彭 舒，李 麗，張婷渟，周秀秀，楊 芩

（凱里學(xué)院大健康學(xué)院，貴州 556000）

鈣（Ca）被認(rèn)為是維持果實(shí)質(zhì)量和延長果實(shí)貯藏期的關(guān)鍵元素，鈣不僅參與細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)的構(gòu)成，而且鈣作為第二信使在信號傳導(dǎo)和生理反應(yīng)等方面具有重要調(diào)控作用[1]。果肉中鈣素的營養(yǎng)狀況關(guān)系到果實(shí)的營養(yǎng)品質(zhì)和產(chǎn)量[2]，外源噴鈣可調(diào)控部分基因表達(dá)，維持細(xì)胞的功能及促進(jìn)生長發(fā)育[3]。大量研究表明，適當(dāng)?shù)夭汕笆┾}可改善果實(shí)品質(zhì)，提高果實(shí)產(chǎn)量，延長果實(shí)貯藏期[4-6]。其中，黃艷等研究發(fā)現(xiàn)，外源噴施適當(dāng)濃度的氨基酸鈣或硝酸鈣，均可以提高葡萄果實(shí)硬度、總糖含量，降低可滴定酸含量[4]。Kafle 等用氯化鈣和硝酸鈣對甜櫻桃進(jìn)行采前噴鈣處理，發(fā)現(xiàn)適宜濃度的鈣噴施甜櫻桃果實(shí)和葉面，可有效減少甜櫻桃的裂果率，而且不會影響果實(shí)品質(zhì)[5]。周君等研究表明，噴施氨基酸鈣能夠改善‘黃金梨’果實(shí)品質(zhì)[6]。

藍(lán)莓（Vacciniumspp.）屬于杜鵑花科（Ericaceae）越橘屬（Vaccinium）多年生落葉或常綠灌木或小灌木樹種。藍(lán)莓果實(shí)酸甜適口，含有大量的抗氧化劑如酚類物質(zhì)、維生素及具有高抗氧化活性的黃酮類化合物，尤其是花青素等，具有較高的營養(yǎng)價值，深受人們喜愛[7]。王瑞等[8]研究發(fā)現(xiàn)，藍(lán)莓在生長期內(nèi)噴施有機(jī)鈣可提高果實(shí)鈣含量，抑制貯藏期間果實(shí)呼吸強(qiáng)度，提升可溶性果膠含量，降低多聚半乳糖醛酸酶的活性及乙烯釋放速率，還可抑制貯藏期間藍(lán)莓果實(shí)總酚、花色苷等的降低，從而延長藍(lán)莓貯藏期，并改善貯藏品質(zhì)。噴施140、175 mg/L 的糖醋螯合鈣能顯著提高藍(lán)莓產(chǎn)量、增加單果重和果實(shí)硬度，能顯著增加果實(shí)可溶性糖和可溶性固形物含量，可顯著降低可滴定酸含量，而且有機(jī)鈣比無機(jī)鈣更有利于提高藍(lán)莓株產(chǎn)、果實(shí)品質(zhì)及貯藏性[9]。

雖然近幾年有一些關(guān)于采前噴鈣對藍(lán)莓果實(shí)品質(zhì)及貯藏性的試驗(yàn)研究，但關(guān)于鈣對藍(lán)莓果實(shí)幼果期至成熟期各品質(zhì)動態(tài)變化的研究報道較少。本研究通過對藍(lán)莓樹冠噴施不同濃度醋酸鈣，研究其對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中花色苷、總酚、類黃酮及糖酸含量變化的影響，對調(diào)節(jié)藍(lán)莓生長發(fā)育、提高果實(shí)品質(zhì)具有重要的理論價值和實(shí)踐意義，可為藍(lán)莓高效優(yōu)產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為種植在凱里學(xué)院卓越農(nóng)林人才培養(yǎng)實(shí)訓(xùn)基地的生長健壯、長勢基本一致且無病蟲害的7 年生兔眼藍(lán)莓品種‘粉藍(lán)’。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

