劉延亭 ，張美美 ，代發(fā)文，趙寶凱

（1. 北京大偉嘉生物技術(shù)股份有限公司 100091；2.滄州偉嘉畜牧有限公司 061199；3.樂(lè)山師范學(xué)院 614099；4.沈陽(yáng)偉嘉牧業(yè)技術(shù)有限公司 110144 ）

干擾素（Interferon，IFN）是機(jī)體正常細(xì)胞在受誘生劑（包括病毒、細(xì)菌和某些化學(xué)合成物質(zhì)）激發(fā)后產(chǎn)生的一類低分子量糖蛋白，它具有抗病毒、抑制細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)免疫及抗腫瘤作用[1-2]。干擾素根據(jù)其來(lái)源、功能和表面受體等的不同，可分為三大類：Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型[3-4]。Ⅰ型干擾素由白細(xì)胞產(chǎn)生，抗病毒作用為主，免疫增強(qiáng)為輔。主要包括IFN-α、IFN-β、IFN-ω；Ⅱ型干擾素由活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，免疫增強(qiáng)為主，抗病毒作用為輔，只有IFN-γ；Ⅲ型干擾素是由上皮細(xì)胞和黏膜細(xì)胞產(chǎn)生，功能作用與Ⅰ型干擾素類似，抗病毒為主，主要是IFN-λ。目前，Ⅰ型和Ⅱ型干擾素的研究，特別是Ⅰ型，較為成熟與廣泛，包括抗病毒機(jī)理和抗病毒效果等，自從1987年開(kāi)始，科學(xué)家用基因工程方法生產(chǎn)的Ⅰ型干擾素進(jìn)入了工業(yè)化生產(chǎn)后，已有幾十個(gè)Ⅰ型干擾素產(chǎn)品投放到市場(chǎng)，廣泛應(yīng)用到惡性腫瘤、亞急性重癥肝炎、肝纖維化（早期肝硬化）、感染與損傷性疾病、骨髓增生異常綜合癥、病毒性疾病、系統(tǒng)性硬皮病、異位性皮炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等癥狀的治療當(dāng)中。

干擾素具有高度的種屬特異性，故人的干擾素對(duì)動(dòng)物無(wú)效，并且不同病毒、不同細(xì)胞對(duì)干擾素敏感性不同。Ⅲ型干擾素相對(duì)于Ⅰ和Ⅱ型而言發(fā)現(xiàn)的較晚，2003年，Sheppard等[5]人利用反向生物學(xué)原理鑒定出一組新型的白細(xì)胞介素IL-28A、IL-28B和IL-29，2004年，Dumoutier L等[6]在對(duì)其生物學(xué)功能進(jìn)行進(jìn)一步的研究后，將他們正式定名為Ⅲ型干擾素家族。人Ⅲ型干擾素基因結(jié)構(gòu)與IL-10家族相似，但氨基酸水平上與干擾素更相似，分為3個(gè)亞型，Kotonko等[7]將其分別稱為IFN-λ1 （IL-29）、IFN-λ2（IL-28A）和IFN-λ3（IL-28B），IFN-λ4是在2013年才被Prokunina等[8]發(fā)現(xiàn)和定義。豬Ⅲ型干擾素的亞型不同于人，到目前為止，在豬身上只分離到IFN-λ1 和IFN-λ3兩種亞型[9]。Ⅲ型干擾素雖然發(fā)現(xiàn)較晚，但在人疾病治療中的應(yīng)用研究速度較快，如在治療登革熱、慢病毒等方面取得了顯著進(jìn)展，反觀動(dòng)物Ⅲ型干擾素，近些年，相關(guān)研究雖已開(kāi)展，但其研究的深度和廣度仍相當(dāng)有限，且難以廣泛應(yīng)用于臨床治療，包括豬Ⅲ型干擾素。鑒于現(xiàn)今非洲豬瘟等病毒在豬場(chǎng)的廣泛存在和嚴(yán)重威脅，Ⅲ型干擾素具有的在上皮細(xì)胞抗病毒及免疫調(diào)節(jié)上的特殊作用，以及對(duì)靶細(xì)胞的選擇性[10]和副作用小等優(yōu)勢(shì)就顯得尤為重要，因此探索豬Ⅲ型干擾素的抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制及其對(duì)豬病毒性疫病在實(shí)際治療上的深入研究至關(guān)重要。本文結(jié)合Ⅲ型干擾素的相關(guān)研究成果對(duì)豬Ⅲ型干擾素的結(jié)構(gòu)特征、誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)機(jī)制及抗病毒應(yīng)用方面進(jìn)行綜述，以期為后期豬病毒病的干擾素治療提供參考。

