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        膝關節(jié)骨性關節(jié)炎患者關節(jié)鏡術后血清miR-140、IL-1β、MMP-13水平變化及臨床意義

        2021-04-06 09:11:40白云鶴
        實驗與檢驗醫(yī)學 2021年6期
        關鍵詞:血清水平療效

        白云鶴

        (焦作市人民醫(yī)院關節(jié)外科,河南 焦作 454002)

        膝關節(jié)骨性關節(jié)炎(knee osteoarthritis,KOA)是一種常見的慢性退行性骨關節(jié)病,初期一般表現(xiàn)為關節(jié)痛、酸脹和不適,隨著病情進展,可出現(xiàn)關節(jié)積液、關節(jié)交鎖、O型腿或X型腿等[1-2]。關節(jié)鏡手術目前臨床常用的治療KOA的術式之一,可以利用關節(jié)器械通過小切口進入到關節(jié)腔,可以縮短手術切口,適用范圍廣,且術后疤痕攣縮不會影響關節(jié)活動,關節(jié)內部結構清晰可見,不遺漏[3]。微小核糖核酸-140 (microRNA-140,miR-140)是一種的非編碼小分子RNA,廣泛參與細胞的增殖、分化和凋亡。既往研究顯示,miR-140在冠心病及肺癌中出現(xiàn)異常表達[4-5]。然而miR-140在KOA患者中的表達情況尚未見相關文獻記載。 白細胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)是一種促炎細胞因子,能激活中性粒細胞和巨噬細胞吞噬入侵的病原體,釋放有毒的氧和氮自由基,參與抗病毒和抗感染的免疫過程[6]?;|金屬蛋白酶-13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)是基質金屬蛋白酶家族成員之一,在骨關節(jié)炎發(fā)展過程中起重要作用[7]。因此,本研究在采用節(jié)鏡手術治療KOA患者的基礎上,觀察關節(jié)鏡手術后KOA患者血清miR-140、IL-1β、MMP-13水平的變化,并分析該指標的變化與KOA患者療效的相關性,為術后治療方案調整提供一定的理論基礎。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選取2019年2月至2021年2月在本院收治的KOA患者120例,其中男性79例,女性41例,年齡47~73歲,平均(60.57±6.56)歲。納入標準:符合KOA診斷標準[8];患者及家屬了解并給予知情同意。排除標準:⑴類風濕性關節(jié)炎;⑵化膿性關節(jié)炎;⑶痛風性關節(jié)炎;⑷免疫性關節(jié)炎;⑸關節(jié)外傷;⑹嚴重軀體疾病。所有患者均采用關節(jié)鏡手術治療,根據術后1個月療效將其分為優(yōu)良組(n=88)和中差組(n=32)。經醫(yī)院倫理委員會通過。

        1.2 治療方法 所有患者均采用關節(jié)鏡手術治療。首先實施硬膜外麻醉,患者仰臥在手術臺上。大腿根部安裝下肢止血帶。準備好灌洗液并保持適當的壓力。碘伏常規(guī)消毒皮膚,鋪無菌巾。在膝部做外側或內側小切口1 cm至關節(jié)腔,屈膝90°置入關節(jié)鏡。通過關節(jié)鏡探查關節(jié)腔,然后去除游離體、骨刺和病變半月板。采用負壓吸引裝置徹底吸除關節(jié)腔內的殘留的組織碎片。術后徹底沖洗關節(jié)腔,取出器械并放置引流管。

        1.3 療效評估 術后1個月后進行臨床療效評估[9]。優(yōu):膝關節(jié)疼痛、腫脹及僵硬等臨床癥狀完全消失,功能基本恢復,可正常行走。良:膝關節(jié)疼痛基本消失,腫脹及僵硬等臨床癥狀明顯減輕,功能基本恢復,疲勞時可復發(fā)。中:膝關節(jié)疼痛、腫脹及僵硬等臨床癥較前略有減輕,疲勞時可反復發(fā)作。差:膝關節(jié)相關臨床癥狀和體征無改善,活動仍受限。

        1.4 觀察指標

        1.4.1 一般資料 根據研究目的,設計調查表,收集所有患者的一般資料,包括性別、年齡、病程、體質指數(body mass index,BMI)、病變部位、半月板破裂情況、KOA遺傳史、吸煙史、飲酒史、術后康復鍛煉情況、是否合并糖尿病及高血壓。

        1.4.2 膝關節(jié)關節(jié)活動度 采用疼痛視覺模擬評分(Visual Analogue Scale/Score,VAS)[10]評估術前和術后1個月的疼痛程度。方法是使用一條長約10cm的游動標尺,一面標有10個刻度,兩端分別為“0”分端和“10”分端,0分表示無痛,10分表示最劇烈的無法忍受的疼痛。采用奎森功能演算指數(Lequesne)[11]評分來評價術前及術后1個月的病情及關節(jié)功能。量表分為疼痛或不適5項(0~8分)、行走能力(0~8分),生活能力(0~8分)3個部分。得分越高,說明膝骨性關節(jié)炎越嚴重。采用膝關節(jié)關節(jié)活動度(range of motion,ROM)[12]來評價術前和術后1個月的膝關節(jié)活動度。用膝關節(jié)量角器測量膝關節(jié)ROM,以股骨外髁為軸,以股骨縱軸為固定臂,以腓骨小頭與外踝的連線為移動臂,測量膝關節(jié)屈伸范圍,設定膝關節(jié)伸直時活動度為0°。

