金志民，賈修歧，楊新宇，蘇 航

（牡丹江師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，黑龍江 牡丹江157011）

遠東刺猬（Erinaceus amurensisSchrenk）又稱東北刺猬，屬猬形目猬科刺猬屬，是一種晝伏夜出的小型哺乳動物［1］。由于其具有較高的經(jīng)濟價值和醫(yī)學(xué)價值，因此被廣泛飼養(yǎng)［2-4］。血清蛋白成分及其含量變化與機體健康、營養(yǎng)和疾病等狀況有著密切關(guān)系，對于建立種質(zhì)標準、遺傳育種和經(jīng)濟動物養(yǎng)殖等方面具有重要意義［5］。

有關(guān)遠東刺猬的研究已有許多［6-12］，但遠東刺猬血清蛋白的研究還未見相關(guān)報道，本試驗通過聚丙烯酰胺凝膠電泳研究遠東刺猬受孕與非受孕個體血清蛋白的譜帶分布，討論其分布特點以及比較酶帶的表達強度，為遠東刺猬的養(yǎng)殖及深入研究提供基礎(chǔ)生化數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2019年4月采用籠捕法捕自黑龍江省牡丹江市三道關(guān)林區(qū)健康成年雌性個體4只，其中懷孕個體2只，非懷孕個體2只。

1.2 方法

1.2.1 血清的制備采用無傷害采血法從遠東刺猬四肢靜脈采血，室內(nèi)靜置20 min后于4℃、4 000 r/min離心15 min，上清液為血清。采血后對采血處進行消毒并將其放歸至捕捉地。

1.2.2 電泳采用Tris、HCl、TEMED、過硫酸銨、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、甘氨酸、核黃素（天津市大茂化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)）配制聚丙烯酰胺凝膠，用移液槍（Eppendorf）將電泳上樣液依次加入到點樣孔中，點樣順序為：非懷孕（A1、A2、A3、A4）、懷孕（B1、B2、B3、B4），點樣量為3～5μL。使用DYCZ-24A型雙垂直電泳槽（北京市六一儀器廠生產(chǎn)）進行聚丙烯酰胺垂直板電泳（起始電流10 mA，待點樣孔中的樣品進入到凝膠中后將電流調(diào)至40 mA穩(wěn)流電泳4 h）。

1.2.3 染色電泳結(jié)束后，進行血清蛋白染色。染色液：0.05 g考馬斯亮藍R250、20 g磺基水楊酸充分混勻后定容至100 mL過濾備用。

1.2.4 洗脫將染色后的凝膠放入裝有濃度為7%的冰醋酸洗脫液中進行洗脫，待凝膠中出現(xiàn)透明背景下清晰的藍色條帶后終止洗脫。使用凝膠成像系統(tǒng)（美國Alpha公司，AlphaImager Mini）對洗脫后的凝膠進行掃描拍照，并計算相對遷移率，即溴酚藍的遷移距離與蛋白質(zhì)條帶遷移距離的比值［13］。比較譜帶遷移率、數(shù)量和譜帶染色的深淺度來判斷酶的分布、表達強度和活性［14，15］。

2 結(jié)果與分析

由圖1、表1可見，遠東刺猬懷孕與非懷孕個體共分離出遷移率為0.005～0.590的27條電泳譜帶，其中非懷孕遠東刺猬血清蛋白分出20條譜帶，懷孕遠東刺猬血清蛋白分離出25條譜帶。按血清蛋白電泳譜帶的分布特點將電泳圖譜分為2個區(qū)域：Ⅰ區(qū)：1～5號電泳譜帶；Ⅱ區(qū)：6～27號電泳譜帶。

圖1 懷孕與非懷孕遠東刺猬血清蛋白帶電泳圖譜

在Ⅰ區(qū)：1～5號電泳譜帶為懷孕與非懷孕個體共有帶，其活性比較為：1＞2＞4=5＞3；懷孕與非懷孕間血清蛋白活性一致。

在Ⅱ區(qū)：6、13、14、16、19、21、27號譜帶是懷孕遠東刺猬特有譜帶，9、23號譜帶是非懷孕遠東刺猬特有帶，其余為共有帶。其中，7、8、11、25號電泳譜帶是懷孕與非懷孕共有帶，其活性比較為：11＞7＞8＞25；懷孕與非懷孕間血清蛋白活性一致；10、12、17、18、20、22號帶為懷孕與非懷孕共有帶，其活性比較為：10＞12＞17＞22＞20＞18，懷孕與非懷孕間血清蛋白活性表現(xiàn)為：懷孕＞非懷孕；24、25、26號譜帶為懷孕與非懷孕共有帶，其活性比較為：24＞25＞26，懷孕與非懷孕間血清蛋白活性表現(xiàn)為：懷孕＜非懷孕。

表1 懷孕與非懷孕遠東刺猬血清蛋白譜帶分布和遷移率

3 小結(jié)與討論

遠東刺猬懷孕與非懷孕個體間血清蛋白的譜帶數(shù)量和分布相似，但活力和特有帶的分布存在著明顯的差別。與個體之間的體貌特征、生理生化指標、激素的分泌水平密切相關(guān)。血清蛋白中的球蛋白與生物體免疫功能呈正相關(guān)［5］。遠東刺猬懷孕個體的機體免疫力較非懷孕個體強。同時根據(jù)血清蛋白特有帶的分布可以判斷其是否懷孕，為遠東刺猬的養(yǎng)殖和深入研究提供基礎(chǔ)的生化數(shù)據(jù)。