(shí)的GLU 活性不斷上升至第4 天后維持在相對(duì)穩(wěn)定的水平，而0.5 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的GLU 活性不斷上升，1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的GLU 活性不斷上升至接種第6 天后開(kāi)始下降。除1.0 mg·mL-1處理在接種后第8 天外，2 個(gè)濃度傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的GLU 活性在貯藏期間均顯著高于CK(P＜0.05)。

2.4 傘形花內(nèi)酯處理對(duì)獼猴桃果實(shí)損傷接種灰霉菌后PAL 和4-CL 活性的影響

由圖4-A 可知，CK 和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的PAL 活性變化趨勢(shì)相似，呈緩慢上升趨勢(shì)；而0.5 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的PAL 活性呈先上升后下降的趨勢(shì)，在接種后第4 天達(dá)到高峰。除1.0 mg·mL-1處理果實(shí)在接種后第8 天外，2 個(gè)濃度傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的PAL 活性在貯藏期間均顯著高于CK(P＜0.05)。

由圖4-B 可知，CK 和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的4-CL 活性均呈先上升后趨于平緩的趨勢(shì)，而0.5 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的4-CL 活性呈波動(dòng)上升趨勢(shì)。0.5 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的4-CL活性在接種后第4 和第8 天顯著高于CK(P＜0.05)，而1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的4-CL 活性在接種后第0、第2、第8 天顯著高于CK(P＜0.05)。說(shuō)明傘形花內(nèi)酯處理誘導(dǎo)提高了苯丙烷代謝途徑關(guān)鍵酶PAL 和4CL 的活性。

2.5 傘形花內(nèi)酯處理對(duì)獼猴桃果實(shí)損傷接種灰霉菌后POD 和PPO 活性的影響

由圖5-A 可知，CK 果實(shí)的POD 活性先緩慢降低(0～6 d)，隨后急劇上升；0.5 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的POD 活性急劇降低在接種第2 天達(dá)到最低值，隨后急劇增加至接種第6 天后趨于平衡；1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的POD 活性先呈下降趨勢(shì)(0～4 d)，而后急劇增加，在接種第6 天達(dá)到最大值，隨后又降低至與CK 同水平。0.5 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的POD 活性在接種后第4～第8 天顯著高于CK，1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理僅在接種后第2和第6 天顯著高于CK(P＜0.05)。

由圖5-B 可知，CK 和0.5 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的PPO 活性在貯藏期間均不斷增加；1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的PPO 活性先呈增加趨勢(shì)，接種后第6 天達(dá)到最大值，而后降低至初始水平。除1.0 mg·mL-1處理在接種后第8 天外，2 個(gè)濃度傘形花內(nèi)酯處理的果實(shí)PPO 活性在貯藏期間均顯著高于CK(P＜0.05)。說(shuō)明傘形花內(nèi)酯處理誘導(dǎo)提高了苯丙烷代謝途徑末端氧化酶POD 和PPO 的活性。

2.6 傘形花內(nèi)酯處理對(duì)獼猴桃果實(shí)損傷接種灰霉菌后總酚、類(lèi)黃酮和木質(zhì)素含量的影響

由圖6-A 可知，CK 果實(shí)的總酚含量呈波動(dòng)上升趨勢(shì)；0.5 和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的總酚含量的變化趨勢(shì)基本一致，在接種后第0～第6 天呈上升趨勢(shì)，隨后降低。0.5 和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的總酚含量分別在接種后第0、第4、第6 天和第0、第6 天顯著高于CK(P＜0.05)。

由圖6-B 可知，CK 和處理組果實(shí)的類(lèi)黃酮含量在接種后0～2 d 變化不明顯，而后不斷增加；除0.5 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)在接種后第2 天外，2 個(gè)濃度處理果實(shí)的類(lèi)黃酮含量在貯藏期間都顯著高于CK(P＜0.05)。

由圖6-C 可知，CK 和0.5 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的木質(zhì)素含量變化趨勢(shì)相似，呈波動(dòng)變化，而1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理果實(shí)的木質(zhì)素含量在接種前6 d 略微降低，而后急劇增加。0.5 和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理的果實(shí)木質(zhì)素含量分別在接種后第4～第8 天和接種后第4、第8 天顯著高于CK(P＜0.05)。說(shuō)明傘形花內(nèi)酯處理能夠提高獼猴桃采后果實(shí)的總酚、類(lèi)黃酮和木質(zhì)素等抗性物質(zhì)的含量。

