秦國棟 譚子超 周 東 孫 強 李金寶 王述柏*

(1.青島農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，青島266000；2.山東民和牧業(yè)股份有限公司，蓬萊265600；3.青島市即墨區(qū)畜牧發(fā)展服務中心，青島266000；4.山東龍昌動物保健品有限公司，德州253000)

近年來，有關植物精油在動物生產(chǎn)中的研究和應用報道日漸增多。植物精油是一類來源于植物的花、葉、莖、根或果實的次生代謝產(chǎn)物，分子量較小，在動物體內(nèi)吸收代謝快、無毒無殘留，具有促進動物生長、消炎殺菌及抗氧化等功效[1-4]，有望成為促生長類抗生素替代品，是近年來國內(nèi)外的研究熱點。植物精油因其來源不同且成分復雜，所以功能各異，已知的植物精油有3 000多種，主要成分包括萜烯類、芳香族、脂肪族和含氮含硫類等化合物[4]。桉樹精油由桉樹枝葉通過蒸餾法萃取而得，桉樹精油的大量生產(chǎn)始于20世紀60年代，用途廣泛[5]。桉樹精油主要成分為1,8-桉樹腦、蘆丁等黃酮類物質(zhì)，臨床證明其具有抗菌消炎的功效[6]，有報道桉樹精油可以通過消除羥基自由基從而改善炎癥癥狀[7]。有關桉樹精油在我國畜禽養(yǎng)殖領域的應用研究起步較晚，目前報道多見于抑菌、殺蟲作用方面[5,8-9]，其他方面的研究鮮見報道。因此，本試驗旨在研究富含1,8-桉樹腦成分的桉樹精油對籠養(yǎng)白羽肉雞生長性能、免疫機能和抗氧化機能的影響，以期獲得其對肉雞的作用效果及適宜添加水平，為其推廣應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

桉樹精油產(chǎn)品由山東某公司提供，以澳大利亞濰州天然野生桉樹葉為原料提取，桉樹精油含量≥5%，其主要活性成分為1,8-桉樹腦，含量≥85%。

1.2 試驗設計

試驗選用300只1日齡愛拔益加(AA)商品白羽肉雞公雛，隨機分為6組，每組設5個重復，每個重復10只雞。Ⅰ組為對照組，飼喂基礎飼糧；Ⅱ～Ⅵ組為試驗組，分別在基礎飼糧中添加50、75、100、125和150 mg/kg的桉樹精油。試驗期42 d。

1.3 試驗飼糧和飼養(yǎng)管理

肉雞采用3層籠養(yǎng)，飼養(yǎng)期間自由采食和飲水，按照白羽肉雞常規(guī)飼養(yǎng)管理程序進行管理。按常規(guī)免疫程序進行免疫：7日齡采用滴鼻點眼方式進行雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗(La Sota株+QXL87株)免疫，14日齡采用飲水免疫方式進行雞傳染性法氏囊病活疫苗(B87株)免疫，21日齡采用滴鼻點眼方式進行雞新城疫活疫苗(La Sota株)免疫(疫苗均購于易邦生物工程有限公司)。基礎飼糧參考NY/T 33—2004《雞飼養(yǎng)標準》營養(yǎng)標準配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1.4 指標檢測與方法

1.4.1 生長性能

分別于出殼當天、試驗第21天和第42天，以重復為單位對試驗雞進行空腹稱重，準確記錄各階段采食量。計算1～21日齡、22～42日齡及1～42日齡的平均日增重、平均日采食量和料重比。

1.4.2 免疫機能

1.4.2.1 血清新城疫抗體效價

于試驗第42天，從每組每重復中隨機取1只雞，翅靜脈采血，4 000 r/min離心分離血清，-20 ℃冷凍待測。采用血凝-血凝抑制(HA-HI)試驗檢測血清新城疫抗體效價[10]。

1.4.2.2 免疫器官指數(shù)

于試驗第42天，從每組每重復中選擇體重接近其所在重復平均體重的肉雞1只，頸部放血宰殺，解剖取法氏囊和脾臟，準確稱重，計算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)(g/kg)=器官重(g)/活體重(kg)。

