金璐璐 王艷 王倩 邵俊康 黃必飛 王超群

1東陽(yáng)市人民醫(yī)院溫州醫(yī)科大學(xué)附屬東陽(yáng)醫(yī)院生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室 322100；2東陽(yáng)市人民醫(yī)院溫州醫(yī)科大學(xué)附屬東陽(yáng)醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 322100；3東陽(yáng)市人民醫(yī)院溫州醫(yī)科大學(xué)附屬東陽(yáng)醫(yī)院病理科 322100

乳腺癌是全球女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)均處于惡性腫瘤前列［1-2］。抵抗素（Resistin）是脂肪細(xì)胞分泌的一種細(xì)胞因子，最初對(duì)其的研究主要集中在肥胖和胰島素抵抗等方面，它可通過(guò)多種分子途徑參與機(jī)體的代謝、炎癥和自身免疫［3］。目前研究發(fā)現(xiàn)其和多種惡性腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展相關(guān)［4］。在乳腺癌中，多項(xiàng)研究顯示血清Resistin 水平升高與乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)增加及進(jìn)展相關(guān)［5-7］。細(xì)胞骨架蛋白Fascin-1（FSCN1）在乳腺癌、胃癌等多種腫瘤中高表達(dá)，與腫瘤發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)［8-13］。我們先前的研究顯示p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路調(diào)控FSCN1 表達(dá)，并進(jìn)一步影響乳腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移［12］。有研究報(bào)道Resistin 亦可通過(guò)p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路促進(jìn)骨肉瘤血管新生及平滑肌增殖［14-15］。而乳腺癌中Resistin和FSCN1之間是否存在某種關(guān)聯(lián)尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究采用免疫組織化學(xué)Envision 法檢測(cè)400 例乳腺癌組織中Resistin 和FSCN1 蛋白的表達(dá)，探討Resistin 和FSCN1 的相關(guān)性，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2007 年1 月至2019 年6 月東陽(yáng)市人民醫(yī)院病理科浸潤(rùn)性乳腺癌石蠟標(biāo)本400例。按WHO標(biāo)準(zhǔn)（2012年）對(duì)各病例進(jìn)行分型和分級(jí)?；颊吣挲g范圍為26～90 歲，中位年齡52 歲；組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)20 例，Ⅱ級(jí)264例，Ⅲ級(jí)116例；pTNM 分期：Ⅰ期106例，Ⅱ期195例，Ⅲ期99例，Ⅳ期0例。所有患者術(shù)前未做化療、免疫及放射治療。在本組乳腺癌病例中，239例有完整的隨訪資料者納入本研究生存分析。本研究經(jīng)東陽(yáng)市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 免疫組織化學(xué)染色 免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)采用Envision 二步法（Dako 公司），具體實(shí)驗(yàn)步驟、條件如前所述［12-13］。本研究所使用一抗包括：鼠抗人Resistin 單克隆一抗（克隆號(hào)：C-10，Santa Cruz公司）；鼠抗人FSCN1單克隆一抗（克隆號(hào)：55K-2，Santa Cruz公司）。

1.3 免疫組織化學(xué)評(píng)分 （1）Resistin染色主要定位于細(xì)胞漿，其染色強(qiáng)度計(jì)分：0（無(wú)染色）、1（淡黃色）、2（棕黃色）和3（棕褐色），以0～1 為低表達(dá)，2～3 為高表達(dá)［16］。（2）FSCN1染色結(jié)果判定采用前述標(biāo)準(zhǔn)［13］，以強(qiáng)陽(yáng)性視為高表達(dá)。

1.4 隨訪 隨訪方案及具體步驟如前所述［17］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)處理采用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)軟件，樣本率比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)。Resistin 和FSCN1 蛋白表達(dá)的相關(guān)性采用Spearman 相關(guān)分析。采用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，患者生存分析用Log-Rank 檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 乳腺癌中Resistin 和FSCN1 蛋白的表達(dá)及相關(guān)性 在400 例乳腺癌組織中，334 例（83.5%）Resistin 蛋白高表達(dá)；75 例（18.8%）FSCN1 蛋白高表達(dá)。Resistin 高表達(dá)患者的FSCN1 蛋白高表達(dá)率（21.0%，70/334）較Resistin 低表達(dá)者（7.6%，5/66）顯著增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.011），見(jiàn)圖1。Spearman 相關(guān)分析顯示乳腺癌中Resistin 和FSCN1蛋白表達(dá)顯著正相關(guān)（r=0.127，P=0.011）。

