李月華

（山東省樂陵市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，山東 樂陵 253600）

隨著動物檢疫工作的不斷創(chuàng)新以及完善，在動物疫病防控管理中的成效也在不斷提升，僅僅依靠傳統(tǒng)患病動物外貌觀察的檢驗方式，已經(jīng)難以符合當前的動物疫病檢驗檢測要求，需要通過病理實驗室檢測工作的開展，進一步強化檢疫工作的質量，為了能夠符合各地區(qū)檢疫工作的要求，需要不斷提升檢驗檢測速度，提高檢驗準確率，加快檢驗報告獲取速度。

1 黃疸、黃脂肉的診斷

黃疸以及黃脂肉的診斷方式相同，可以同時進行，明確檢測之后對脂肪樣本采集并剪碎放置試管內(nèi)，加入5mL5%的氫氧化鈉溶液進行適當震蕩后煮沸1min，使用流水對試管進行冷卻，加入5mL乙醚以及膽汁色素，放入試管內(nèi)進行進一步的震蕩，放置在常溫環(huán)境下進行靜置，待溶液穩(wěn)定后觀察上層的乙醚中是否有胡蘿卜素融入，如其顏色轉變?yōu)辄S色，則可判定存在黃脂肉疾病，氫氧化鈉顏色變?yōu)辄S色則可判定存在黃疸，如上下層顏色均變?yōu)辄S色，即可判定黃疸、黃脂肉合并存在。

2 羊丹毒的診斷

羊丹毒類型不同，在檢測時的樣本選擇方面也存在差別，敗血型羊丹毒診斷中的應用主要采集患病動物的心血或者肝腎組織進行檢驗檢測，如果被檢測患病動物的病癥表現(xiàn)偏向于疹塊型羊丹毒病癥，需要在病變部位的周邊皮膚組織內(nèi)進行檢測樣本的采集，如果患病動物表現(xiàn)偏向于慢性型羊丹毒病癥，在樣本選擇時需要采集其腫脹部位組織。

2.1 涂片鏡檢革蘭氏染色、吉姆薩染色法或瑞氏染色法均是羊丹毒病癥診斷中較為常用的染色方法，主要通過顯微鏡觀察病變菌種的表現(xiàn)并進行分析，主要觀察指標為小桿菌的分布狀態(tài)、分布數(shù)量，尤其需重視白細胞周圍菌體的檢測需要重點區(qū)分，以此來提升診斷質量，強化診斷價值，脾腎抹片檢測菌體檢測應用中的準確性更高，更為推薦選擇。

2.2 分離培養(yǎng)的方法如果檢測所用檢測樣本為新鮮的病理材料，培養(yǎng)基接種條件要求溫度為37℃，培養(yǎng)持續(xù)1～2d便能夠觀察培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落生長，菌落的顏色大多為透明狀，形狀與露珠較為類似，此類菌落的生長長勢較弱，且肉湯顏色為輕度混濁樣表現(xiàn)，有輕微的白色沉淀物，出現(xiàn)凝膠的狀態(tài)不會有明顯變化，較不容易出現(xiàn)液化癥狀。

2.3 對動物的接種按照疹塊10倍的比例加入生理鹽水進行組織懸液的制作，也可通過鴿子或小白鼠進行肉湯培養(yǎng)物的制作，如為鴿子需要注射0.5～1mL組織懸液，如為小白鼠則需注射0.2mL組織懸液，之后方可取出0.5mL及0.1mL的菌液，向鴿子和小白鼠體內(nèi)繼續(xù)注射，如鴿子或小白鼠在接種后3～4h出現(xiàn)死亡則可制作涂片，將死亡鴿子或小白鼠的心血以及腎臟器官作為主要材料制作涂片以及鏡檢，觀察是否存在羊丹毒桿菌。

3 羊瘟的診斷

3.1 監(jiān)測樣品的采集以及切片的制作羊瘟診斷樣本采集大多選擇瀕臨死亡或已經(jīng)死亡的新鮮羊腎臟以及扁桃體組織，采集后的樣本需要進行滅菌處理，常用的檢測方式主要為熒光抗體方式。在切片制作時需選擇瀕臨死亡或已經(jīng)死亡羊的新鮮腎臟組織塊以及扁桃體組織進行冰凍切片，后放置在載玻片上，自然干燥后加入純丙酮內(nèi)進行進一步的處理，本環(huán)節(jié)要求時間為15min，計時結束后將其取出清洗自然干燥。

3.2 染色方法在已經(jīng)處理好的組織切片上滴入2～3滴熒光標記處理后的羊瘟抗體，放置在37℃的環(huán)境下靜置30min，以保證熒光抗體的吸收質量，在染色過程中要求防止染色液干涸，染色后用PBS液對組織切片進行3次浸泡以及沖洗，每次浸泡時間為2min，取出后在室溫下放至半干進行鏡檢。

3.3 結果判定對羊瘟檢測的結果判定需要使用熒光顯微鏡進行切片的觀察，如果切片存在上皮細胞胞漿，顏色為翠綠色，能夠明顯觀察到熒光狀態(tài)表現(xiàn)，組織細胞形態(tài)清晰為陽性，反之則為陰性。

4 結語

動物疫病的出現(xiàn)對養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟效益產(chǎn)生的影響是不容忽視的，甚至會威脅到動物肉、蛋、奶產(chǎn)品的品質，影響到消費者的食品安全水平，既不利于人們的日常飲食質量保證，也會影響到社會環(huán)境的穩(wěn)定性。因此，需要加強對動物疫病化驗室診斷工作的重視，根據(jù)各類動物疫病類型細化診斷方案，提升診斷質量，保障動物疫病控制以及畜牧養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。