袁小紅 龐克堅(jiān) 唐輝 張虹 魏灃 劉樂(lè)樂(lè) 姜國(guó)珍

摘 要 目的：提升蒙藥哈日-沙布嘎（鐵桿蒿）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為全面評(píng)價(jià)其質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。方法：對(duì)哈日-沙布嘎進(jìn)行外觀性狀鑒別和顯微鑒別;采用薄層色譜（TLC）法對(duì)藥材中的東莨菪苷、綠原酸、咖啡酸、東莨菪內(nèi)酯和3，5-二咖啡?？鼘幩徇M(jìn)行定性鑒別;建立高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定藥材中上述5種成分的含量;并對(duì)藥材的水分、總灰分和浸出物進(jìn)行檢查。結(jié)果：哈日-沙布嘎藥材莖呈類(lèi)圓柱形，表面呈紫色或紫褐色或青褐色;葉呈卵形或矩圓狀卵形，氣香;花黃色，頭狀花序，近球形或半球形;粉末呈綠色或黃綠色，花粉粒具3個(gè)萌發(fā)孔，薄壁細(xì)胞簇晶棱尖銳，螺紋導(dǎo)管眾多，偶見(jiàn)具緣紋孔導(dǎo)管，木纖維多成束存在。TLC結(jié)果顯示，供試品在與5種對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上均顯相同顏色的斑點(diǎn)。東莨菪苷、綠原酸、咖啡酸、東莨菪內(nèi)酯、3，5-二咖啡?？鼘幩岬馁|(zhì)量濃度分別在85.60～428.00、10.16～101.60、10.20～102.00、40.84～408.40、40.80～408.00 μg/mL范圍內(nèi)與各自峰面積呈良好線性關(guān)系（r均大于0.999 0）;精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于3.00%（n=6）;平均加樣回收率分別為103.07%、99.66%、98.37%、97.78%、98.40%（RSD均小于3.00%，n=6）。10批藥材樣品中上述5種成分含量范圍分別為0.36%～1.23%、0.09%～0.51%、0.04%～0.13%、0.61%～1.13%、0.12%～1.11%;水分、總灰分、水溶性浸出物的平均含量分別為6.25%、5.86%、26.50%。結(jié)論：該研究在哈日-沙布嘎原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了顯微鑒別、TLC鑒別、含量測(cè)定以及水分、總灰分和浸出物等檢查項(xiàng)，方法精密、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性良好，能夠?yàn)楦涌茖W(xué)、規(guī)范地評(píng)價(jià)該藥材質(zhì)量提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞 蒙藥;哈日-沙布嘎（鐵桿蒿）;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);顯微鑒別;薄層色譜法;高效液相色譜法;東莨菪苷;綠原酸;咖啡酸;東莨菪內(nèi)酯;3，5-二咖啡?？鼘幩?/p>

中圖分類(lèi)號(hào) R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2021）05-0536-06

ABSTRACT OBJECTIVE： To improve the quality standard of Mongolian medicine Artemisia sacrorum， and to provide scientific basis for comprehensive quality evaluation. METHODS： The appearance and microscopic characteristics of A. sacrorum were identified; scopoletin， chlorogenic acid， caffeic acid， scopoletin and 3，5-dicaffeoylquinic acid were identified quantitatively by TLC; the contents of above 5 components were determined by HPLC. The water content， total ash and extract were examined. RESULTS： The stem of A. sacrorum was cylindrical， and its surface was purple or purple-brown or cyan-brown; the leaves were ovate or oblong-ovate， fragrant; the flowers were yellow， head-shaped， subglobose or hemispherical. The powder was green or yellow-green，its pollen grain had three germination; the parenchymal cell clusters with sharp edges and numerous threaded ducts，occasionally having marginal pitted ducts; its wood fibers were in bundles mostly. Results of TLC showed that the spots of the same color were found in the corresponding positions of chromatogram for 5 substance control and samples. The linear range of scopoletin， chlorogenic acid， caffeic acid， scopolactone and 3，5-dicaffeoylquinic acid were 85.60-428.00， 10.16-101.60， 10.20-102.00， 40.84-408.40 and 40.80-408.00 μg/mL （all r>0.999 0）. RSDs of precision， stability， repeatability tests were all less than 3.00% （n=6）. The average recoveries were 103.07%，99.66%，98.37%，97.78%， 98.40% （all RSDs<3.00%， n=6）. The contents of the above-mentioned 5 compounds in 10 batches of samples were 0.36%-1.23%， 0.09%-0.51%， 0.04%-0.13%， 0.61%-1.13%， 0.12%-1.11%， respectively; the average contents of water， total ash and water soluble extract were 6.25%， 5.86%， 26.50%， respectively.? CONCLUSIONS： On the basis of the original quality standard of A. sacrorum， microscopic identification， TLC identification， content determination and examination items of water， total ash and extract are added. The method shows good precision， accuracy and stability， which can provide reference for more scientific and standardized evaluation of the quality of this medicinal material.