1 結(jié)構(gòu)特征

IFN-λ細(xì)胞受體是異二聚體IL28R，由IFN-λ-1（IFNLR1）和IL-10亞單位β（IL-10RB/IL-10Rβ）構(gòu)成[11-12]，豬IFN-λ位于豬14號(hào)染色體上[13]，豬IFN-λ1和IFN-λ3開(kāi)放閱讀框分別有576和588個(gè)核苷酸，編碼191和195個(gè)氨基酸，N端分別含有19和23個(gè)氨基酸的信號(hào)肽。與Ⅰ型干擾素類似，成熟的IFN-λ具有4～5個(gè)短環(huán)連接螺旋構(gòu)成的α螺旋結(jié)構(gòu)。豬IFN-λ1和IFN-λ3分別有4和6個(gè)保守性半胱氨酸殘基，分子內(nèi)形成2和3個(gè)二硫鍵，氨基酸潛在有1和2個(gè)糖基化位點(diǎn)，豬IFN-λ1預(yù)測(cè)是在56-68位上，豬IFN-λ3預(yù)測(cè)是在71-74和111-114位上，猜測(cè)N端糖基化位點(diǎn)可能與干擾素肽的成熟有關(guān)[9]。蛋白質(zhì)水平上，豬IFN-λ1和IFN-λ3氨基酸同源性不到60%?；蚪Y(jié)構(gòu)上，豬IFN-λs含有5個(gè)外顯子，1、3、5外顯子可能與螺旋結(jié)構(gòu)的形成有關(guān)，在啟動(dòng)子區(qū)域，存在幾個(gè)IFN調(diào)節(jié)因子結(jié)合區(qū)[14]。

2 病毒誘導(dǎo)和信號(hào)傳導(dǎo)途徑

IFN各型之間通過(guò)各自的信號(hào)傳導(dǎo)通路，產(chǎn)生干擾素誘導(dǎo)基因，抑制病毒復(fù)制與擴(kuò)散、干擾腫瘤生長(zhǎng)并調(diào)動(dòng)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能發(fā)揮生物學(xué)作用。IFN-λ在細(xì)胞介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑與IFN-α等Ⅰ型干擾素類似，目前認(rèn)為主要是JAKSTAT途徑。非受體性蛋白質(zhì)酪氨酸激酶超家族中的Janus激酶（JAK）家族及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄活化子（STAT）家族是細(xì)胞對(duì)Ⅰ型和Ⅲ型干擾素等細(xì)胞因子反應(yīng)的一些基本蛋白質(zhì)分子[15]。病毒感染動(dòng)物機(jī)體后，被病原模式識(shí)別受體（PRRs），包括TIG-1樣受體（RLR）、Toll樣受體（TLR）及DNA識(shí)別受體Ku70識(shí)別，產(chǎn)生一系列活化物質(zhì)，RLR通過(guò)定位于過(guò)氧化酶體和線粒體的線粒酶體抗病毒信號(hào)蛋白（MAVs），與TLR等共同刺激生產(chǎn)干擾素調(diào)節(jié)因子 （ IFRs） 和細(xì)胞核因子（NF-κB）等，進(jìn)而激活產(chǎn)生IFN-λs。這其中，Ku70是一種新型的細(xì)胞內(nèi)DNA識(shí)別受體，在人胚腎293細(xì)胞中，Ku70主要借助IRF1和IRF2來(lái)誘導(dǎo)IFN-λ的產(chǎn)生，對(duì)IFN-α等Ⅰ型干擾素?zé)o明顯影響[16]。產(chǎn)生的IFN-λs與細(xì)胞內(nèi)受體IFNFR結(jié)合，包括IFN-λR1和IL-10Rβ，形成的復(fù)合物進(jìn)而激活JAK1、JAK2和TYK2激酶，從而使STAT1和STAT2磷酸化，STAT1與STAT2磷酸化后再與第三個(gè)蛋白IFR9結(jié)合形成一個(gè)轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，即干擾素刺激基因因子3（ISGF3），ISGF3促使ISG和其它能抑制病毒感染的效應(yīng)因子表達(dá)，如Mx1、PKR，以及干擾素轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子IFR1和IFR7，反過(guò)來(lái)，IFR1和IFR7又調(diào)節(jié)IFN-λs的表達(dá)。這其中，JAK2是STAT1磷酸化過(guò)程中必不可少的，JAK2在細(xì)胞中介導(dǎo)的抗病毒信號(hào)傳導(dǎo)只產(chǎn)生IFN-λs[17-20]。

