吳文冰，陳雯，林一

（福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)科 福建省立醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 福州 35001）

慢性腎小球腎炎是慢性腎病和腎衰竭的主要病因，臨床表現(xiàn)為各種不同的組織學(xué)類(lèi)型、與先天性腎源性免疫反應(yīng)有關(guān)的嚴(yán)重腎損害及相應(yīng)的臨床表現(xiàn)，越來(lái)越多的研究表明，免疫因素在慢性腎小球腎炎的發(fā)病及發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，故此我們通過(guò)檢測(cè)慢性腎小球腎炎患者體液免疫和細(xì)胞免疫，來(lái)分析慢性腎小球腎炎患者免疫系統(tǒng)狀況，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 慢性腎小球腎炎組(Ⅰ組)選取2020年1月到9月在我院腎內(nèi)科住院的慢性腎小球腎炎患者100例，男65例，女35例，平均年齡(45.08±17.96)歲，所有患者均符合1992年原發(fā)性腎小球疾病分型與治療及診斷標(biāo)準(zhǔn)專(zhuān)題座談會(huì)紀(jì)要的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除了乙肝相關(guān)性、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、過(guò)敏性紫癜等所有可引起慢性腎炎綜合征的繼發(fā)病因。

1.1.2 正常對(duì)照組（Ⅱ組）選取同期在我院健康體檢中心體檢的患者50例，男30例，女20例，平均年齡(35.12±10.23)歲，體格檢查、胸片、心電圖、腹部B超無(wú)明顯異常。血常規(guī)、尿常規(guī)、糞便常規(guī)、血沉、C-反應(yīng)蛋白、腫瘤標(biāo)志物、凝血功能及自身抗體正常，心肝腎肺功能相關(guān)指標(biāo)都正常，乙肝表面抗原陰性，排除妊娠、哺乳、體質(zhì)指數(shù)(BMI)大于28的肥胖者的樣本。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集 所有檢測(cè)對(duì)象在清晨、安靜狀態(tài)下空腹采集靜脈血，分別注入含促凝劑的真空采血管和含EDTA-K2抗凝的真空采血管中，含EDTA-K2抗凝的真空采血管采集后迅速、輕柔顛倒混勻，避免血液凝固，含促凝劑的真空采血管在采血后2 h內(nèi)分離得無(wú)溶血的血清，所有標(biāo)本均于6 h內(nèi)完成檢測(cè)。

1.2.2 體液免疫檢測(cè) 體液免疫檢測(cè)血清中的IgG、IgA、IgM、C3和C4。采用德國(guó)西門(mén)子的BNⅡ特定蛋白檢測(cè)儀檢測(cè)，所有定標(biāo)品、質(zhì)控品和試劑均為德國(guó)西門(mén)子原裝進(jìn)口試劑。在保證儀器狀態(tài)正常，質(zhì)控在控的情況下，將含促凝劑的真空采血管分離得到的血清上機(jī)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 細(xì)胞免疫檢測(cè) 細(xì)胞免疫檢測(cè)全血中的CD3、CD4、CD8、CD19（B細(xì)胞）和CD16+56+（NK細(xì)胞）。采用美國(guó)BD公司的FACSCalibur流式細(xì)胞儀檢測(cè)，試劑為美國(guó)BD公司的BD Multitest IMK Kit，定標(biāo)品為美國(guó)BD公司的BD Calibrite 3-colour Kit和BD Calibrite APC beeds，質(zhì)控品為美國(guó)貝克曼公司的IMMUNO-TROL試劑盒，細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)采用美國(guó)BD公司的BD Trucount Tubes。將含EDTA-K2抗凝的真空采血管充分混勻后，嚴(yán)格按照BD Multitest IMK Kit操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，在保證儀器狀態(tài)正常，質(zhì)控在控的情況下，將處理過(guò)的標(biāo)本嚴(yán)格按照流式細(xì)胞儀操作手冊(cè)上機(jī)檢測(cè)。

1.3統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 19.0軟件分析。正態(tài)性檢驗(yàn)采用Kolmogorov-Smimov檢驗(yàn)，性別間差異采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，組間比較采用t檢驗(yàn)，指標(biāo)間比較采用方差分析，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 正態(tài)性、性別間差異及指標(biāo)間統(tǒng)計(jì) 正態(tài)性檢驗(yàn)采用Kolmogorov-Smimov檢驗(yàn)，性別間差異采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，年齡間差異和指標(biāo)間比較采用方差分析，檢驗(yàn)結(jié)果P＞0.05，表明所有數(shù)據(jù)為正態(tài)性分布、年齡間差異、指標(biāo)間及性別間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.2 體液免疫檢測(cè)結(jié)果 與正常對(duì)照組比較，慢性腎小球腎炎組的IgG、IgA、IgM、C3和C4都明顯降低（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

表1 體液免疫檢測(cè)結(jié)果（±s）

表1 體液免疫檢測(cè)結(jié)果（±s）

注：*代表與Ⅱ組相比P＜0.05。

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2.3 細(xì)胞免疫檢測(cè)結(jié)果 與正常對(duì)照組比較，慢性腎小球腎炎組的CD3、CD4和CD8百分比明顯增加（P＜0.05），而絕對(duì)計(jì)數(shù)卻減少，其中以CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)降低最明顯（P＜0.05），CD19和NK細(xì)胞百分比和絕對(duì)計(jì)數(shù)均明顯降低（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 細(xì)胞免疫百分比及絕對(duì)計(jì)數(shù)檢測(cè)結(jié)果（±s）