KEYWORDS Mongolian medicine; Artemisia sacrorum; Quality standard; Microscopic identification; TLC; HPLC; Scopoletin; Chlorogenic acid; Caffeic acid; Scopoletin; 3，5-dicaffeoylquinic acid

蒙藥哈日-沙布嘎，為菊科植物鐵桿蒿Artemisia sacrorum Ledeb.的干燥全草，別名白蓮蒿、萬(wàn)年蒿;其在新疆、寧夏、甘肅、西藏、內(nèi)蒙古等地均有廣泛分布[1]，且用藥多為自采。哈日-沙布嘎全株均能入藥，據(jù)蒙醫(yī)藥有關(guān)書(shū)籍記載，其性涼、味苦，具有殺蟲(chóng)止痛、消腫、燥“協(xié)日烏素”（注：“協(xié)日烏素”為蒙醫(yī)對(duì)病癥“黃水”的專(zhuān)有名詞）等功能[2]。研究發(fā)現(xiàn)，哈日-沙布嘎的主要成分有黃酮類(lèi)、肉桂酸類(lèi)、香豆素類(lèi)、萜類(lèi)、揮發(fā)油等[3-5]。其提取物中含有的木脂素具有較好的保肝作用;香豆素類(lèi)化合物具有抗炎、抗菌等作用;地上部分的甲醇提取物顯示出強(qiáng)抗氧化作用[6-8];此外，其含有的咖啡?？崴犷?lèi)化合物具有較強(qiáng)的抗氧化、抗炎活性[9]，這一作用與哈日-沙布嘎用藥功效一致。

哈日-沙布嘎收載于1998年版的《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·蒙藥分冊(cè)》中，但該標(biāo)準(zhǔn)僅收錄了該藥材的外觀性狀、性味和功能主治等，缺乏其他鑒別項(xiàng)，也沒(méi)有基于藥效的化學(xué)成分含量測(cè)定[2]。現(xiàn)有對(duì)其質(zhì)量控制的報(bào)道多是采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)藥材中單一成分進(jìn)行定量分析，如徐犇等[10]對(duì)藥材中東莨菪內(nèi)酯進(jìn)行了含量測(cè)定，佟皎薇等[11]測(cè)定了藥材中綠原酸的含量，這些方法均難以全面評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量。鑒于此，本研究采集了10批哈日-沙布嘎藥材，在原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上增加了顯微鑒別、薄層色譜（TLC）鑒別、含量測(cè)定以及水分、總灰分和浸出物等檢查項(xiàng)，以期對(duì)該藥材的質(zhì)量進(jìn)行全面控制。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所使用的主要儀器有：Primo Star型數(shù)碼生物顯微鏡（德國(guó)Zeiss公司）、Eclipse E200型生物顯微鏡（日本Nikon公司）、YOKO-ZS型薄層數(shù)碼成像儀（武漢藥科新技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）、G型硅膠板（青島海洋化工有限公司，規(guī)格50 mm×100 mm，批號(hào)20191109）、展開(kāi)槽（北京杰瑞恒達(dá)科技有限公司，規(guī)格110 mm×120 mm）、e2695型HPLC儀（含2998 型光電二極管矩陣檢測(cè)器，美國(guó)Waters公司）、KH-300DE型臺(tái)式數(shù)控超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）、BT125D型十萬(wàn)分之一電子分析天平（德國(guó)Sartorius公司）、UV-2600型紫外分光光度計(jì)（日本Shimadzu公司）。