3 分布和調(diào)節(jié)機(jī)制

與Ⅰ型干擾素受體在機(jī)體內(nèi)廣泛分布有所不同，作為能夠特異性結(jié)合Ⅲ型干擾素的受體，IFN-λR1只在特定的細(xì)胞和組織中表達(dá)，尤其是上皮細(xì)胞豐富的組織，如胃腸道、泌尿生殖道等，一些免疫細(xì)胞也可以產(chǎn)生，如B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，而在造血系統(tǒng)（B細(xì)胞除外）和神經(jīng)系統(tǒng)則很少能檢測(cè)到[21-22]，IFN-λ具有的特有組織特異性生物學(xué)功能，可使IFN-λ應(yīng)用于臨床治療中可能不會(huì)產(chǎn)生與IFN-α相似的造血系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)方面的副作用。上皮細(xì)胞中IFN-λ表達(dá)量高是因?yàn)槠浜休^多MAVs的過(guò)氧化物酶體。雖然上皮細(xì)胞產(chǎn)生較多的IFN-λ，但骨髓細(xì)胞仍然是受雙鏈RNA（Poly I:C）和病毒刺激產(chǎn)生IFN-λ最為豐富的組織[23]，除腸上皮細(xì)胞外，腸免疫細(xì)胞在受到Poly I:C刺激后，也能產(chǎn)生一定量IFN-λ。除了在表達(dá)量上的區(qū)別外，產(chǎn)生的干擾素種類也有差異，腸上皮細(xì)胞受到Poly I:C刺激，只能產(chǎn)生IFN-λ2和IFN-λ3，而腸免疫細(xì)胞還能產(chǎn)生IFN-α5和IFN-β[24]。

由于IFN-λ和IL-10共用IL-10Rβ受體，因此IFN-λ與IL-10家族中的細(xì)胞因子之間的相互關(guān)系就變得比較復(fù)雜。Jordan等[25]通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，IL-10的阻斷抗體能夠增強(qiáng)IFN-λ的活性，相反，IL-10的存在能抑制IFN-λ活性，暗示兩者之間對(duì)IL-10Rβ可能存在一定的競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。相應(yīng)地，IL-22（通過(guò)IL-10Rβ和IL22Rα信號(hào)傳導(dǎo)）能夠增強(qiáng)IFN-λ的信號(hào)傳導(dǎo)和抗病毒活性[26]。盡管IFNAR和IL-10Rβ廣泛存在于許多細(xì)胞和組織，但I(xiàn)FNLR1多表達(dá)于上皮細(xì)胞[24]，這也就解釋為何IFN-λ能在上皮細(xì)胞中發(fā)揮重要的抗病毒作用。