外源鈣樹冠噴施試驗(yàn)采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，外源施鈣方式為樹冠噴施醋酸鈣（分析純含量≥98%）溶液，施鈣量設(shè)3 個濃度，分別為0.3%、0.6%和1.0%。盛花后10 d 第1 次噴施，每隔10 d 再噴施1次醋酸鈣溶液直至果實(shí)成熟，每個處理重復(fù)3 次。所有處理以等量的蒸餾水配制不同濃度醋酸鈣溶液進(jìn)行噴施，以噴施等量蒸餾水代替醋酸鈣溶液為對照。

1.3 樣品采集與處理

每次噴施醋酸鈣溶液10 d 后，在下次噴施前采樣1 次，直至第1 批果實(shí)成熟。每個處理采集藍(lán)莓漿果不低于300 g，采后立即用液氮速凍，隨后樣品帶回實(shí)驗(yàn)室制成勻漿，于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 測定指標(biāo)及方法

采用蒽酮-硫酸比色法測定可溶性糖含量[10]，以百分含量計(jì)；采用酸堿中和滴定法測定可滴定酸含量[11]：0.1 mol/L NaOH 標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定，以百分含量計(jì)；糖酸比通過可溶性糖和可滴定酸含量的比值計(jì)算而得；采用pH 示差法測定花色苷含量，以每克鮮樣中所含花青素-3-葡萄糖苷量（mg）表示[12]；采用普魯士蘭法測定總酚含量，以每克鮮樣中所含單寧酸（mg）表示[13]；類黃酮參照Wolfe 等[14]的方法測定，即硝酸鋁比色法稍作修改，以每克鮮樣中所含兒茶素（mg）表示。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2010 和Origin Pro 8 軟件進(jìn)行整理并繪制相關(guān)圖表，采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行差異顯著性和相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 噴施醋酸鈣對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中可溶性糖含量的影響

由圖1 可知，雖然噴施醋酸鈣并未改變藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育期間可溶性糖含量的變化趨勢，但噴施不同濃度醋酸鈣后不同程度地增加了藍(lán)莓果實(shí)的可溶性糖含量。在盛花后20、30、40、50、60、80 d，0.6%醋酸鈣處理后的果實(shí)可溶性糖含量均顯著（P＜0.05）高于對照及其他濃度醋酸鈣處理，與對照相比分別增加了89.66%、50.44%、38.10%、37.50%、61.44%、77.43%。在盛花后30、50、60 d，1.0%醋酸鈣處理后的藍(lán)莓果實(shí)可溶性糖含量顯著高于對照，與對照相比分別增加了23.79%、21.52%、19.68%。在盛花后80 d，對照及各醋酸鈣處理藍(lán)莓果實(shí)可溶性糖含量迅速增加，其中0.6%醋酸鈣處理的藍(lán)莓果實(shí)可溶性糖含量最高，達(dá)6.68%。

綜上所述，在藍(lán)莓盛花后10 d 開始噴施醋酸鈣溶液可以促進(jìn)藍(lán)莓果實(shí)可溶性糖的積累，其中噴施0.6%醋酸鈣能較好地提高藍(lán)莓果實(shí)的可溶性糖含量。

圖1 不同濃度醋酸鈣處理對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中可溶性糖含量的影響

2.2 噴施醋酸鈣對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中可滴定酸含量的影響

由圖2 可知，在盛花后20～80 d，各醋酸鈣處理藍(lán)莓果實(shí)的可滴定酸含量均低于對照，但噴鈣處理并未改變藍(lán)莓果實(shí)可滴定酸含量的動態(tài)變化趨勢。盛花后20～50 d，藍(lán)莓果實(shí)可滴定酸含量隨果實(shí)的發(fā)育而增加；但盛花后50～80 d，藍(lán)莓果實(shí)可滴定酸含量不斷降低；其中盛花后50 d 可滴定酸含量達(dá)最高，對照藍(lán)莓果實(shí)可滴定酸含量顯著高于各醋酸鈣處理，分別比0.3%、0.6%、1.0%醋酸鈣處理提高了32.78%、46.28%、22.87%。在盛花后80 d，0.3%、0.6%、1.0%醋酸鈣處理較對照可滴定酸含量分別降低了33.06%、50.00%、16.43%，其中0.6%醋酸鈣處理的藍(lán)莓果實(shí)中可滴定酸含量最低，為0.69%，顯著低于對照和0.3%、1.0%醋酸鈣處理。