1.2 主要試劑

本研究所使用的主要試劑有：東莨菪苷對(duì)照品、綠原酸對(duì)照品、咖啡酸對(duì)照品、東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品、3，5-二咖啡?？鼘幩釋?duì)照品（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)分別為Z15J11S115885、Y24J7K16726、Y09J8C28349、Z17J10Y90380、Z05M10X87215，純度均大于98%），乙腈（美國(guó)Fisher公司，色譜純），磷酸、甲醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司，分析純），超純水。

1.3 藥材

10批哈日-沙布嘎藥材來(lái)源見(jiàn)表1。其中S1～S2號(hào)藥材采購(gòu)于新疆精河縣蒙醫(yī)診所， S3～S5號(hào)藥材采購(gòu)于新疆博爾塔拉蒙古自治州蒙醫(yī)醫(yī)院，S6～S10號(hào)藥材采自新疆新源、昭蘇、烏魯木齊等地，均經(jīng)新疆博爾塔拉蒙古自治州蒙醫(yī)醫(yī)院巴特孟克主任醫(yī)師鑒定為菊科植物鐵桿蒿A. sacrorum Ledeb.的干燥全草。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 分別取東莨菪苷、綠原酸、咖啡酸、東莨菪內(nèi)酯、3，5-二咖啡?？鼘幩釋?duì)照品適量，精密稱定，加入甲醇制成上述5個(gè)成分質(zhì)量濃度分別為1.070、1.016、1.020、2.042、2.040 mg/mL的單一成分對(duì)照品貯備液。分別取東莨菪苷對(duì)照品貯備液0.75 mL，綠原酸、咖啡酸對(duì)照品貯備液各0.20 mL，東莨菪內(nèi)酯、? ? 3，5-二咖啡?？鼘幩釋?duì)照品貯備液各0.40 mL，置于同一5 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻，制成混合對(duì)照品溶液，備用。

2.1.2 供試品溶液的制備 取哈日-沙布嘎藥材粉末（過(guò)30目篩）0.5 g，精密稱定，置于100 mL錐形瓶中，加甲醇20 mL，稱質(zhì)量，超聲（功率300 W，頻率40 kHz）處理1 h，取出，放冷至室溫，再次稱質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，先后以濾紙、0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取甲醇20 mL，置于100 mL錐形瓶中，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2 性狀和顯微鑒別

2.2.1 性狀鑒別 藥材莖呈類(lèi)圓柱形，直徑1～5 mm，表面呈紫色或紫褐色或青褐色;質(zhì)韌易折斷，斷面呈綠白色或黃褐色，部分莖中空。葉呈卵形或矩圓狀卵形，二回羽狀全裂;側(cè)裂片2～5對(duì)，羽狀全裂;小裂片條狀披針形，寬1～3 mm，全緣;上表面呈綠色，下表面呈灰綠色，氣香。花黃色，頭狀花序，近球形或半球形，直徑2～3 mm，下垂，排列成復(fù)總狀花序。哈日-沙布嘎藥材的外觀性狀見(jiàn)圖1。

2.2.2 莖橫切面顯微鑒別 藥材的莖橫切面有1列表皮細(xì)胞，呈類(lèi)方形或圓形;皮層由多層薄壁細(xì)胞組成，呈類(lèi)橢圓形或不規(guī)則形，在縱棱處有1～3層厚角組織;維管束為外韌型，由1～4列纖維構(gòu)成帽狀纖維束;韌皮部薄壁細(xì)胞呈圓形或橢圓形，形成層不明顯，導(dǎo)管排列不規(guī)則;髓部較寬廣，由圓形或橢圓形的薄壁細(xì)胞組成。哈日-沙布嘎藥材的莖橫切面圖見(jiàn)圖2。

