郭長婕，邢夢思，李雨哲，賽昊男，楊 柳

(長春大學 食品科學與工程學院，吉林 長春 130000)

黑果腺肋花楸，別名野櫻莓或不老莓，多年生落葉薔薇科灌木，原產(chǎn)于美國東北部，目前在我國東北地區(qū)大量種植。黑果腺肋花楸果實中富含白藜蘆醇、多酚和花色苷等活性物質，其果實雖然能夠生食，但是想要最大程度利用其營養(yǎng)價值則需要加工成保健食品、果醬、飲料等產(chǎn)品。

白藜蘆醇的化學名為 3，4，5-三羥基二苯乙烯，屬于單寧質多酚，在水中的溶解度較低，易溶于有機溶劑。白藜蘆醇具有治療心力衰竭、防癌、調節(jié)雌激素和降低心腦血管疾病發(fā)病率等功能，在心腦血管疾病和癌癥的防治方面具有良好的發(fā)展前景。

目前，提取白藜蘆醇的方法主要有超聲波輔助法、超臨界CO2萃取法、酶解法、溶劑提取法、微波輔助萃取法等。采用超聲波輔助法提取白藜蘆醇，操作簡單，提取時間短，得到的樣品白藜蘆醇含量高。本研究以黑果腺肋花楸為原料，采用超聲波輔助法提取白藜蘆醇，以期為研究開發(fā)相關保健產(chǎn)品提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黑果腺肋花楸：市售。

白藜蘆醇標準品(純度>98%)，無水乙醇，甲醇。

1.2 儀器與設備

101-3A電熱恒溫鼓風干燥箱，JA1003分析天平，超聲波儀器，TD4C離心機，752紫外可見分光光度計。

1.3 實驗方法

1.3.1 白藜蘆醇標準曲線的繪制

1.3.1.1 標準曲線樣品的制備

準確稱取1000 μg白藜蘆醇標準品于10 mL容量瓶中，用60%甲醇水溶液定容至刻度，得到濃度為100 μg/mL的白藜蘆醇標準品溶液，樣品冷藏備用。

1.3.1.2 標準曲線的繪制

準確稱取1000 μg白藜蘆醇標準品于10 mL容量瓶中定容，得到濃度為100 μg/mL的白藜蘆醇儲備液。將儲備液配制成2、4、6、8、10 μg/mL的標準液系列。在306 nm處測吸光度，繪制標準曲線(見圖1)。得到回歸方程為y=0.3265x+0.1089(R2=0.9875)，其中，y為吸光度值，x為白藜蘆醇標準品的質量濃度。

圖1 白藜蘆醇標準曲線

1.3.2 單因素實驗

1.3.2.1 乙醇濃度對白藜蘆醇提取量的影響

準確稱取2.0 g黑果腺肋花楸粉末5份，進行超聲輔助提取，乙醇濃度分別為50%、60%、70%、80%、90%；將提取所得產(chǎn)物離心15 min，取離心后的液體1.2 mL，用70%乙醇定容至10 mL；取2 mL上述溶液，用甲醇定容至25 mL；最后使用紫外可見分光光度計測得吸光度，帶入線性回歸方程中求出白藜蘆醇提取量，確定最佳乙醇濃度。

1.3.2.2 提取時間對白藜蘆醇提取量的影響

準確稱取2.0 g黑果腺肋花楸粉末5份，在最佳乙醇濃度條件下進行超聲輔助提取，分別提取10、30、50、70、90 min?？疾焯崛r間對白藜蘆醇提取量的影響，確定最佳提取時間。

1.3.2.3 提取溫度對白藜蘆醇提取量的影響

準確稱取2.0 g黑果腺肋花楸粉末5份，在最佳乙醇濃度和提取時間條件下進行超聲輔助提取，提取溫度分別為35、40、45、50、55 ℃?？疾焯崛囟葘Π邹继J醇提取量的影響，確定最佳提取溫度。

1.3.2.4 料液比對白藜蘆醇提取量的影響

準確稱取2.0 g黑果腺肋花楸粉末5份，在最佳乙醇濃度、提取時間和提取溫度條件下進行超聲輔助提取，料液比分別為1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25?？疾炝弦罕葘Π邹继J醇提取量的影響，確定最佳料液比。

1.3.3 正交試驗

在單因素實驗的基礎上，進行正交試驗，對提取工藝進行優(yōu)化，正交試驗因素水平見表1。

表1 正交試驗因素水平

2 結果與分析

2.1 單因素實驗結果

2.1.1 乙醇濃度對白藜蘆醇提取量的影響

從圖2可知，當乙醇濃度為70%時，白藜蘆醇提取量達到最大值；隨著乙醇濃度的繼續(xù)增加，白藜蘆醇提取量逐漸降低。可能濃度過高的乙醇會對白藜蘆醇的結構造成破壞，故乙醇濃度應選擇70%。

圖2 乙醇濃度對白藜蘆醇提取量的影響

2.1.2 提取時間對白藜蘆醇提取量的影響

從圖3可知，當提取時間為30 min時，白藜蘆醇提取量達到最大值；隨著提取時間的繼續(xù)延長，白藜蘆醇提取量反而減少?？赡馨邹继J醇已被完全提取，延長時間并不能使提取量增加，故提取時間應選擇30 min。

圖3 提取時間對白藜蘆醇提取量的影響

2.1.3 提取溫度對白藜蘆醇提取量的影響

從圖4可知，當提取溫度為 45 ℃時，白藜蘆醇提取量達到最大值；隨著提取溫度的繼續(xù)升高，白藜蘆醇提取量逐漸降低。可能溫度過高會造成白藜蘆醇的損失，故提取溫度應選擇45 ℃。

圖4 提取溫度對白藜蘆醇提取量的影響

2.1.4 料液比對白藜蘆醇提取量的影響

從圖5可知，當料液比為1∶10時，白藜蘆醇提取量達到最大值；隨著料液比的繼續(xù)增加，白藜蘆醇提取量逐漸降低。因此，料液比應選擇1∶10。

圖5 料液比對白藜蘆醇提取量的影響

2.2 正交試驗結果

從表2可知，各因素對白藜蘆醇提取量的影響順序為乙醇濃度>料液比>提取溫度>提取時間。白藜蘆醇的最佳提取工藝為乙醇濃度70%、料液比1∶15、提取溫度45 ℃、提取時間50 min，在此條件下，白藜蘆醇提取量為1.702 μg/mL。

3 結論

采用超聲波技術對黑果腺肋花楸中白藜蘆醇的提取工藝進行研究。通過單因素實驗和正交試驗獲得最佳提取工藝參數(shù)：乙醇濃度70%、料液比1∶15、提取溫度45 ℃、提取時間50 min，在此條件下，白藜蘆醇提取量為1.702 μg/mL。超聲波輔助法操作簡單，提取時間短，得到的樣品白藜蘆醇含量高，可為相關產(chǎn)品的開發(fā)提供理論依據(jù)。

表2 正交試驗結果