2.2 乳腺癌中Resistin 和FSCN1 共同高表達(dá)對(duì)患者預(yù)后的影響 乳腺癌患者術(shù)后平均隨訪時(shí)間為60 月（3～80 月）。生存分析顯示，在獲得隨訪信息的239 例乳腺癌患者中，5 年總生存率為88.3%（211/239），5 年無(wú)復(fù)發(fā)生存率為79.1%（189/239）。

Resistin和FSCN1均高表達(dá)的乳腺癌患者5年平均生存期為54.3 月，總生存率為78.8%（26/33），顯著低于Resistin和FSCN1 單一高表達(dá)者［5 年平均生存期為57.9 月、總生存率為88.5%（146/165）］及Resistin和FSCN1均低表達(dá)者［5年平均生存期為58.0 月、總生存率為95.1%（39/41）］，差異有統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義（χ2=4.744、P=0.029，圖2A）。 Resistin 和FSCN1 均高表達(dá)者5 年平均無(wú)復(fù)發(fā)生存期為50.3 月，無(wú)復(fù)發(fā)生存率為75.8%（25/33），低于Resistin 和FSCN1單一高表達(dá)者［5 年平均無(wú)復(fù)發(fā)生存期為53.6 月、無(wú)復(fù)發(fā)生存率為78.2%（129/165）］及Resistin 和FSCN1均低表達(dá)者［5年平均無(wú)復(fù)發(fā)生存期為54.8 月、無(wú)復(fù)發(fā)生存率為85.4%（35/41）］，但差異未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.228、P=0.268，圖2B）。

圖1 乳腺癌中Resistin和FSCN1免疫組織化學(xué)染色，Envision二步法（×200）

圖2 239例乳腺癌患者生存曲線

3 討 論

先前研究顯示，Resistin 參與肥胖相關(guān)的亞臨床炎癥、胰島素抵抗、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病，其通過(guò)下游分子途徑參與代謝、炎癥和自身免疫［3］。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)Resistin 在非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等惡性腫瘤患者血液中高表達(dá)，其單核苷酸多態(tài)性與多種腫瘤發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)，提示Resistin 與惡性腫瘤發(fā)生或進(jìn)展密切相關(guān)［4-7，18-19］。然而，目前關(guān)于Resistin 在乳腺癌組織中表達(dá)的報(bào)道少見(jiàn)。我們前期應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)了154 例乳腺癌組織中Resistin 蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示乳腺癌相對(duì)于正常乳腺組織Resistin 表達(dá)顯著增強(qiáng)，表明Resistin 與乳腺癌發(fā)生密切相關(guān)［16］。

FSCN1與腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［20］。研究顯示乳腺癌中p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路通過(guò)調(diào)控FSCN1 表達(dá)，進(jìn)一步影響乳腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移［12］。同時(shí)有報(bào)道顯示Resistin 通過(guò)p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路促進(jìn)骨肉瘤血管新生及平滑肌增殖［13-14］。那么，在乳腺癌中，Resistin 和FSCN1 之間是否存在某種關(guān)聯(lián)呢？目前尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。闡明該問(wèn)題可能為今后抗乳腺癌治療提供新的靶點(diǎn)和思路。

本研究結(jié)果顯示，在Resistin 高表達(dá)的乳腺癌組織中FSCN1 表達(dá)增高，Spearman 相關(guān)分析顯示Resistin 和FSCN1 蛋白表達(dá)顯著正相關(guān)。結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，我們推測(cè)乳腺癌中Resistin 及其下游信號(hào)通路可能對(duì)FSCN1 存在正性調(diào)控作用。p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路是否可能介導(dǎo)了Resistin 對(duì)FSCN1 表達(dá)的調(diào)控有待進(jìn)一步研究。本研究生存分析結(jié)果顯示Resistin 和FSCN1 均高表達(dá)的乳腺癌患者5年平均生存期和總生存率顯著低于Resistin和FSCN1單一高表達(dá)者及Resistin 和FSCN1 均低表達(dá)者，提示Resistin 和FSCN1 均高表達(dá)的乳腺癌患者預(yù)后不良，它們高表達(dá)對(duì)患者預(yù)后的影響可能具有協(xié)同作用。因此，同時(shí)抑制Resistin和FSCN1 可能是抗乳腺癌治療的一個(gè)新的潛在可行的策略。

利益沖突：作者已申明文章無(wú)相關(guān)利益沖突。