單泓，李建斌，別立莉，劉敏，李曉暉，王姣杰

(河南省紅十字血液中心 成分室，河南 鄭州 450000)

新鮮冰凍血漿(fresh frozen plasma，F(xiàn)FP)最好在6 h(ACD保養(yǎng)液)或者8 h(CPDA保養(yǎng)液)內制備，2012年新的國家標準將FFP制備時間延長至18 h[1]，采血后8～18 h內制備出的FFP，用于制備冷沉淀凝血因子(簡稱冷沉淀)效果如何，目前說法不一[2-4]。冷沉淀含有豐富的凝血因子Ⅷ(blood coagulation factor Ⅷ，F(xiàn)Ⅷ)、纖維蛋白原(fibrinogen，F(xiàn)ib)等，在臨床被廣泛用于血友病、手術后出血等的治療。冷沉淀中的FⅧ不穩(wěn)定，易受制備過程中時間、溫度及制備方法等的影響，從而產生較大的質量差異，影響臨床應用效果。為制備出高質量的冷沉淀，本研究選取采血后8 h內及8～18 h制備完成的FFP，分別采用全自動冷沉淀制備儀和低溫融化箱兩種設備進行冷沉淀的制備，探析不同制備方法對冷沉淀質量的影響及8～18 h內所制FFP制備冷沉淀的效果。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器所用試劑和儀器包括FⅧ活性測定試劑盒(希森美康，批號56500325)、Fib測定試劑盒(希森美康，批號547688)、全自動血凝分析儀(希森美康，型號CA-510)、大容量低溫離心機(西格瑪)、恒溫搖擺式融化箱(CT-4T.6C)、冷沉淀制備儀(沃塘)、威高速凍機、河南省紅十字血液中心智能一體化平臺(唐山啟奧科技有限公司)。

1.2 材料隨機選取2019年12月至2020年1月鄭州地區(qū)采集的400 mL全血(CPDA保養(yǎng)液)240袋，采集后冷藏保存，其中120袋于8 h內制備成FFP(A組)，120袋于8～18 h制備成FFP(B組)，離心條件為：溫度2～6 ℃，4 100g，離心18 min。分離出每袋200 mL的血漿，速凍后保存48 h備用。

1.3 制備方法取出保存的A組和B組FFP，每組隨機選取60袋采用恒溫搖擺式水浴箱制備冷沉淀，60袋用全自動冷沉淀制備儀制備冷沉淀。

1.3.1恒溫搖擺式水浴箱法 從低溫冰箱中取出FFP，于室溫下放置5 min后置于融化箱中，轉移空袋置于融化箱外，啟動融化箱，使箱體充滿水，血漿袋完全浸泡于1～6 ℃水中，待血漿部分溶解后松開血漿導管夾，使融化的血漿通過虹吸效應進入空袋中。肉眼觀察，當原血漿袋內白色絮狀物剩余量相當于冷沉淀所需量時，關閉血漿導管夾，阻斷虹吸，稱重并將容量調整至40～50 mL，熱合斷開，將獲取的冷沉淀迅速放入血漿速凍機中速凍后于-18 ℃以下保存。

1.3.2全自動冷沉淀制備儀法 從-18 ℃以下低溫冰箱中取出FFP，于室溫下放置3～5 min，將原料血漿放入全自動冷沉淀制備儀的稱重盒稱重后，將血漿袋置于1～6 ℃水浴槽融化，轉移袋留在稱重盒內，將血袋導管卡入導管夾，水浴槽中的冰凍血漿在融化過程中通過虹吸作用，從高位的血漿袋流至低位轉移袋，當血漿袋中剩余重量達到預設值時，導管夾自動夾閉血袋導管，并通過聲音報警及按鈕亮燈提醒制備已完成。操作人員取出冷沉淀血袋和轉移血漿袋，熱合離斷，粘貼產品標簽，將冷沉淀放入全自動水平接觸式血漿速凍機中速凍后于-18 ℃以下保存。制備過程中，通過采用智能一體化平臺與冷沉淀制備儀進行對接，對全自動冷沉淀制備儀運行情況進行實時監(jiān)控，設置關鍵項數(shù)據(jù)警戒線，可展示制備溫度、制備人員、產品重量、制備時間及制備流程等，出現(xiàn)異常實時報警，提醒工作人員及時干預，并實時提取Shinow 9.0中冷沉淀制備的有效數(shù)據(jù)，對數(shù)據(jù)進行分析、展示。

1.4 檢測方法將待檢測的冷沉淀凝血因子置于37 ℃恒溫水浴箱中，完全融化充分混勻后將袋內血漿擠入至與血袋相連的導管內，熱合并斷開導管，取導管中的樣品，按照試劑盒說明書進行檢測。

1.5 觀察指標FⅧ含量、FⅧ含量符合率、Fib含量、Fib含量符合率。

2 結果

2.1 采血后8 h內制備的FFP，采用制備儀與水浴箱制備的冷沉淀質量比較以采血后8 h內制備的FFP為原料，采用全自動冷沉淀制備儀和恒溫水浴箱制備的冷沉淀均符合國家標準。制備儀組FⅧ含量符合率、Fib含量高于水浴箱組(P<0.05)，兩組FⅧ含量、Fib含量符合率相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 A組制備儀與水浴箱制備的冷沉淀質量比較