2.2.3 粉末顯微鑒別 藥材粉末呈綠色或黃綠色。粉末中可見(jiàn)大量花粉粒，具3個(gè)萌發(fā)孔，散在，直徑16.5～21.1 μm;草酸鈣簇晶聚集于薄壁細(xì)胞內(nèi)，棱尖銳，直徑70.8～117.0 μm;非腺毛多單細(xì)胞，細(xì)長(zhǎng)，末端尖銳;螺紋導(dǎo)管眾多，偶見(jiàn)具緣紋孔導(dǎo)管;木纖維多成束存在，壁不甚厚、斷裂、破碎;莖表皮細(xì)胞呈綠色，類(lèi)圓形，排列整齊;葉表皮細(xì)胞的細(xì)胞壁呈微波狀，細(xì)長(zhǎng)。哈日-沙布嘎粉末特征圖見(jiàn)圖3。

2.3 TLC鑒別

按照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）TLC法（通則0502）實(shí)驗(yàn)操作要求[12]，分別吸取“2.1”項(xiàng)下各單一成分對(duì)照品貯備液5 μL和供試品溶液10 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，在常溫下飽和后展開(kāi)，取出，晾干，檢視。其中，東莨菪苷的展開(kāi)劑為三氯甲烷-甲醇（7 ∶ 3，V/V），置于紫外燈365 nm波長(zhǎng)下檢視;綠原酸的展開(kāi)劑為乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（8 ∶ 3 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V/V），噴以三氯化鐵乙醇溶液顯色后加熱，在日光燈下檢視;咖啡酸的展開(kāi)劑為甲苯-乙酸乙酯-甲酸（7 ∶ 3 ∶ 0.5，V/V/V），噴以三氯化鋁乙醇溶液顯色后置于紫外燈365 nm波長(zhǎng)下檢視;東莨菪內(nèi)酯的展開(kāi)劑為乙酸乙酯-甲醇（15 ∶ 1，V/V），置于紫外燈365 nm波長(zhǎng)下檢視;3，5-二咖啡?？鼘幩岬恼归_(kāi)劑為乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（8 ∶ 3 ∶ 1 ∶ 0.4，V/V/V/V），噴以三氯化鋁乙醇溶液顯色后置于紫外燈365 nm波長(zhǎng)下檢視。結(jié)果，供試品與各對(duì)照品在相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，詳見(jiàn)圖4。

2.4 含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件 以ACE C18 PFP（250 mm×4.6 mm，5? μm）為本試驗(yàn)色譜柱，以乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0～5 min，13%A→15%A;5～8 min，15%A→18%A;8～20 min，18%A→25%A;20～25 min，25%A→55%A），流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為328 nm，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為5 μL。

2.4.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取“2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各5 μL，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖（見(jiàn)圖5）。結(jié)果表明，在該色譜條件下，理論板數(shù)按東莨菪內(nèi)酯峰計(jì)算不低于20 000，各色譜峰與相鄰峰的分離度均大于1.2，陰性對(duì)照對(duì)各成分的測(cè)定無(wú)干擾。