1.4.3 抗氧化功能指標

于試驗第21天，從每組每重復中隨機取1只雞心臟采血；于試驗第42天，從每組每重復中隨機取1只雞翅靜脈采血，血清采集方法同1.4.2.1。采用TECAN SPARK酶標儀及試劑盒測定血清總超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

對試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2016軟件進行初步處理，采用SPSS 20.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，采用Duncan氏法進行組間多重比較和差異顯著性分析，結果以“平均值±標準差”表示。P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。采用Excel 2016軟件進行桉樹精油添加水平與效應之間的二次回歸分析，計算最佳值。

2 結果與分析

2.1 不同桉樹精油添加水平對肉雞生長性能的影響

不同桉樹精油添加水平對肉雞生長性能的影響見表2，由表可知，1～21日齡，Ⅱ～Ⅴ組肉雞21日齡時平均體重顯著或極顯著高于Ⅰ組(P<0.05或P<0.01)，Ⅳ組肉雞平均日增重最高，Ⅱ～Ⅵ組肉雞平均日增重之間無顯著差異(P>0.05)，Ⅱ～Ⅵ組分別較Ⅰ組提高了14.10%(P<0.05)、19.00%(P<0.01)、19.60%(P<0.01)、14.17%(P<0.05)和10.79%(P>0.05)；各組肉雞平均日采食量無顯著差異(P>0.05)；Ⅱ～Ⅵ組料重比顯著或極顯著低于Ⅰ組(P<0.05或P<0.01)，Ⅳ組料重比最低，Ⅲ組次之，Ⅲ組、Ⅳ組極顯著低于Ⅵ組(P<0.01)。22～42日齡，Ⅳ組肉雞42日齡時平均體重顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，各組間肉雞平均日增重、平均日采食量和料重比無顯著差異(P>0.05)。1～42日齡，Ⅱ～Ⅵ組肉雞平均日增重均不同程度高于Ⅰ組，其中Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；Ⅱ～Ⅵ組料重比均低于Ⅰ組，其中Ⅳ組顯著低于Ⅰ組(P<0.05)；各組間平均日采食量無顯著差異(P>0.05)。

隨著桉樹精油添加水平的升高，1～21日齡和1～42日齡肉雞平均日增重呈現(xiàn)先上升后下降趨勢，料重比則呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，劑量效應明顯。桉樹精油添加水平與生長性能指標的二次回歸分析結果(表3)表明，飼糧中桉樹精油的添加水平分別為95.25和105.83 mg/kg時，1～21日齡和1～42日齡肉雞可獲得最高平均日增重，分別為38.00和53.87 g/d；飼糧中桉樹精油的添加水平分別為105.00和115.00 mg/kg時，1～21日齡和1～42日齡肉雞可獲得最低料重比，分別為1.24和1.55。

2.2 不同桉樹精油添加水平對肉雞免疫機能的影響

不同桉樹精油添加水平對肉雞免疫機能的影響見表4，由表可知，Ⅱ～Ⅵ組肉雞血清新城疫抗體效價、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均略高于Ⅰ組，但各組間差異不顯著(P>0.05)。

2.3 不同桉樹精油添加水平對肉雞抗氧化機能的影響

不同桉樹精油添加水平對肉雞抗氧化機能的影響見表5，由表可知，21和42日齡時，肉雞血清T-SOD活性隨桉樹精油添加水平升高均呈升高趨勢。21日齡時，Ⅴ組肉雞血清T-SOD活性顯著或極顯著高于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05或P<0.01)，Ⅵ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；42日齡時，Ⅴ組肉雞血清T-SOD活性最高，顯著或極顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組(P<0.05或P<0.01)，Ⅳ組和Ⅵ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。21和42日齡時，Ⅱ～Ⅵ組肉雞血清GSH-Px活性均不同程度高于Ⅰ組，21日齡時，Ⅱ～Ⅵ組顯著或極顯著高于Ⅰ組(P<0.05或P<0.01)；42日齡時，Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。21和42日齡時，Ⅱ～Ⅵ組肉雞血清MDA含量均不同程度低于Ⅰ組，21日齡時，Ⅳ～Ⅵ組極顯著低于Ⅰ組(P<0.01)，Ⅴ組最低，與Ⅱ組差異極顯著(P<0.01)，與Ⅲ組、Ⅳ組和Ⅵ組差異顯著(P<0.05)；42日齡時，Ⅳ組和Ⅴ組顯著或極顯著低于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05或P<0.01)，Ⅲ組和Ⅵ組顯著或極顯著低于Ⅰ組(P<0.05或P<0.01)。

