陳寶輝

(江蘇省宿遷市鐘吾醫(yī)院 檢驗科，江蘇 宿遷 223800)

0 引言

輸血治療是一項重要的臨床治療手段，在病員救治的過程中發(fā)揮著不可替代的作用，隨著醫(yī)療水平的發(fā)展，輸血安全已日益受到關(guān)注。臨床輸血前需要做ABO、RHD 血型復(fù)檢及交叉配血試驗，以保證供血者和受血者的血型一致且供受雙方紅細胞和血漿之間不存在抗原抗體反應(yīng)，保證臨床輸血安全、有效。但實際工作中，往往會發(fā)生交叉配血不相合的情況，即主側(cè)或次側(cè)出現(xiàn)紅細胞凝集。今對1 例用凝聚胺法及生理鹽水法交叉配血時主側(cè)不合但經(jīng)微柱凝膠抗人球蛋白卡式法配血主次側(cè)均相合的案例進行分析并探討預(yù)防措施。

1 臨床資料

患者蘇某謀，男，76 歲，因股骨粗隆間骨折入住我院骨科，住院號1851420. 患者于2019 年11 月15 日手術(shù)，術(shù)前備懸浮少白細胞的紅細胞4U，血型正定型為B 型RHD 陽性，反定型患者血清與Ac、Bc、Oc 的反應(yīng)分別為4+、2+、2+，考慮為不規(guī)則抗體干擾遂用O 型紅細胞對患者血清吸收后再次檢測，正反定型一致，為B 型RHD 陽性。給以同型血進行交叉配血時主側(cè)凝集(2+)，次側(cè)陰性；凝聚胺法、鹽水法兩種方主側(cè)均凝集，但微柱凝膠抗人球蛋白卡式法主次側(cè)均不凝集，患者無輸血史，否認其它重大疾病及傳染病，適齡婚配，子女健全，為查明原因遂做進一步檢查。

2 材料和方法

血清學檢查試劑與方法：血型試劑抗A、抗B 及A、B 標準抗原反定型紅細胞、不規(guī)則抗體檢測試劑(人血紅細胞)、微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡均由長春博訊生物技術(shù)有限責任公司生產(chǎn)；凝聚胺試劑由珠海(合資)貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；抗D、抗C、抗c、抗E、抗e、抗M、抗N、抗P、抗H 及普細胞由上海血液生物醫(yī)藥責任有限公司生產(chǎn)；MN 型的B 和O 型紅細胞由本實驗室篩選獻血者紅細胞自制，以上所有試劑均在有效期內(nèi)。血清學離心機為長春博研科學儀器有限責任公司生產(chǎn)。血型鑒定、唾液試驗、不規(guī)則抗體篩查、抗體效價測定、吸收與放散試驗等血清學技術(shù)均按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第4 版[1]118--138 頁及試劑說明書操作。

3 血清學檢查結(jié)果

3.1用患者血清分別在生理鹽水介質(zhì)及微柱凝膠抗人球蛋白卡上做抗體篩查試驗，凝集強度見表1，生理鹽水介質(zhì)中患者血清與OI、OII、OIII 不規(guī)則抗體篩查檢測試劑(人血紅細胞)均呈陽性反應(yīng)，在微柱凝膠抗人球蛋白卡中患者血清與OI、OII、OIII 不規(guī)則抗體篩查檢測試劑(人血紅細胞)均成陰性反應(yīng)。

表1 患者血清在生理鹽水介質(zhì)及微柱凝膠抗人球蛋白卡上抗篩試驗?zāi)瘡姸?/p>

3.2患者紅細胞與標準抗血清及患者血清與標準紅細胞在不同溫度下生理鹽水介質(zhì)中的反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)果及凝集強度見表2，患者血型為B,M,CCDEe，自身細胞對照試驗在不同溫度下均成陰性反應(yīng)。

3.3唾液中A、B、H 物質(zhì)測定 未測出A 物質(zhì)，測得B 及H 物質(zhì)效價分別為32 和16。

3.4患者血清在鹽水介質(zhì)中與1,3,4,5,6,8,9,10 號普細胞均成陽性反應(yīng)，與2,7 號普細胞呈陰性反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)格局見表3，提示存在抗N。