Ⅰ型和Ⅲ型干擾素在轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)節(jié)機(jī)制并不相同，不同于Ⅰ型干擾素，如IFN-β，誘導(dǎo)需要AP1、IFR3、IFR7、NFκB等多因子的結(jié)合才能啟動(dòng)，Ⅲ型干擾素只需要IFR3、IFR7和NFκB三者即可啟動(dòng)誘導(dǎo)反應(yīng)，且IFRs和NFκB獨(dú)自發(fā)揮作用也可以誘導(dǎo)IFN-λs產(chǎn)生，該發(fā)現(xiàn)能夠直接或間接說(shuō)明，動(dòng)物機(jī)體受到病原感染后，更容易啟動(dòng)IFN-λs應(yīng)答，不易受到其他因素的干擾；同時(shí)由于需要較少的轉(zhuǎn)錄因子參與，IFN-λs比其他類型干擾素也更容易被誘導(dǎo)產(chǎn)生；二是作為IFR家族中第一個(gè)被鑒定出來(lái)的IFR1，是所有類型干擾素必需的結(jié)合位點(diǎn)。IFR1被認(rèn)為在抗病毒應(yīng)答中具有極其重要的作用，同干擾素發(fā)揮功能不可分割。最新的研究證明IFR1并不能誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-β，但的確可以在對(duì)RNA病毒應(yīng)答過(guò)程中控制Ⅲ型IFN的表達(dá)[19,27-31]。

4 抗病毒應(yīng)用

IFN-λ可以在胃腸道、呼吸道、生殖道等上皮細(xì)胞豐富的組織誘導(dǎo)多種抗病毒蛋白的表達(dá)，因此關(guān)于IFN-λ的抗病毒研究也主要著重在此。對(duì)豬而言，研究人員研究的對(duì)象主要集中在豬流行性腹瀉病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV）、豬輪狀病毒（Porcine Rotavirus，PoRV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus，PRRSV）、豬口蹄疫（Food and Mouth Disease Virus，F(xiàn)MDV）等，這其中對(duì)PEDV的研究最為深入和廣泛，研究表明豬Ⅲ型干擾素在粘膜表面發(fā)揮著Ⅰ型干擾素不可替代的作用。

4.1 豬流行性腹瀉病毒

PEDV屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，能引起仔豬和育肥豬急性腸道傳染病，即流行性腹瀉病。該病可發(fā)生于任何年齡的豬，年齡越小，癥狀越重，死亡率高。病毒存在于腸絨毛上皮細(xì)胞和腸系膜淋巴結(jié)，隨糞便排出后，污染環(huán)境、飼料、飲水、交通工具及用具等而傳染。隨著我國(guó)豬瘟、偽狂犬等重大疫病的免疫穩(wěn)定，豬流行性腹瀉病、豬繁殖與呼吸綜合征與非洲豬瘟逐漸成為威脅豬場(chǎng)健康的最主要的三個(gè)疫病。以PEDV為模型，在研究豬Ⅲ型干擾素的抗病毒活性及抗病毒機(jī)制方面，我國(guó)科學(xué)家已走在世界前列。

Haiyan等[32]研究人員首先驗(yàn)證了豬IFN-λ3對(duì)PEDV的抗病毒效果。他們通過(guò)基因重組的方式獲得表達(dá)豬IFN-λ3的原核重組融合蛋白，經(jīng)鎳柱純化后，與Vero E6細(xì)胞作用，發(fā)現(xiàn)：在PEDV CV777株感染前用重組蛋白處理的細(xì)胞組，抗病毒效果最好，其次為病毒與重組蛋白同時(shí)作用細(xì)胞組，病毒感染后再用重組蛋白處理細(xì)胞，對(duì)病毒的抑制效果最差。同時(shí)，試驗(yàn)人員用不同含量的重組蛋白前處理細(xì)胞，結(jié)果顯示，當(dāng)重組蛋白濃度為100ng/mL時(shí)，幾乎能完全抑制PEDV的復(fù)制。