2.4.3 線性關(guān)系考察 分別取東莨菪苷對(duì)照品貯備液0.40、0.50、0.75、1.00、1.50、2.00 mL，綠原酸、咖啡酸對(duì)照品貯備液各0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mL，東莨菪內(nèi)酯、3，5-二咖啡?？鼘幩釋?duì)照品貯備液各0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mL，分別置于6個(gè)5 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻，配制成系列濃度的混合對(duì)照品溶液。按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得5種成分的線性回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4.4 檢出限與定量限考察 取“2.1.1”項(xiàng)下各對(duì)照品貯備液適量，用甲醇逐步稀釋?zhuān)础?.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，分別以信噪比3 ∶ 1、10 ∶ 1測(cè)定檢出限、定量限，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄5個(gè)成分的峰面積。結(jié)果，東莨菪苷、綠原酸、咖啡酸、東莨菪內(nèi)酯、3，5-二咖啡?？鼘幩岱迕娣e的RSD分別為0.59%、0.43%、0.38%、0.27%、0.35%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.4.6 重復(fù)性試驗(yàn) 分別稱取同一批樣品（編號(hào)S3）共6份，每份0.5 g，精密稱定，置于100 mL錐形瓶中，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄5個(gè)成分的峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品含量。結(jié)果，樣品中東莨菪苷、綠原酸、咖啡酸、東莨菪內(nèi)酯、3，5-二咖啡?？鼘幩岬钠骄糠謩e為0.54%、0.15%、0.08%、0.61%、0.53%，RSD分別為2.05%、2.74%、2.23%、2.44%、2.80%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.4.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液（編號(hào)S1），分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄5個(gè)成分的峰面積。結(jié)果，東莨菪苷、綠原酸、咖啡酸、東莨菪內(nèi)酯、3，5-二咖啡?？鼘幩岱迕娣e的RSD分別為2.32%、2.67%、1.19%、1.86%、1.48%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.8 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知含量的樣品（編號(hào)S4）共6份，每份0.5 g，精密稱定，精密加入“2.4.3”項(xiàng)下最后一個(gè)系列濃度的混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，東莨菪苷、綠原酸、咖啡酸、東莨菪內(nèi)酯、3，5-二咖啡?？鼘幩峒訕踊厥章实腞SD分別為1.24%、1.32%、2.04%、2.64%、1.95%（n=6），表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.4.9 樣品含量測(cè)定 取10批藥材樣品各適量，分別按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算5種成分含量。每批樣品平行測(cè)定3次，取平均值，結(jié)果見(jiàn)表4。

2.5 檢查

2.5.1 水分、總灰分測(cè)定 分別按照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則0832（烘干法）和通則2302進(jìn)行水分和總灰分測(cè)定[12]。每批樣品平行測(cè)定3次，取平均值。結(jié)果，各批樣品水分含量為5.85%～6.58%，平均值為6.25%;各批樣品總灰分含量為4.87%～6.57%，平均值為5.86%，詳見(jiàn)表5。以平均值上浮約20%，暫定藥材水分含量不得超過(guò)7.50%、總灰分含量不得超過(guò)7.03%。

2.5.2 浸出物測(cè)定 按照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則2201[12]，采用水為溶劑以熱浸法提取藥材，測(cè)定水溶性浸出物的含量。每批樣品平行測(cè)定3次，取平均值。結(jié)果，各批樣品水溶性浸出物含量為21.26%～33.53%，平均值為26.50%，詳見(jiàn)表5。以平均值下浮約20%，暫定藥材水溶性浸出物含量不得低于21.20%。

3 討論

3.1 樣品提取條件的選擇

在樣品的提取中，筆者對(duì)提取溶劑（甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇）、料液比（1 ∶ 40、1 ∶ 20、1 ∶ 10、1 ∶ 5，? ? g/mL）、提取時(shí)間（0.5、1、2、3 h）進(jìn)行了篩選，綜合考慮所得色譜峰的峰面積、分離度、峰形及制備方法的簡(jiǎn)便、快捷，最終確定本研究提取條件為提取溶劑甲醇、料液比 1 ∶ 40（g/mL）、提取時(shí)間1 h。