綜上，在藍(lán)莓盛花后10 d 開始噴施醋酸鈣可降解藍(lán)莓果實(shí)的可滴定酸，降低可滴定酸含量，噴施0.6%醋酸鈣可顯著促進(jìn)成熟期藍(lán)莓果實(shí)中可滴定酸的降解。

圖2 不同濃度醋酸鈣處理對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中可滴定酸含量的影響

2.3 噴施醋酸鈣對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中糖酸比的影響

從圖3 可以看出，對照與各醋酸鈣處理的藍(lán)莓果實(shí)糖酸比均隨著果實(shí)的成熟而逐漸上升，并且醋酸鈣處理后不同程度地提升了藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中的糖酸比。在盛花后20～80 d，0.6%醋酸鈣處理后的藍(lán)莓果實(shí)糖酸比顯著高于對照，較對照分別增加了90.64%、89.28%、66.03%、110.92%、95.01%、49.07%、255.06%。在盛花后80 d，0.3%、0.6%、1.0%醋酸鈣處理較對照糖酸比分別增加了68.98%、255.06%、39.72%，其中0.6%醋酸鈣處理果實(shí)糖酸比達(dá)到最大，為9.65。

圖3 不同濃度醋酸鈣處理對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中糖酸比的影響

2.4 噴施醋酸鈣對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中花色苷含量的影響

如圖4 所示，外源噴施醋酸鈣未改變藍(lán)莓果實(shí)花色苷含量的動態(tài)變化，即隨藍(lán)莓果實(shí)的發(fā)育花色苷含量不斷增加，但噴施醋酸鈣在盛花后20～80 d不同程度地增加了花色苷含量。在盛花后30、50、60、80 d，各醋酸鈣處理藍(lán)莓果實(shí)中花色苷含量均顯著高于對照；0.6%醋酸鈣處理在盛花后20～80 d果實(shí)中花色苷含量均顯著高于對照。在盛花后80 d，0.3%、0.6%、1.0%醋酸鈣處理果實(shí)花色苷含量較對照分別提高了80.05%、133.65%、100.90%，其中0.6%醋酸鈣處理后藍(lán)莓果實(shí)中花色苷含量最高，達(dá)7.58 mg/g。藍(lán)莓果實(shí)花色苷含量從盛花后70 d 開始迅速增加，在盛花后80 d，對照、0.3%醋酸鈣、0.6%醋酸鈣和1.0%醋酸鈣處理的果實(shí)花色苷含量比盛花后70 d 分別增加14、23、23、23 倍。

綜上，在藍(lán)莓盛花后10 d 開始噴施醋酸鈣可促進(jìn)藍(lán)莓果實(shí)中花色苷的積累，其中噴施0.6%醋酸鈣溶液效果更佳。

圖4 不同濃度醋酸鈣處理對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中花色苷含量的影響

2.5 噴施醋酸鈣對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中總酚含量的影響

由圖5 可知，隨著藍(lán)莓果實(shí)的生長發(fā)育，果實(shí)中總酚含量總體呈下降趨勢，在盛花后50 d 降至最低，稍后略有上升。雖然外源噴施醋酸鈣并未改變藍(lán)莓果實(shí)總酚含量的動態(tài)變化趨勢，但可增加果實(shí)總酚含量，總酚含量下降趨勢明顯低于對照。在盛花后50～80 d，0.3%、0.6%醋酸鈣處理藍(lán)莓果實(shí)的總酚含量均顯著高于對照和1.0%醋酸鈣處理，其中0.6%醋酸鈣處理后的藍(lán)莓果實(shí)在盛花后50～80 d的總酚含量均最高，與對照相比，在盛花后20～80 d，0.6%醋酸鈣處理藍(lán)莓果實(shí)的總酚含量分別增加了1.83%、4.34%、1.03%、41.50%、42.94%、30.19%、32.51%。在盛花后80 d，與對照相比，0.3%、0.6%、1.0%醋酸鈣處理后藍(lán)莓果實(shí)總酚含量增加了21.03%、32.51%和6.36%。