Lin L等[33]通過(guò)免疫熒光和熒光定量PCR試驗(yàn)證明，重組的豬IFN-λ1和IFN-λ3均能在Vero E6細(xì)胞和豬腸上皮細(xì)胞系J2（IPEC-J2）上對(duì)PEDV病毒表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗病毒活性，包括PEDV的G1型（CV777毒株）和G2型（LNCT2毒株）。但兩種亞型的IFN-λ在抗病毒特性上存在一定的差異，IFN-λ1的抗病毒活性主要體現(xiàn)在感染早期的抗病毒感染，它在IPEC-J2細(xì)胞上對(duì)PEDV的抗病毒活性要比IFN-λ3弱的多，特別是對(duì)G2型LNCT2病毒。相對(duì)于IFN-α，IFN-λ的兩個(gè)亞型在抑制PEDV病毒感染增殖方面表現(xiàn)理想，具體表現(xiàn)在IFN-λ在IPEC-J2細(xì)胞上能夠比IFN-α誘導(dǎo)產(chǎn)生更多的ISGs（特別是ISG15、OASL和MxA），IFN-λ3還能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生較高含量的IFITM3。

Mingzhi Z等[34]證明，在腸道上皮細(xì)胞（IPEC-J2），無(wú)論是mRNA水平還是蛋白質(zhì)水平，IFN-λ1比IFN-α能誘導(dǎo)產(chǎn)生更強(qiáng)烈和持續(xù)的ISG上調(diào)。在mRNA水平上，IFN-λ1能刺激產(chǎn)生132個(gè)ISG基因，而IFN-α只產(chǎn)生42個(gè)；在蛋白質(zhì)水平，IFN-λ1能刺激產(chǎn)生47個(gè)ISG蛋白，而IFN-α只產(chǎn)生8個(gè)。特別是ISG15，USP18，OASL和 RSAD2，研究人員通過(guò)RTPCR試驗(yàn)證明，在IFN-λ1誘導(dǎo)后3～24h，就能產(chǎn)生持續(xù)性表達(dá)上調(diào)，而通過(guò)功能分析表明，ISG15和RSAD2對(duì)PEDV的感染抑制具有劑量依賴性。

在IFN-λ在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)抑制PEDV增殖的過(guò)程中，PEDV也在形成自己的逃逸機(jī)制。科學(xué)家在進(jìn)行PEDV如何逃避先天免疫的研究中，發(fā)現(xiàn)PEDV NSP1蛋白阻斷了IRF1的核異位、降低過(guò)氧化物酶體的數(shù)量來(lái)逃避Ⅲ型干擾素的免疫應(yīng)答[35]。Xufang D等[36]還發(fā)現(xiàn)冠狀病毒核糖核酸內(nèi)切酶是一類重要的毒力因子，在上皮細(xì)胞中能顯著抑制豬Ⅰ型和Ⅲ型干擾素的應(yīng)答。

4.2 豬輪狀病毒

輪狀病毒是人畜共患腹瀉病的重要病原之一。輪狀病毒感染能侵害人類和許多種畜禽，不僅感染率高，有時(shí)發(fā)病率也相當(dāng)高，對(duì)人類健康和畜牧業(yè)的發(fā)展都有較大的危害。董波等[37]對(duì)2014～2017間來(lái)自閩西地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)的173份腹瀉病例進(jìn)行了PoRV的實(shí)驗(yàn)室診斷，發(fā)現(xiàn)2014～2017年間PoRV的陽(yáng)性率分別為22.22%、30.90%、23.80%、2.70%。尹寶英等[38]對(duì)2018年陜西162腹瀉樣品進(jìn)行了PoRV的樣品檢測(cè)，陽(yáng)性檢出率為9.48%。