3.2 TLC法展開(kāi)劑的選擇

筆者在預(yù)試驗(yàn)中，選用不同展開(kāi)系統(tǒng)對(duì)不同批次藥材進(jìn)行了TLC鑒別。綠原酸的展開(kāi)劑考察了乙酸乙酯-甲酸-水（7 ∶ 2.5 ∶ 2.5，V/V/V）、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水? （10 ∶ 6 ∶ 1 ∶ 2，V/V/V/V）、乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（8 ∶ 3 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V/V）;咖啡酸的展開(kāi)劑考察了甲苯-乙酸乙酯-甲酸（7 ∶ 3 ∶ 0.5，V/V/V）、甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5 ∶ 3 ∶ 1，V/V/V）、甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15 ∶ 3.5 ∶ 0.5，V/V/V）;東莨菪苷的展開(kāi)劑考察了三氯甲烷-甲醇（6 ∶ 4，V/V）、三氯甲烷-甲醇（8 ∶ 2，V/V）、三氯甲烷-甲醇（7 ∶ 3，V/V）;東莨菪內(nèi)酯的展開(kāi)劑考察了乙酸乙酯-甲醇（15 ∶ 1，V/V）、乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（17 ∶ 2 ∶ 1，V/V/V）;3，5-二咖啡?？鼘幩岬恼归_(kāi)劑考察了乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7 ∶ 3 ∶ 1 ∶ 1.2，V/V/V/V）、乙酸乙酯-甲酸-水（7 ∶ 2.5 ∶ 2.5，V/V/V）、乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（8 ∶ 3 ∶ 1 ∶ 0.4，V/V/V/V）。結(jié)果顯示，采用文中展開(kāi)劑能較好地將主斑點(diǎn)與其他斑點(diǎn)分離。

3.3 HPLC法檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

結(jié)合HPLC圖和預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，可知5種成分中東莨菪內(nèi)酯含量較高，當(dāng)東莨菪內(nèi)酯有最大吸收時(shí)，其他成分均有較強(qiáng)吸收，且變換檢測(cè)波長(zhǎng)對(duì)東莨菪內(nèi)酯影響較大，對(duì)其他成分影響相對(duì)較小，故選用東莨菪內(nèi)酯來(lái)篩選檢測(cè)波長(zhǎng)。

取東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品貯備液適量，以甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為0.016 mg/mL的溶液，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在200～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果可見(jiàn)其在334 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。再結(jié)合文獻(xiàn)中東莨菪內(nèi)酯的檢測(cè)波長(zhǎng)[10，13]，比較供試品溶液在328、334 nm波長(zhǎng)下的色譜圖數(shù)據(jù)，結(jié)果表明在328 nm波長(zhǎng)下，5種成分的色譜峰基線均平穩(wěn)，且均有較強(qiáng)吸收，故選擇328 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.4 HPLC法流動(dòng)相的選擇

在選擇HPLC法流動(dòng)相時(shí)，筆者以各色譜峰分離度、出峰時(shí)間、峰形等為評(píng)價(jià)指標(biāo)，比較了甲醇-0.1%甲酸溶液、甲醇-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1%甲酸溶液4種流動(dòng)相系統(tǒng)。結(jié)果表明，以甲醇-水溶液系統(tǒng)為流動(dòng)相梯度洗脫時(shí)，柱壓較高、峰形較差;以乙腈-0.1%甲酸溶液梯度洗脫時(shí)，東莨菪苷與綠原酸分離度較差;以乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脫時(shí)，柱壓較低，各色譜峰分離良好且基線平穩(wěn)，故選定乙腈-0.1%磷酸溶液作為梯度洗脫流動(dòng)相。

綜上所述，本研究在哈日-沙布嘎原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了顯微鑒別、TLC鑒別、含量測(cè)定以及水分、總灰分和浸出物等檢查項(xiàng)，首次對(duì)哈日-沙布嘎中東莨菪苷、咖啡酸、3，5-二咖啡酰奎寧酸進(jìn)行了含量測(cè)定，方法精密、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性良好，能夠?yàn)楦涌茖W(xué)、規(guī)范地評(píng)價(jià)蒙藥哈日-沙布嘎的質(zhì)量提供依據(jù)。

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（收稿日期：2020-10-15 修回日期：2021-02-08）

（編輯：胡曉霖）