        1.4.3 血清學指標 分別于術前、術后1個月清晨抽取空腹靜脈血3 ml,室溫下放置2 h,然后1000×g離心20 min,取上清待檢。采用實時熒光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)法測定血清miR-140表達水平。按照上??泼羯锟萍加邢薰旧a的miR-140試劑盒中的操作步驟,提取血清總RNA。選用上海研卉生物科技有限公司提供的逆轉錄試劑盒,將血清總RNA逆轉錄為cDNA。以U6作為內參基因(上游引物:5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′;下游引物:5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′)。miR-140引物(上游引物::5′-ACACTCCAGCTGGGTAC CACAGGGTAG-3′;下游引物:5′-CTCAACTGGTGTCGTGGAGT-3′)。引物由赫澎(上海)生物科技有限公司提供。反應條件:25℃5 min,42℃30 min,85℃5 min,滅活逆轉錄酶活性,用去離子水將cDNA稀釋10倍后-20℃保存。采用上海艾研生物科技有限公司生產的ABI實時熒光定量PCR儀QuantStudio 3進行qRT-PCR操作。程序設定為:95℃預熱3 min,(95℃30 s,60℃30 s,72℃15 s)35個循環(huán),72℃5 min終止反應。采用2-ΔΔCt算法計算miR-140相對表達水平。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定檢測IL-1β水平,試劑盒購自南京賽泓瑞生物科技有限公司。按照試劑盒操作說明,每孔加標準品或樣品100μl。除去液體。加入100μl生物素化檢測抗體,37℃孵育1 h。除去液體。加入100μl辣根過氧化物酶偶聯(lián)物。37℃孵育30 min。吸出并沖洗5次。加入90μl底物試劑。37℃孵育15 min。加入50μl停止液。立即在450 nm處讀取光密度值。計算IL-1β濃度。同法檢測MMP-13水平。試劑盒購自南京卡米洛生物工程有限公司。

        1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計學軟件進行數據分析,滿足正態(tài)分布且方差齊的計量資料采用(±s)表示,采用兩樣本獨立t檢驗比較組間差異,計數資料用率表示,采用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結果

        2.1 KOA患者關節(jié)鏡術后的臨床療效 120例KOA患者術后1個月,優(yōu)52例,良36例,中30例,差2例。優(yōu)良率為73.33%(88/120)、中差率為26.67%(32/120)。

        2.2 兩組KOA患者一般資料比較 優(yōu)良組患者在年齡、病程、BMI、半月板破裂、吸煙史、術后康復鍛煉及合并糖尿病方面與中差組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

        表1 兩組KOA患者一般資料比較(n,%)

        2.3 兩組KOA患者的VAS評分、SAS評分與Lequesne指數比較 術后1個月,優(yōu)良組KOA患者的VAS評分與Lequesne指數評分均低于中差組(P<0.05),優(yōu)良組KOA患者的ROM大于中差組(P<0.05)。見表2。

        表2 兩組KOA患者的VAS評分與SAS評分比較(±s)

        表2 兩組KOA患者的VAS評分與SAS評分比較(±s)

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        2.4 兩組KOA患者的血清學指標比較 術后1個月,優(yōu)良組KOA患者的miR-140表達水平高于中差組(P<0.05),優(yōu)良組KOA患者的IL-1β、MMP-13水平均低于中差組(P<0.05)。見表3。

        表3 兩組KOA患者的血清學指標比較(±s)

        表3 兩組KOA患者的血清學指標比較(±s)

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        2.5 血清miR-140、IL-1β、MMP-13水平變化與ROM之間的相關性分析 Spearson相關性分析顯示,血清miR-140、IL-1β、MMP-13水平變化與ROM呈顯著的正相關關系(r=0.342,P<0.05)。

        2.6 血清miR-140表達與IL-1β、MMP-13之間的相關性分析Spearson相關性分析顯示,血清miR-140表達與IL-1β、MMP-13呈顯著的正相關關系(r=0.331,P<0.05)。

        2.7 血清miR-140、IL-1β、MMP-13對KOA患者療效的預測價值 將兩組納入ROC曲線分析,血清miR-140、IL-1β、MMP-13及 聯(lián) 合 檢 測 預 測KOA患者療效的曲線下面積(areas under the curve,AUC)分別為0.745、0.712、0.660、0.903(P<0.05)。見圖1、表4。