殷玥等[39]首次應(yīng)用PoRV為模型，研究豬III型干擾素對(duì)其的抗病毒活性及機(jī)理。他們通過(guò)克隆藏豬IFN-λ3成熟肽基因，構(gòu)建原核表達(dá)載體 pET-32a（+）-mZPoIFN-λ3，成功表達(dá)了藏豬IFN-λ3重組蛋白，該重組蛋白經(jīng)親和層析純化，比活性能約2×103.0IU/mg。將原核表達(dá)產(chǎn)物以不同的劑量預(yù)處理IPEC-J2細(xì)胞和MA104 細(xì)胞24h后，再接種0.1MOI輪狀病毒SC-R株，于接種后不同時(shí)間收集細(xì)胞懸液。qPCR 檢測(cè)樣品中VP6基因的 mRNA水平。結(jié)果顯示不同劑量的原核表達(dá)產(chǎn)物在病毒接種IPEC-J2細(xì)胞和MA104細(xì)胞后均能有效地抑制SC-R株的增殖，并呈現(xiàn)一定的劑量和時(shí)間依賴，且低濃度IFN-λ3（100ng/mL和10ng/mL）在IPEC-J2細(xì)胞的抗輪狀病毒活性顯著強(qiáng)于在MA104細(xì)胞的活性，高濃度（1000ng/mL）則差異不顯著。同時(shí)研究人員為了證實(shí)IFN-λ3和IFN-α聯(lián)合應(yīng)用能否增強(qiáng)抗PoRV活性，將重組IFN-λ3和IFN-α以不同劑量單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用預(yù)處理IPEC-J2細(xì)胞，再接種SC-R株病毒，收獲細(xì)胞液，測(cè)定病毒滴度。結(jié)果顯示所有劑量二者聯(lián)合應(yīng)用均沒(méi)有IFN-λ3單獨(dú)應(yīng)用抑制SC-R株增殖的活性強(qiáng)。為探究其中機(jī)制，相對(duì)熒光定量測(cè)定下游抗病毒蛋白 MxA、OASL和ISG15轉(zhuǎn)錄情況，發(fā)現(xiàn)單獨(dú)使用IFN-λ3誘導(dǎo)的下游抗病毒蛋白轉(zhuǎn)錄均高于二者聯(lián)合應(yīng)用。

4.3 豬繁殖與呼吸綜合征病毒

豬繁殖與呼吸綜合征的病原體為動(dòng)脈炎病毒屬的成員，是一種有囊膜的單股正鏈RNA病毒，易變異，雖然現(xiàn)在市場(chǎng)上對(duì)于該病防控的疫苗種類眾多，但在安全性、有效性方面都存在或多或少的問(wèn)題。Sang等[40]利用肺泡巨噬細(xì)胞（PAM）和MARC-145兩種細(xì)胞研究了豬IFN-λs對(duì)PRRSV的抑制和保護(hù)效果。他們用含不同量的IFN-λs多肽處理細(xì)胞，然后接種病毒，發(fā)現(xiàn)：0.1ug/mL的豬IFN-λ1和IFN-λ3在PAM細(xì)胞上能分別產(chǎn)生40%和20%的保護(hù)，而同一條件下，IFN-a1能產(chǎn)生80%的保護(hù)；在MARC145細(xì)胞上，0.01μg/mL的豬IFN-λ1就能對(duì)PRRSV產(chǎn)生接近完全的保護(hù)，與IFN-β效果類似，同一濃度下豬IFN-λ3只能提供約20%的保護(hù)。Dang等[41]人利用原核表達(dá)載體克隆構(gòu)建了豬IFN-λ1（IL-29）重組蛋白，測(cè)得的生物學(xué)活性約1.8×103.0U/mL，他們用該制備的不同劑量的重組IFN-λ1感作MARC145細(xì)胞，再接種CH-1a株P(guān)RRSV，收集不同時(shí)間段的培養(yǎng)上清液，通過(guò)病毒滴度測(cè)定和熒光定量PCR檢測(cè)，證明50U作用劑量的IFN-λ1對(duì)PRRSV能產(chǎn)生約60%的抑制，當(dāng)200U作用劑量時(shí)，PCR幾乎都檢測(cè)不到RNA存在，證明該劑量下能對(duì)PRRSV產(chǎn)生約100%的抑制，以及該抑制作用具有劑量依賴性。