表2 細(xì)胞免疫百分比及絕對(duì)計(jì)數(shù)檢測(cè)結(jié)果（±s）

注：*代表與Ⅱ組相比P＜0.05。

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3 討論

慢性腎小球腎炎通常由糖尿病及其并發(fā)癥、高血壓、代謝綜合征及自身免疫性疾病引起的，表現(xiàn)為多種并發(fā)癥，包括心血管疾病、高血壓、急性腎損傷、骨骼疾病、抑郁、衰弱及免疫缺陷，而免疫系統(tǒng)功能障礙是其中最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一。在慢性腎小球腎炎發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，免疫系統(tǒng)通過(guò)不斷促進(jìn)全身性炎癥反應(yīng)而發(fā)揮重要作用[1-2]。

體液免疫是機(jī)體免疫系統(tǒng)重要組成部分，通過(guò)檢測(cè)血清中的IgG、IgA和IgM、水平，可以反映機(jī)體體液免疫功能,本實(shí)驗(yàn)中慢性腎小球腎炎患者的IgG、IgA和IgM都比正常人明顯降低（P＜0.05），表明慢性腎小球腎炎患者體液免疫功能降低，導(dǎo)致其容易發(fā)生感染等并發(fā)癥。慢性腎小球腎炎患者補(bǔ)體也較正常人明顯降低（P＜0.05），尤其C3只有正常人一半左右，這與補(bǔ)體在慢性腎小球腎炎中的過(guò)度激活有關(guān)。補(bǔ)體激活的替代途徑中C3轉(zhuǎn)化酶（C3bBb）的形成受因子H和I調(diào)控，而針對(duì)這些因子的突變或自身抗體可以導(dǎo)致C3轉(zhuǎn)化酶活性增強(qiáng)，導(dǎo)致活化的C3水平明顯增加，另外，IgG自身抗體、C3腎病因子（C3 nephritic factor）和穩(wěn)定C3轉(zhuǎn)化酶（stabilizes C3 convertase）等都會(huì)阻止其失活，從而導(dǎo)致補(bǔ)體系統(tǒng)過(guò)度激活，補(bǔ)體被大量消耗，補(bǔ)體激活產(chǎn)生的碎片在腎小球大量沉積，激活下游的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)和促進(jìn)白細(xì)胞浸潤(rùn)，加重慢性腎小球腎炎[3-4]。

淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫的重要組成部分，其在慢性腎小球腎炎發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。淋巴細(xì)胞包括T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞又可以分為CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞（CTL細(xì)胞），前者又稱(chēng)為T(mén)輔助細(xì)胞（Th細(xì)胞），后者又稱(chēng)為殺傷性T細(xì)胞（CTL細(xì)胞）。Th細(xì)胞參與免疫應(yīng)答中抗原提呈和免疫細(xì)胞的激活。CTL細(xì)胞在慢性腎小球腎炎中的作用比較復(fù)雜，一方面它可以像NK細(xì)胞一樣清除感染的和惡變的細(xì)胞，另一方面，它可以被特異的腎臟自身抗原所激活，引起局部的損傷和炎癥，并且激活的CTL細(xì)胞可以吸引更多的CTL細(xì)胞到達(dá)損傷部位，引起腎臟更大損傷以及釋放更多的特異的腎臟自身抗原，形成惡性循環(huán)[5-9]。

腎臟NK細(xì)胞可通過(guò)分泌干擾素-γ誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化，從而參與急性腎臟損傷。NK細(xì)胞在慢性自身免疫性腎病中具有重要作用。它們可以被樹(shù)突狀細(xì)胞刺激并釋放細(xì)胞因子，如IFN-γ，最終促進(jìn)腎臟疾病的進(jìn)展。腎損傷后，腎小管上皮細(xì)胞產(chǎn)生骨橋蛋白（osteopontin），將NK細(xì)胞吸引到損傷部位，引起腎功能不全[10-12]。B細(xì)胞在慢性腎小球腎炎中的作用還不是很明確，在動(dòng)物模型中，IgM抗體似乎限制了腎臟的修復(fù)，B細(xì)胞的缺乏可以促進(jìn)腎臟的修復(fù)。有報(bào)道，B細(xì)胞數(shù)量增加導(dǎo)致腎損傷，損害腎臟修復(fù)[13-15]。

我們實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，慢性腎小球腎炎患者CD3、CD4和CD8百分比明顯增加（P<0.05），而絕對(duì)計(jì)數(shù)卻減少，其中CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)降低最明顯（P<0.05），B細(xì)胞和NK細(xì)胞百分比和絕對(duì)計(jì)數(shù)均明顯降低（P<0.05）。由于慢性腎小球腎炎患T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞數(shù)量都減少，提示他們細(xì)胞免疫功能降低，同時(shí)由于B細(xì)胞和NK細(xì)胞百分比明顯減少，導(dǎo)致CD3、CD4和CD8百分比假性增加。

綜上所述，慢性腎小球腎炎患者體液免疫和細(xì)胞免疫都比正常人降低，導(dǎo)致其容易產(chǎn)生感染并發(fā)癥，從而增加其死亡的風(fēng)險(xiǎn)。因此，及時(shí)監(jiān)測(cè)慢性腎小球腎炎患者免疫功能狀態(tài)，對(duì)其治療具有重要的作用。