表2 不同桉樹精油添加水平對肉雞生長性能的影響

表3 桉樹精油添加水平與生長性能指標的二次回歸分析結果

表4 不同桉樹精油添加水平對肉雞免疫機能的影響

隨著桉樹精油添加水平的升高，21和42日齡肉雞血清GSH-Px和T-SOD活性均呈現(xiàn)逐漸上升然后下降趨勢，血清MDA含量則呈現(xiàn)逐漸下降然后上升趨勢。桉樹精油添加水平與抗氧化機能指標的二次回歸分析結果(表6)表明，飼糧中桉樹精油的添加水平分別為151.13、205.60和188.00 mg/kg時，21日齡肉雞可獲得最高血清GSH-Px和T-SOD活性以及最低血清MDA含量；飼糧中桉樹精油的添加水平分別為93.38、139.12和158.57 mg/kg時，42日齡肉雞可獲得最高血清GSH-Px和T-SOD活性以及最低血清MDA含量。

表5 不同桉樹精油添加水平對肉雞抗氧化機能的影響

3 討 論

3.1 不同桉樹精油添加水平對肉雞生長性能的影響

據(jù)報道，天然1,8-桉樹腦存在于200余種天然植物揮發(fā)油中，是迷迭香精油、百里香精油以及桉樹精油的主要組成部分[11-13]。劉大林等[14]研究表明，飼糧添加迷迭香精油對京海黃雞生長性能無顯著影響；Mueller等[15]研究表明，飼糧添加0.15 g/kg的百里香和迷迭香精油，有提高羅斯308肉雞體增重和飼料轉(zhuǎn)化率的趨勢；朱曉磊等[16]研究表明，在飼糧中添加百里香精油可顯著提高22～42日齡麻花雞平均日增重，降低料重比；Mathlouthi等[17]研究表明，基礎飼糧中添加100 mg/kg迷迭香精油(含49.99%的1,8-桉樹腦)、50 mg/kg迷迭香和50 mg/kg牛至精油混合物、1 000 mg/kg的市售精油混合物(主要成分為肉桂醛和1,8-桉樹腦)，肉雞體增重和飼料轉(zhuǎn)化率均顯著高于無添加的對照組，作用效果等同于抗生素對照組(添加阿維霉素促生長劑)，因此認為上述精油均可以替代生長促進劑類抗生素；Nameghi等[18]也報道，飲用水中添加150 mg/L混合物精油(由百里香精油、薄荷油和桉樹精油組成)可顯著提高羅斯308肉雞的體增重和飼料轉(zhuǎn)化率；Al-Fataftah等[19]報道，與對照組相比，在AA肉雞飲用水中添加100 mg/L的桉樹提取物能夠顯著提高體增重，降低料重比；Barbour等[20]研究表明，在飲用水中添加主要成分為1,8-桉葉醇和α-蒎烯的桉樹和薄荷油的商品混合物顯著提高了肉雞的生長性能；Mashayekhi等[21]研究表明，飼糧添加0.5%的桉葉粉顯著提高了羅斯308肉雞26～42日齡和1～42日齡的體增重，降低了料重比。本試驗結果表明，飼糧添加50～125 mg/kg的桉樹精油可顯著提高1～21日齡肉雞的平均日增重，顯著降低料重比；飼糧添加100 mg/kg桉樹精油可顯著提高1～42日齡肉雞平均日增重，顯著降低料重比。本試驗所用桉樹精油的主要成分為1,8-桉樹腦，其可能是改善肉雞生長性能的主要活性物質(zhì)，其促生長作用機制有待進一步研究。

