王曉輝，沙樹奎，閆嘉俊，姚明月

作者單位：南陽市中醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，河南 南陽473003

喉鱗狀細(xì)胞癌是喉癌來的主要病理類型，也是耳鼻喉科常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在頭頸部上皮來源的原發(fā)性惡性腫瘤中排名第二。喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷時通常處于中晚期，病人預(yù)后較差。探索喉鱗狀細(xì)胞癌臨床分期及預(yù)后的潛在標(biāo)志物對喉鱗狀細(xì)胞癌病人的早期診斷并及時采取措施、改善病人預(yù)后具有積極的意義。基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑是細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)的關(guān)鍵酶，也是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及細(xì)胞凋亡的重要參與者，其可作為臨床惡性腫瘤診斷的標(biāo)志物。本研究分析VEGF 及MMPs 在喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷及預(yù)后判斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以河南省南陽市中醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科2010年12月至2015年12月收治的喉鱗狀細(xì)胞癌病人180例為研究對象（觀察組）。其中男99 例，女81 例，年齡范圍62～77 歲，年齡（66.7±8.4）歲，其中Ⅰ期34 例，Ⅱ期48 例，Ⅲ期56 例，Ⅳ期42例。以河南省南陽市中醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科同期健康體檢者160例為對照組，男85例，女75例，年齡范圍62～76歲，年齡（66.5±8.3）歲。兩組研究對象在性別比例、年齡分布等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（

χ

=0.120，

P

=0.730；

t

=0.221，

P

=0.826）。

1.2 觀察指標(biāo)

分析各組研究對象血清中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體1（VEGFR1）、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2（VEGFR2）、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體3（VEGFR3）、基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）和金屬蛋白酶組織抑制因子1（TIMP1）及金屬蛋白酶組織抑制因子2（TIMP2）水平的變化，并分析不同VEGF、MMP2和MMP9表達(dá)強(qiáng)度病人預(yù)后情況。

1.3 試劑與檢測方法

抽取各組研究對象清晨空腹靜脈血6 mL，3 000 rpm離心10 min后分離上層血清，-20 ℃保存，待用。VEGF、VEGFR1蛋白檢測試劑盒購自碧云天生物科技有限公司；VEGFR2、VEGFR3檢測試劑盒購自R&D公司；MMP2和MMP9蛋白檢測試劑盒購自IBL 公司；TIMP1 檢測試劑盒購自CST 公司；TIMP2蛋白檢測試劑盒購自Santa Cruz公司。所有檢測的操作過程均按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人VEGF 表達(dá)分析

研究發(fā)現(xiàn)，不同臨床分期觀察組VEGF 的表達(dá)水平均高于對照組（

P

＜0.05）；不同臨床分期觀察組VEGF 及其受體表達(dá)存在明顯的差異性，隨著病人臨床分期的升高，血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)逐步增強(qiáng)（

P

＜0.05），見表1。

表1 喉鱗狀細(xì)胞癌180例與健康體檢者160例VEGF表達(dá)分析/±s

2.2 不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人MMP2 和MMP9 蛋白表達(dá)分析

研究發(fā)現(xiàn)，不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人MMP2 和MMP9 蛋白表達(dá)水平均高于對照組（

P

＜0.05）；不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人MMP2 和MMP9 表達(dá)存在明顯的差異性：隨著病人臨床分期的升高，MMP2 和MMP9 的表達(dá)逐步增強(qiáng)（

P

＜0.05），見表2。

表2 喉鱗狀細(xì)胞癌180例與健康體檢者160例MMP2和MMP9蛋白表達(dá)分析/±s

2.3 不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人TIMP1 和TIMP2蛋白表達(dá)分析

研究發(fā)現(xiàn)，不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人TIMP1和TIMP2蛋白表達(dá)水平均高于對照組（

P

＜0.05）；不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人TIMP1 和TIMP2 表達(dá)存在明顯的差異性：隨著病人臨床分期的升高，TIMP1 和TIMP2 的表達(dá)逐步增強(qiáng)（

P

＜0.05），見表3。

表3 喉鱗狀細(xì)胞癌180例與健康體檢者160例TIMP1和TIMP2蛋白表達(dá)分析/±s

2.4 VEGF 表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后的相關(guān)性分析

研究發(fā)現(xiàn)VEGF 表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后有明顯的相關(guān)性，隨著血管內(nèi)皮生長因子蛋白表達(dá)的增強(qiáng)，病人的預(yù)后逐漸變差，見圖1。

圖1 VEGF表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后的相關(guān)性分析。

2.5 MMP2 蛋白表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后的相關(guān)性分析

研究發(fā)現(xiàn)MMP2表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后有明顯的相關(guān)性，隨著MMP2 表達(dá)的增強(qiáng)，病人的預(yù)后逐漸變差，見圖2。