綜上，在藍(lán)莓盛花后10 d 開始噴施醋酸鈣可緩解藍(lán)莓果實(shí)中總酚含量的減少，其中噴施0.6%醋酸鈣溶液效果更佳。

圖5 不同濃度醋酸鈣處理對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中總酚含量的影響

2.6 噴施醋酸鈣對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中類黃酮含量的影響

由圖6 可知，隨著藍(lán)莓果實(shí)的發(fā)育和成熟，對照和醋酸鈣處理的藍(lán)莓果實(shí)類黃酮含量先下降后上升，在盛花后50 d 降至最低。盛花后20～50 d，醋酸鈣處理藍(lán)莓果實(shí)類黃酮含量均低于對照，但在盛花后60～70 d，醋酸鈣處理藍(lán)莓果實(shí)類黃酮含量均高于對照，其中在盛花后40～70 d 醋酸鈣處理果實(shí)類黃酮含量與對照有顯著差異。在盛花后80 d，對照、0.3%醋酸鈣、0.6%醋酸鈣和1.0%醋酸鈣處理的類黃酮含量分別是55.68、53.03、70.09、65.22 mg/g，與盛花后50 d 相比，上升率由大到小是0.6%醋酸鈣（157.56%）＞1.0%醋酸鈣（155.68%）＞對照（86.87%）＞0.3%醋酸鈣（78.69%）；與盛花后20 d 相比，類黃酮含量對照下降了8.63%，0.3%醋酸鈣下降了1.45%，而0.6%、1.0%醋酸鈣處理分別上升了33.12%和27.86%。

綜上，0.6%醋酸鈣和1.0%醋酸鈣處理可以提高藍(lán)莓果實(shí)類黃酮含量。

圖6 不同濃度醋酸鈣處理對藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中類黃酮含量的影響

2.7 醋酸鈣處理下藍(lán)莓果實(shí)各指標(biāo)的相關(guān)性分析

由表1 可知，可溶性糖含量與花色苷含量、糖酸比均呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01）。各醋酸鈣處理與對照的可溶性糖含量和花色苷含量的相關(guān)性由大到小是0.6%醋酸鈣（r=0.96）＞對照（r=0.89）＞0.3%醋酸鈣（r=0.88）＞1.0%醋酸鈣（r=0.87），可溶性糖含量和糖酸比的相關(guān)性由大到小是0.6%醋酸鈣（r=0.98）＞對照（r=0.97）＞0.3%醋酸鈣（r=0.95）=1.0%醋酸鈣（r=0.95）。0.3%醋酸鈣處理下，可滴定酸含量與花色苷含量、可溶性糖含量均呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05）；0.6%醋酸鈣處理下，可滴定酸含量與花色苷含量、可溶性糖含量均呈極顯著負(fù)相關(guān)；1.0%醋酸鈣處理下，可滴定酸含量與花色苷含量呈顯著負(fù)相關(guān)，與可溶性糖呈負(fù)相關(guān)但不顯著；而對照的可滴定酸含量與花色苷含量、可溶性糖含量均呈負(fù)相關(guān)，但不顯著。糖酸比與花色苷含量呈極顯著正相關(guān)，其相關(guān)性由大到小是0.6%醋酸鈣（r=1.00）＞0.3%醋酸鈣（r=0.98）=1.0%醋酸鈣（r=0.98）＞對照（r=0.97）；糖酸比與可滴定酸含量呈不同程度的負(fù)相關(guān)，相關(guān)性由大到小是0.6%醋酸鈣（r=-0.91）＞0.3%醋酸鈣（r=-0.84）＞1%醋酸鈣（r=-0.74）＞對照（r=-0.62），其中0.6%、0.3%醋酸鈣處理均呈極顯著負(fù)相關(guān)。