3 討論

灰霉菌是獼猴桃灰霉病的主要病原菌，可在獼猴桃果實(shí)生長(zhǎng)期侵染，也會(huì)在果實(shí)采后貯藏期間侵染，導(dǎo)致果實(shí)腐爛而失去商品價(jià)值[20]。有研究表明，傘形花內(nèi)酯能夠通過(guò)破壞灰霉病菌孢子和菌絲體的形態(tài)結(jié)構(gòu)起到抑菌效果[21]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，0.5 和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理均能顯著抑制灰霉菌孢子的萌發(fā)，且傘形花內(nèi)酯濃度越高，抑制效果越顯著。此外，2 個(gè)濃度的傘形花內(nèi)酯處理均能顯著抑制灰霉菌體外菌落的擴(kuò)展，且1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理的抑制效果優(yōu)于0.5 mg·mL-1，這與傘形花內(nèi)酯對(duì)擴(kuò)展青霉的抑制效果[9]相似，表明傘形花內(nèi)酯對(duì)一些真菌致病菌具有較好的抑菌效果。同時(shí)，接種第2 天后，盡管0.5 和1.0 mg·mL-1傘形花內(nèi)酯處理對(duì)損傷接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)的病斑擴(kuò)展未表現(xiàn)顯著差異，但2 個(gè)濃度處理均能夠有效抑制損傷接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)的病斑擴(kuò)展，表明適當(dāng)濃度范圍的傘形花內(nèi)酯處理能夠有效控制獼猴桃采后果實(shí)灰霉病的病情發(fā)展，降低果實(shí)腐爛率。

CHT 和GLU 是采后果實(shí)在受到生物或非生物脅迫時(shí)所誘導(dǎo)產(chǎn)生一類(lèi)小分子蛋白，即病程相關(guān)蛋白(pathogenesis related protein，PR 蛋白)[22]。研究表明，CHT 和GLU 對(duì)真菌細(xì)胞壁的降解有協(xié)同作用，兩者能降解真菌細(xì)胞壁的主要成分幾丁質(zhì)和β-1，3-葡聚糖，對(duì)病原菌有直接殺傷作用[23]。本研究發(fā)現(xiàn)，2 個(gè)濃度傘形花內(nèi)酯處理均可顯著提高損傷接種灰霉菌后徐香獼猴桃果肉中的CHT 和GLU 活性，表明傘形花內(nèi)酯處理可能是通過(guò)誘導(dǎo)產(chǎn)生PR 蛋白來(lái)提高果實(shí)的抗病性。

植物可以激活體內(nèi)苯丙烷代謝來(lái)抵御病原菌的侵染，從而增強(qiáng)自身抗病性；其中，PAL 和4CL 是苯丙烷代謝途徑的關(guān)鍵酶，其活性高低與寄主抗病強(qiáng)弱密切相關(guān)[14，24-25]；POD 和PPO 是苯丙烷途徑的末端相關(guān)酶，在抗病性中也發(fā)揮重要的作用[25-26]。研究發(fā)現(xiàn)一些植物誘抗劑提高采后果實(shí)的抗病性與其調(diào)控果實(shí)的苯丙烷代謝相關(guān)。例如，甲基水楊酸[27]和褪黑素[28]處理誘導(dǎo)提高番茄等采后果實(shí)苯丙烷代謝關(guān)鍵酶活性，進(jìn)而提高了果實(shí)對(duì)灰霉病的抗性。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照相比，傘形花內(nèi)酯處理不同程度提高了損傷接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)在貯藏期間的PAL、4CL、PPO 和POD 活性，表明傘形花內(nèi)酯處理可以通過(guò)提高獼猴桃采后果實(shí)的苯丙烷代謝相關(guān)酶活性來(lái)提高果實(shí)的抗病力，進(jìn)而抑制灰霉病的發(fā)展。

多酚和類(lèi)黃酮等酚類(lèi)物質(zhì)是植物體內(nèi)的次生代謝產(chǎn)物，不僅對(duì)病原菌有毒害作用，還能被氧化成毒性更高的醌類(lèi)物質(zhì)，進(jìn)一步毒殺病原菌[29]。木質(zhì)素是細(xì)胞壁的主要成分之一，同時(shí)也是苯丙烷類(lèi)代謝的產(chǎn)物之一，細(xì)胞壁的木質(zhì)化是對(duì)病原體有效的物理屏障[14，24]。本研究發(fā)現(xiàn)，傘形花內(nèi)酯處理能夠提高損傷接種灰霉菌后獼猴桃果實(shí)貯藏期間類(lèi)黃酮含量和貯藏前中期總酚含量，顯著提高貯藏中后期木質(zhì)素的含量。表明傘形花內(nèi)酯處理能夠提高這些抗性物質(zhì)的含量，進(jìn)而增強(qiáng)果實(shí)的抗病性。

4 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)，外源傘形花內(nèi)酯能有效抑制灰霉菌孢子萌發(fā)和生長(zhǎng)。傘形花內(nèi)酯處理顯著提高了損傷接種灰霉菌獼猴桃果實(shí)中CHT、GLU、PAL、4CL、POD 和PPO 等防御相關(guān)酶活性，以及抗性物質(zhì)總酚、類(lèi)黃酮和木質(zhì)素含量，從而誘導(dǎo)獼猴桃采后果實(shí)的抗病性。適宜濃度的傘形花內(nèi)酯處理能夠有效抑制獼猴桃灰霉病的發(fā)展，從而降低獼猴桃果實(shí)采后腐爛率，提高果實(shí)的貯藏性。