        圖1 血清miR-140、IL-1β、MMP-13與KOA患者療效的ROC曲線測量值

        表4 血清miR-140、IL-1β、MMP-13水平與KOA患者療效的ROC曲線特征

        3 討論

        KOA是一種以關節(jié)軟骨變性、破壞及骨質增生為特征的慢性關節(jié)疾病[13]。臨床上以中老年患者最為常見,女性發(fā)病率(70%)高于男性[14]。典型的癥狀是膝關節(jié)疼痛和腫脹,隨著時間的推移會逐漸發(fā)展,并可能導致膝關節(jié)畸形[15]。KOA的發(fā)生對患者的日常生活有嚴重的影響,尤其是行走和上下樓梯時會更加痛苦。因此,要及早發(fā)現(xiàn),及時治療,避免出現(xiàn)關節(jié)畸形等情況。

        本研通過關節(jié)鏡手術的方式來治療KOA患者,結果顯示,120例KOA患者術后1個月,關節(jié)功能恢復的優(yōu)良率為73.33%,說明關節(jié)鏡手術對KOA患者有較好的療效。關節(jié)鏡手術是關節(jié)疾病中常用的一種微創(chuàng)技術,通過自然關節(jié)間隙,打開兩個直徑5 mm左右的通道,在關節(jié)內置入棒狀光學儀器,然后在顯示器上反映關節(jié)的細微結構,在關節(jié)鏡的監(jiān)視下取出關節(jié)病變滑膜、游離體及其他病理物質,具有創(chuàng)傷小,術后愈合效果好等優(yōu)點[16]。本研究結果顯示,優(yōu)良組KOA患者在年齡、病程、BMI、半月板破裂、吸煙史、術后康復鍛煉及合并糖尿病方面與中差組相比,差異顯著,提示以上因素可能是影響KOA患者療效的危險因素。本研究結果顯示,術后1個月,優(yōu)良組KOA患者的VAS評分與Lequesne指數評分均低于中差組,提示關節(jié)鏡手術可以減輕患者的疼痛,改善患者的關節(jié)功能。既往實踐證明,關節(jié)鏡下關節(jié)成形術能夠顯著緩解KOA患者的臨床癥狀,并能有效減輕膝關節(jié)疼痛,有較好的治療效果[17]。因關節(jié)鏡手術是一種創(chuàng)傷小、安全有效、疼痛少、易于被患者接受的微創(chuàng)治療方法,且術后早期即可活動和使用肢體,關節(jié)功能恢復快,可有效緩解患者的癥狀。同時本研究結果顯示,優(yōu)良組KOA患者的ROM大于中差組,提示關節(jié)鏡手術可改善患者的關節(jié)活動范圍。由于關節(jié)鏡手術早期患者即可活動肢體,關節(jié)功能恢復較快,因而關節(jié)活動范圍大于中差組。

        本研究結果顯示,術后1個月,優(yōu)良組KOA患者miR-140的表達水平高于中差組。miR-140在軟骨細胞中呈特異性高表達,在維持軟骨細胞平衡的同時,調節(jié)人類軟骨形成和發(fā)育[18]。既往研究顯示,miR-140參與骨關節(jié)炎軟骨的損傷修復[19]。結合本研究結果說明,miR-140高表達有利于KOA患者的軟骨修復。本研究結果顯示,優(yōu)良組KOA患者術后1個月的IL-1β、MMP-13水平均低于中差組,提示關節(jié)鏡手術可減輕KOA患者的炎癥反應。IL-1β由先天免疫系統(tǒng)的前哨細胞,即單核細胞和巨噬細胞產生,對免疫應答的組織修復中顯示出較大優(yōu)勢。當機體受到致病菌、病毒及其類似物刺激時,IL-1β分子可迅速激活,以不同形式參與抗病毒和抗感染的免疫過程[20]。IL-1β水平可反映機體炎癥疾病的嚴重程度,提示關節(jié)鏡手術可有效降低機體的炎癥反應。在骨和軟骨的發(fā)育過程中,MMP-13參與了關節(jié)炎中關節(jié)損傷和破壞的過程。MMP-13水平的降低有利于KOA患者關節(jié)損傷的修復。Spearson相關性分析顯示,血清miR-140、IL-1β、MMP-13水平變化與ROM呈顯著的正相關關系,提示血清miR-140、IL-1β、MMP-13水平的變化會直接影響KOA患者的術后康復。ROC曲線分析結果顯示,血清miR-140、IL-1β、MMP-13及聯(lián)合檢測預測KOA患者療效的AUC分別為0.745、0.712、0.660、0.903,提示臨床可根 據 血 清miR-140、IL-1β、MMP-13水 平 預 測KOA患者療效。

        綜上所述,關節(jié)鏡手術治療KOA患者,可減輕患者的疼痛、焦慮,提高血清miR-140表達水平,降低血清IL-1β、MMP-13水平,改善關節(jié)活動度。血清miR-140、IL-1β、MMP-13水平對KOA患者療效有較高的預測價值。

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