豬IFN-λ1作為PRRSV DNA疫苗佐劑也有相關(guān)研究，Luping D等[42]通過(guò)將豬IFN-λ1與PRRSV GP5蛋白融合構(gòu)建DNA疫苗，免疫小鼠，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，IFN-λ1能顯著增強(qiáng)小鼠的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，能產(chǎn)生更強(qiáng)的中和抗體和IFN-γ表達(dá)水平。

4.4 豬口蹄疫

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的，發(fā)生于牛、羊、豬等偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將口蹄疫列為動(dòng)物A類烈性傳染病，嚴(yán)重危害畜牧業(yè)的健康發(fā)展以及相關(guān)產(chǎn)品的對(duì)外貿(mào)易，對(duì)國(guó)家的政治、經(jīng)濟(jì)具有深遠(yuǎn)的影響。Perez-Martin等[43]研究人員通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，豬IFN-λ3在預(yù)防豬FMDV時(shí)也能發(fā)揮非常重要的作用。他們利用人腺病毒5型重組構(gòu)建了表達(dá)豬IFN-λ3的Ad5-PoIFN-λ3載體，免疫10頭豬，結(jié)果顯示：相對(duì)于對(duì)照組，免疫組有7頭豬無(wú)FMDV癥狀或病毒血癥，另外3頭表現(xiàn)出溫和或延遲的臨床癥狀；基因分析顯示，Ad5-PoIFN-λ3在豬腸上皮細(xì)胞能誘導(dǎo)產(chǎn)生較強(qiáng)的ISGs，而在外周血淋巴細(xì)胞中誘導(dǎo)的ISGs非常有限。

另外，Dang等[41]人利用原核表達(dá)載體克隆構(gòu)建的豬IFN-λ1（IL-29）重組蛋白，對(duì)豬偽狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）的抑制效果進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，重組IFN-λ1在對(duì)PK15細(xì)胞50U、100U和200U的劑量作用下，PRV在PK15中形成的蝕斑數(shù)分別減少42%、56%和71%，證明重組IFN-λ1對(duì)PRV也具有相當(dāng)好的抑制作用，抑制效果與劑量相關(guān)性明顯。對(duì)Ⅲ型干擾素的體外藥代學(xué)實(shí)驗(yàn)也顯示，使用IFN-λ及IFN-α/-β分別作用HaCat細(xì)胞后，IFN-λ誘導(dǎo)ISGs產(chǎn)生和衰減緩慢，而IFN-α則非常迅速[44]。這提示，Ⅲ型干擾素比Ⅰ型干擾素發(fā)揮更加長(zhǎng)效持久的生物學(xué)功能。

先天免疫反應(yīng)是動(dòng)物機(jī)體抵御病毒入侵的第一道防線，干擾素，包括Ⅰ型和Ⅲ型干擾素就會(huì)被激活來(lái)抵御病毒的感染，它們是動(dòng)物機(jī)體天然免疫反應(yīng)的重要組成部分。Ⅲ型干擾素不同Ⅰ型干擾素的重要特點(diǎn)在于，Ⅲ型干擾素受體主要表達(dá)于上皮細(xì)胞豐富的黏膜組織，更容易直接暴露接觸病毒，引發(fā)快速、持續(xù)、低水平的局部免疫應(yīng)答，在觸發(fā)主要由Ⅰ型干擾素介導(dǎo)的全身性免疫應(yīng)答之前，發(fā)揮抗病毒作用，將病毒限定在局部區(qū)域，以減少由Ⅰ型干擾素引起的可能的炎癥反應(yīng)。隨著近幾年，Ⅲ型干擾素在抑制人登革熱病毒、諾如病毒、SARS、中東呼吸綜合征、新冠病毒等方面表現(xiàn)出來(lái)的突出效果，Ⅲ型干擾素的研究已愈來(lái)愈受到科研人員的重視。