彭乃煥

（百色市食品藥品檢驗(yàn)所，廣西百色533000）

1 引言

愛康九亨口服液是以甘草、葛根、生姜、砂仁、白豆蔻、陳皮、赤小豆、丁香、蔗糖、蜂蜜、水為主要原料制成的保健食品，對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)功能。該保健食品的標(biāo)志性成分為甘草酸，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未建立葛根中葛根素和陳皮中橙皮苷的測(cè)定方法。本文采用HPLC法同時(shí)測(cè)定其中的葛根素和橙皮苷，為提高該保健食品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

2 材料與方法

2.1 儀器、試劑與材料

高效液相色譜儀（美國Waters公司，e2695+2998），XS205DU型電子分析天平（感量為0.01mg，瑞士METTER TOLEDO公司），明澈-D24UV型純水機(jī)（美國Millipore公司），SB-5200DTD超聲波提取器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；甲醇（色譜純，默克公司）；水為超純水；標(biāo)準(zhǔn)品葛根素和橙皮苷均購于中國食品藥品檢定研究院；愛康九亨口服液（天津和治藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)）。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備溶液的制備

精密稱取葛根素20.43mg，置20 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，作為葛根素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。精密稱取橙皮苷9.78mg，置10mL容量瓶中，加入二甲基甲酰胺2mL溶解，再加甲醇定容至刻度，作為橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

2.2.2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密量取葛根素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10 mL，橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2 mL，置20 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，搖勻，作為混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（含葛根素0.4878mg·mL-1,橙皮苷0.094mg·mL-1）。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備

分別精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL，分別置10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 樣品前處理

精密量取本品1 mL，置10 mL容量瓶中，加適量甲醇，超聲處理（功率300w，頻率50kHz）3min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取濾液作為供試液。

2.2.5 液相色譜條件

色譜柱：Waters SunFire C18（250mm×4.6mm,5μm）；柱溫：30℃；流速：1.0mL·min-1；進(jìn)樣量：10μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：283nm；流動(dòng)相：A相為甲醇，B相為0.1%磷酸溶液，梯度洗脫：0~5min A相23%；5~20min A相梯度變化到28%；20~21min A相梯度變化到40%；21~40minA相維持40%。混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試品溶液及陰性溶液色譜圖見圖1。

圖1 A：供試品； B：陰性樣品； C：混合對(duì)照品

3 結(jié)果與分析

3.1 線性關(guān)系與檢出限、定量限

取配制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，分別進(jìn)樣10μL，按“2.2.5”色譜條件下測(cè)定峰面積。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液濃度X為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，各組分的回歸方程及相關(guān)系數(shù)見表1?？梢娫摲椒ㄔ趯?shí)驗(yàn)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。以信噪比為3計(jì)算檢出限，信噪比為10計(jì)算定量限，測(cè)得每1mL樣品中葛根素、橙皮苷檢出限分別為0.013mg、0.0074mg， 定 量 限 分 別 為0.04mg、0.024mg。

3.2 精密度

取標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液(濃度水平3)，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果測(cè)得葛根素和橙皮苷濃度的平均值為49.06μg·mL-1，9.427μg·mL-1；RSD分別為0.48%，0.65%。

表1 各組分線性關(guān)系測(cè)定結(jié)果

3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品，平行試驗(yàn)6份，結(jié)果每1 mL含葛根素和橙皮苷分別為1.077mg和0.238mg；RSD分別為0.92%，0.64%。表明本方法重現(xiàn)性良好。

3.4 干擾試驗(yàn)

按處方自制缺葛根和陳皮的陰性樣品，照“2.2.4”制成陰性樣品溶液。按“2.2.5”色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果陰性樣品溶液在葛根素和橙皮苷相同保留時(shí)間附近無雜質(zhì)峰干擾。

3.5 方法回收率

精密量取樣品（批號(hào)為200101）0.50mL，共9份，每3份分別精密加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL，依法測(cè)定，結(jié)果葛根素平均回收率為96.22%，RSD為1.0%；橙皮苷平均回收率為98.01%，RSD為1.9%。

3.6 樣品測(cè)定

取3批樣品，每批樣品平行測(cè)定2份，結(jié)果葛根素的含量為：1.75 mg·mL-1、1.63 mg·mL-1、1.96 mg·mL-1； 橙 皮 苷 的 含 量 為 ：0.236 mg·mL-1、0.258mg·mL-1、0.232 mg·mL-1。

4 討論

4.1 流動(dòng)相的選擇

由于該口服液藥物組成較多，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在葛根素和橙皮苷主峰附近均干擾峰存在，通過參考文獻(xiàn)[1~5]分別考察乙腈－0.1%磷酸溶液，甲醇－0.1%磷酸溶液，甲醇－水等三種流動(dòng)相組成對(duì)葛根素和橙皮苷的洗脫效果，結(jié)果以甲醇－0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相時(shí)，兩個(gè)主峰峰形好，與其他干擾峰的分離度均>3。

4.2 波長(zhǎng)的選擇

葛根素最佳測(cè)定波長(zhǎng)為250nm，橙皮苷最佳測(cè)定波長(zhǎng)為283nm，該保健食品中葛根素的含量約高于比橙皮苷6倍，綜合考量?jī)沙煞值暮颗c響應(yīng)值，選擇283nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。