圖2 MMP2蛋白表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后的相關(guān)性分析。

2.6 MMP9 蛋白表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后的相關(guān)性分析

研究發(fā)現(xiàn)MMP9表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后有明顯的相關(guān)性，隨著MMP9 表達(dá)的增強(qiáng)，病人的預(yù)后逐漸變差，見圖3。

圖3 MMP9蛋白表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后的相關(guān)性分析。

3 討論

隨著現(xiàn)代診療技術(shù)的進(jìn)步和生活環(huán)境的惡化，喉鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病率和死亡率有逐年升高的趨勢。喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷時通常處于中晚期，預(yù)后較差。因此，探索其發(fā)病、臨床分期及預(yù)后的標(biāo)志物，對早期臨床診斷和改善病人預(yù)后具有十分重要的意義。本研究在分析VEGF 及MMPs 在喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷及預(yù)后判斷中的價值時發(fā)現(xiàn)不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人VEGF、MMP2、MMP9 和TIMP1 及TIMP2 蛋白表達(dá)存在明顯的差異性：隨著喉鱗狀細(xì)胞癌臨床分期的增加，血管內(nèi)皮生長因子及基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員的表達(dá)逐步增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；且VEGF、MMP2和MMP9 表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后有相關(guān)性，隨著血管內(nèi)皮生長因子及基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員表達(dá)的增強(qiáng)，病人的預(yù)后逐漸變差。因此，VEGF 及MMPs 表達(dá)與喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床分期密切相關(guān)，且可作為病人預(yù)后的標(biāo)志物。

基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑參與了多種惡性腫瘤的發(fā)展、發(fā)展及惡化過程，且與病人的預(yù)后有一定的相關(guān)性。在研究垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因1、基質(zhì)金屬蛋白酶-2及基質(zhì)金屬蛋白酶-9在胃癌組織中表達(dá)意義的研究中發(fā)現(xiàn)其可作為胃癌臨床診斷的重要標(biāo)志物。在分析脂聯(lián)素在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其與基質(zhì)金屬蛋白酶-9 和腫瘤血管生成關(guān)系的研究中也證實(shí)MMP9的過表達(dá)與腫瘤血管生成呈明顯的正相關(guān)性。以往的研究還發(fā)現(xiàn)胃癌組織高遷移率族蛋白A2 與基質(zhì)金屬蛋白酶-9 表達(dá)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且基質(zhì)金屬蛋白酶-2、9及其抑制劑MMI-166是腫瘤發(fā)展、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的重要參與分子和標(biāo)志物。馬艷艷等也發(fā)現(xiàn)兔肝VX2腫瘤射頻消融術(shù)后殘癌與基質(zhì)金屬蛋白酶9的表達(dá)密切相關(guān)。本研究也發(fā)現(xiàn)不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人MMP2、MMP9蛋白表達(dá)存在明顯的差異性：隨著病人臨床分期的升高，基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員蛋白表達(dá)逐步增強(qiáng)，且存在顯著的差異性；且MMP2 和MMP9 表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后有明顯的相關(guān)性，提示基質(zhì)金屬蛋白酶也是喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷與預(yù)后的重要標(biāo)志物。

血管內(nèi)皮生長因子及其受體也是腫瘤多種病理及生理過程的重要參與者和調(diào)節(jié)者，也與腫瘤的發(fā)生及惡化過程相關(guān)。在分析腎母細(xì)胞瘤腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的研究中發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的生理及病理過程與血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)明顯相關(guān)。在研究上皮性卵巢惡性腫瘤組織中環(huán)氧合酶血管內(nèi)皮生長因子CD34 蛋白和堿性成纖維細(xì)胞生長因子表達(dá)的研究中發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)與上皮卵巢惡性腫瘤的臨床分期密切相關(guān)，且此過程與堿性成纖維細(xì)胞生長因子有關(guān)。以往的研究也發(fā)現(xiàn)葡萄膜惡性黑色素瘤中血管內(nèi)皮生長因子水平與腫瘤的轉(zhuǎn)移過程相關(guān)，且奧沙利鉑聯(lián)合多西他賽對卵巢癌病人的治療作用與其調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長因子的異常表達(dá)有關(guān)。以往的研究還證實(shí)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞浸潤和血管內(nèi)皮生長因子在膀胱癌中的表達(dá)是腫瘤轉(zhuǎn)移及惡化的關(guān)鍵過程。本研究也發(fā)現(xiàn)不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)存在明顯的差異性：隨著病人臨床分期的升高，血管內(nèi)皮生長因子及其受體的表達(dá)逐步增強(qiáng)；且血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后有明顯的相關(guān)性，提示基質(zhì)金屬蛋白酶也是喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷與預(yù)后的重要標(biāo)志物。

因此，VEGF及MMPs表達(dá)與喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床分期密切相關(guān)，且可作為病人預(yù)后的標(biāo)志物。