2.2 采血后8～18 h內制備的FFP，采用制備儀與水浴箱制備的冷沉淀質量比較對于采血后8～18 h內制備的FFP，采用恒溫水浴箱制備的冷沉淀部分符合國家標準，采用全自動冷沉淀制備儀制備的冷沉淀全部符合國家標準。制備儀組FⅧ含量、FⅧ含量符合率、Fib含量、Fib含量符合率均高于水浴箱組(P<0.05)。見表2。

表2 B組制備儀與水浴箱制備的冷沉淀質量比較

2.3 A組與B組制備儀制備的冷沉淀質量比較根據(jù)冷沉淀制備儀制備結果，用A組FFP制備的冷沉淀FⅧ含量、FⅧ含量符合率、Fib含量符合率高于B組(P<0.05)，兩組Fib含量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 A組與B組冷沉淀制備儀制備的冷沉淀 質量比較

3 討論

冷沉淀是由FFP在1～6 ℃的條件下融化后，分離出來的白色絮狀沉淀物，主要富含F(xiàn)Ⅷ、Fib等活性物質，由于純度、濃度高等優(yōu)點，已在臨床廣泛應用。冷沉淀的質量關乎臨床輸注和治療效果，影響冷沉淀質量的因素很多，如制備方法、溫度、時間、原料血漿等[5]，如何提高或保證冷沉淀的質量，國內外專家學者進行了多方面的探索。采血后，F(xiàn)Ⅷ含量隨著時間推移不斷減少，在冷鏈保證的前提下，18 h內制備的FFP，其FⅧ能達到質量標準要求，這是18 h內制備的FFP用于制備冷沉淀的主要依據(jù)[6]。

為制備出高質量的冷沉淀，近年來本研究團隊一直致力于冷沉淀制備工藝、流程、方法方面的探索。2019年之前主要采用恒溫水浴箱制備冷沉淀，利用虹吸原理，邊融化邊虹吸已融化的血漿至轉移袋，最后剩余40～50 mL的沉淀物，即為冷沉淀。制備過程中，嚴密觀察，優(yōu)化流程，盡可能縮短制備時間，制備好的冷沉淀及時置入速凍冰箱，縮短室內放置時間，預防不穩(wěn)定凝血因子衰減，由此有效保證冷沉淀的質量。但是，采用恒溫水浴箱制備冷沉淀，操作人員需不斷將冷沉淀取出觀察，憑經(jīng)驗和主觀感覺判斷容量，容量過多時需重新放入繼續(xù)融化，取、放血袋的操作，易導致血袋晃動，使已附著在冰漿上的有效成分被虹吸入冷上清血袋。另外，水浴箱各部分溫度不均衡，制備過程中人為干擾較多，這些因素均會直接影響冷沉淀中FⅧ、Fib的含量和回收率[7-8]，而采用全自動冷沉淀制備儀可有效克服上述不足[9-10]。2019年，河南省紅十字血液中心實現(xiàn)冷沉淀制備自動化、信息化，通過全自動冷沉淀制備儀與智能一體化平臺進行對接，實時監(jiān)控融化溫度及血漿容量，記錄和保存制備過程中的關鍵數(shù)據(jù)，讓冷沉淀制備過程更加精準流暢。

為得到更直觀的數(shù)據(jù)，給同行提供參考，本研究比較了全自動冷沉淀制備儀與恒溫水浴箱制備的冷沉淀的質量。研究結果顯示：對于8 h內制備的FFP，采用全自動冷沉淀制備儀與恒溫水浴箱制備的冷沉淀均符合國家標準，但全自動制備儀制備的冷沉淀質量優(yōu)于后者；對于8～18 h內制備的FFP，采用全自動冷沉淀制備儀制備的冷沉淀全部符合國家標準，而采用恒溫水浴箱制備的冷沉淀僅部分符合國家標準。本研究結果表明，采用全自動制備儀制備冷沉淀效果優(yōu)于恒溫水浴箱，全自動制備儀制備冷沉淀的方式值得推薦。2012年，新的國家標準將FFP的制備時間延長到18 h，但以采血后8～18 h內制備出的FFP為原料制備的冷沉淀質量如何，文獻報道較少。本研究比較了A組與B組冷沉淀的質量，結果前者FⅧ含量高于后者，兩組Fib含量差異無統(tǒng)計學意義。以往的研究證實，F(xiàn)Ⅷ是一種不穩(wěn)定因子，其活性會隨著時間延長而顯著降低，F(xiàn)ib雖比較穩(wěn)定，但亦有文獻報道其含量隨著分離時間的延長呈下降趨勢[11-12]，與本研究結果一致。

綜上所述，為保證冷沉淀質量，采血后應盡可能在8 h內制備出FFP，且采用全自動冷沉淀制備儀制備的冷沉淀質量更佳。