3.5為進一步證實患者血清中抗N 的存在，將患者血清與不同的MN 的B 和O 型供血者紅細胞在生理鹽水介質(zhì)中不同溫度下進行反應(yīng)，4℃和室溫時患者血清與含N 抗原紅細胞呈不同程度的凝集反應(yīng)，37℃呈陰性反應(yīng)，結(jié)果見表4，患者血清經(jīng)稀釋后室溫測得抗N 效價1:32。為了確定抗體性質(zhì)，將患者血清用2-me 液處理60min 后與N 抗原陽性紅細胞反應(yīng)，結(jié)果無論在鹽水介質(zhì)還是在微柱凝膠抗人球蛋白卡中都不凝集，說明該抗體屬于IgM 類抗體，而非IgG 抗體。

表2 患者血型鑒定及自身細胞對照實驗結(jié)果

表3 普細胞反應(yīng)格局表

表4 患者血清與不同的MN 的B 和O 型供血者紅細胞在生理鹽水介質(zhì)中不同溫度下的反應(yīng)凝集強度

3.6 吸收放散實驗

患者血清用ON 細胞經(jīng)4℃吸收1h 后，在56℃對ON 細胞進行放散，放散液可被ON 細胞凝集，吸收后的血清不再與ON細胞發(fā)生凝集，進一步證實患者血清中含N 抗體。

4 討論

通過以上實驗可知該患者血型為B,M,CCDEe，直抗陰性說明此抗體為同種抗體而非自身抗體。血清中除有抗-A 抗體外還含有抗-N，稀釋后室溫測得抗N 效價1:32，為確定此抗體性質(zhì)，患者血清經(jīng)2-me 液37℃處理60min 后，與N 抗原陽性紅細胞在鹽水介質(zhì)和微柱凝膠抗人球蛋白卡中都不凝集，說明該抗體屬于IgM 類抗體，而非IgG 抗體，從反應(yīng)情況來看，其血清中抗N 在4℃和室溫反應(yīng)活性強，在37℃活性消失。本次配血所用的微柱凝膠抗人球蛋白卡式試驗需37℃孵育15min，N 抗體為冷抗體，溫度升高活性減弱，所以本次抗人球蛋白卡式法配血呈陰性反應(yīng)。鹽水配血法和凝聚胺配血法沒有37℃孵育過程加之寒冷季節(jié)室溫較低故呈陽性反應(yīng)。

在MNS 血型系統(tǒng)中，血型抗體抗N 較抗M 少見，且多為IgM 型，可引起血型鑒定困難和交叉配血不合[2]。雖然抗N 活性在37℃時活性較小，但在臨床輸血過程中由于輸血速度過快、輸血量過大、環(huán)境溫度較低、術(shù)中麻醉等原因可導(dǎo)致患者體溫或局部體溫下降，從而使抗N 活性升高，可引起嚴重的輸血反應(yīng)。發(fā)生冷抗體反應(yīng)的溫度范圍對于臨床癥狀的出現(xiàn)往往比冷凝集的程度更重要。本例患者男性，無輸血史，子女健全，且為IgM 類抗體，考慮其血清中抗體應(yīng)為非紅細胞刺激天然產(chǎn)生的，篩選N 抗原陰性的獻血者紅細胞用生理鹽水法、凝聚胺法及微柱凝膠抗人球蛋白卡式法交叉配血主次側(cè)均無凝集，給予該患者輸注，注意保暖，輸血過程密切觀察沒有發(fā)生輸血不良反應(yīng)。

綜上，在血型鑒定及交叉配血過程中，當正反定型結(jié)果與Landsteriner 規(guī)則不符時，應(yīng)進一步進行血清學檢驗，應(yīng)從不同角度思考，選擇有價值的鑒別試驗如復(fù)核血型、吸收試驗、放散試驗等多方面地排除、鑒定，也可采用分泌型測定、蛋白電泳分析、血型家系遺傳學調(diào)查等[3]。血型鑒定單做正定型是不安全、不完美的，一定要加做反定型，且做反定型時一定要加做 O細胞，O 細胞對正確的血型鑒定 、發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體及稀有血型等方面都有重要意義[4]。交叉配血主側(cè)不合時，確認血型無誤前提下要用多種方法進行配血如生理鹽水法、抗人球蛋白法、凝聚胺法、酶法等，注意不同溫度的反應(yīng)強度，進行凝集強度比較，辨別冷抗體和溫抗體，以便發(fā)現(xiàn)更多的不完全抗體，分析抗體性質(zhì)，尋找解決對策，確保輸血治療的安全性和有效性，提升救治水平。輸血工作任重而道遠，嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L，認真求實的精神才是尊重生命敬畏生命的體現(xiàn)。