表1 醋酸鈣處理下藍(lán)莓果實(shí)各指標(biāo)的相關(guān)性

3 討論與結(jié)論

糖和酸不僅是藍(lán)莓的重要營養(yǎng)成分，其比例也是決定藍(lán)莓果實(shí)風(fēng)味的關(guān)鍵因素。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對照相比，噴施濃度為0.6%的外源醋酸鈣可顯著增加藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中的可溶性糖含量和糖酸比，降低可滴定酸含量，說明適宜濃度的醋酸鈣可促進(jìn)藍(lán)莓果實(shí)總糖的合成，減少總酸的含量。這與前人在藍(lán)莓[8-9]、葡萄[4]、梨[6,15]等的研究結(jié)果相一致?？赡苁沁m當(dāng)?shù)拟}可提高果實(shí)成熟發(fā)育過程中的Rubisco 酶和PEP 羧化酶的活性，增強(qiáng)光合作用，促進(jìn)光合產(chǎn)物的合成與積累，從而增加了植株體內(nèi)糖含量[16-17]；而鈣可與有機(jī)酸結(jié)合為不溶性的鈣鹽，降低了有機(jī)酸的含量[18]，促進(jìn)糖酸比的增加。

果實(shí)營養(yǎng)品質(zhì)是確保果實(shí)經(jīng)濟(jì)價值和加工品質(zhì)的重要因素[19]，花色苷、總酚及類黃酮是藍(lán)莓重要的營養(yǎng)成分，具有抗氧化、延緩衰老、提高免疫力、清除自由基等功能，是藍(lán)莓品質(zhì)和營養(yǎng)保健價值的重要評價指標(biāo)[20]。而果實(shí)中鈣含量的多少是決定果實(shí)品質(zhì)的重要因素之一[21]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，噴施外源醋酸鈣與對照相比可顯著增加藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育過程中的花色苷含量，其中噴施0.6%醋酸鈣溶液效果最佳。這與趙玉華[22]在葡萄、Xu 等[23]在草莓及王瑞等[8]在藍(lán)莓上的研究結(jié)果相類似?？赡苁窃趪娛┾}后提高了FVF3H1和FVDFR2等花青素結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)水平[23]，噴施適宜濃度的鈣能夠促使果實(shí)的著色、保護(hù)果皮結(jié)構(gòu)、促進(jìn)花色苷含量的積累，但鈣濃度過高會破壞果皮結(jié)構(gòu)，減輕花青素的積累能力[22]。本研究結(jié)果顯示，噴施醋酸鈣能顯著提高總酚含量和藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育后期的類黃酮含量，這與前人在樹莓[24]和桃[25]上的研究相似，可能鈣可誘導(dǎo)次生代謝產(chǎn)物的生成。

本研究發(fā)現(xiàn)，可溶性糖含量和花色苷含量呈極顯著正相關(guān)，醋酸鈣處理下可溶性糖和花色苷含量均高于對照，可能是噴施適宜濃度的醋酸鈣可促進(jìn)可溶性糖和花色苷的合成，這與相關(guān)性分析中0.6%醋酸鈣處理的可溶性糖含量與花色苷含量的正相關(guān)性高于對照相一致。而花色苷是由花青素和糖通過糖苷鍵連接構(gòu)成，糖可以作為原料來促進(jìn)花色苷的合成，說明能提高細(xì)胞內(nèi)糖含量的因素都可以不同程度地促進(jìn)果實(shí)花色苷的合成。

綜合試驗(yàn)結(jié)果，在藍(lán)莓盛花后10 d 開始噴施醋酸鈣，可提高藍(lán)莓果實(shí)花色苷、可溶性糖、總酚的含量，同時提高果實(shí)發(fā)育后期的類黃酮含量，降低可滴定酸含量，提升糖酸比，改善果實(shí)品質(zhì)，其中噴施0.6%醋酸鈣效果最佳。這可能是因?yàn)榇姿徕}屬于小分子有機(jī)鈣，有利于果實(shí)對鈣的吸收和運(yùn)輸，幫助果實(shí)養(yǎng)分含量的提高，有利于果實(shí)生長發(fā)育，從而有效提高藍(lán)莓果實(shí)品質(zhì)。