表6 桉樹精油添加水平與抗氧化機能指標的二次回歸分析結果

3.2 不同桉樹精油添加水平對肉雞免疫機能的影響

免疫器官指數(shù)是衡量肉仔雞免疫功能的指標之一[22]。朱曉磊等[23]研究表明，百里香精油提高了麻花雞的胸腺指數(shù)，但脾臟指數(shù)降低；Nameghi等[18]也報道，隨著飲水中百里香、薄荷和桉樹精油添加水平提高，羅斯308肉雞血清中新城疫抗體效價呈線性增長，并且當飲水中添加150 mg/L百里香、薄荷和桉樹精油的混合精油時顯著提高了羅斯308肉雞胸腺和法氏囊指數(shù)；Mashayekhi等[21]研究表明，飼糧添加0.5 %的桉葉粉顯著提高了羅斯308肉雞的法氏囊指數(shù)；但熊娟等[24]研究表明，植物精油(肉桂醛、香芹酚、百里香酚、丁香酚、薄荷和桉葉油)與酸化劑(主要由檸檬酸、乳酸、磷酸及富馬酸等組成)組合對肉仔雞胸腺指數(shù)以及脾臟指數(shù)均無顯著影響。本試驗結果表明，飼糧添加50～150 mg/kg桉樹精油可使肉雞脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)和血清新城疫抗體效價略高于對照組，但無統(tǒng)計意義上的差異顯著性，這可能是本試驗所用的添加水平未達到顯著提高上述免疫指標所需劑量，有關桉樹精油對其他免疫指標的影響及其作用機制有待進一步研究。

3.3 不同桉樹精油添加水平對肉雞抗氧化機能的影響

研究表明，植物精油具有較強的抗氧化作用，可以減少因氧化應激導致的細胞凋亡和損傷[22]。王蘭等[25]研究表明，使用200 mg/kg百里香酚、丁香酚和肉桂醛組成的復合精油可以顯著提高肉雞血清T-SOD活性；劉大林等[14]研究表明，150 mg/kg的迷迭香精油顯著提高了京海黃雞血清GSH-Px和T-SOD活性，顯著降低了血清MDA含量；Mueller等[15]研究表明，飼糧添加0.15 g/kg的姜油、牛至油、百里香和迷迭香精油可提高羅斯308肉雞空腸和肝臟的Trolox當量抗氧化能力，并減少二價鐵離子(Fe2+)誘導的肝臟脂質(zhì)過氧化作用；Ahlem等[26]研究表明，在小鼠飲水中添加桉葉提取物，能夠提高肝臟和腎臟中過氧化氫酶、T-SOD和GSH-Px的活性，降低脂質(zhì)過氧化水平。El-Ghorab等[27]研究表明，采用水蒸氣蒸餾法從赤桉葉中提取的精油抗氧化效果顯著，可作為天然抗氧化劑。此外，據(jù)報道，1,8-桉樹腦、樟腦和β-蒎烯等成分相互協(xié)同作用，能更好地發(fā)揮抗氧化活性[28]；五葉子精油中含有少量1,8-桉樹腦成分[29]；而五味子精油能夠上調(diào)成肌細胞核因子E2相關因子2(Nrf2)的蛋白表達，從而提高抗氧化酶活性，降低動物機體氧化損傷[30]。有關桉樹精油對肉雞抗氧化機能的影響研究報道較少。本試驗結果表明，飼糧添加一定量的桉樹精油顯著降低了肉雞血清MDA含量，顯著提高肉雞血清GSH-Px和T-SOD活性，這說明桉樹精油能夠提高肉雞抗氧化能力，其提高抗氧化酶活性的分子作用機制有待進一步研究。

4 結 論

① 在飼糧中添加適宜水平的桉樹精油可顯著提高籠養(yǎng)白羽肉雞生長性能和抗氧化機能。

② 飼糧添加50～125 mg/kg桉樹精油可顯著提高1～21日齡肉雞生長性能，飼糧添加100 mg/kg桉樹精油可使1～42日齡肉雞獲得最佳的生長性能；飼糧添加50～150 mg/kg桉樹精油可顯著提高21日齡肉雞抗氧化機能，飼糧添加75～150 mg/kg桉樹精油可顯著提高22～42日齡肉雞抗氧化機能；飼糧添加50～150 mg/kg桉樹精油有提高肉雞免疫器官指數(shù)和血清新城疫抗體效價的趨勢。

③ 結合回歸結果綜合分析，籠養(yǎng)白羽肉雞飼糧中桉樹精油適宜添加水平為105.00 mg/kg。