李璇　馬偉雄　陳文璞　湯金榮　俞國(guó)鋒　陳忠

【摘要】 目的：探討SATB2在前列腺癌組織中的表達(dá)水平，并分析其臨床意義。方法：收集2015年1月-2019年1月在本院經(jīng)病理診斷確認(rèn)為前列腺癌并進(jìn)行手術(shù)切除的40例前列腺癌組織和相應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)并比較前列腺癌組織和相應(yīng)的癌旁組織中SATB2的表達(dá)水平;比較不同年齡、Gleason評(píng)分、生化復(fù)發(fā)者SATB2表達(dá)情況;繪制生存曲線圖，比較SATB2不同表達(dá)情況者的生存情況。結(jié)果：與正常癌旁組織相比，SATB2在前列腺癌組織中呈高表達(dá)（P<0.05）。隨訪時(shí)間截止2019年12月。SATB2陰性者中位生存時(shí)間為94個(gè)月[95%CI（90.49，97.51）]，死亡1例;SATB2陽(yáng)性者中位生存時(shí)間為85個(gè)月[95%CI（80.46，89.54）]，死亡17例，SATB2不同表達(dá)情況者生存情況比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Gleason評(píng)分>7分患者中SATB2表達(dá)陽(yáng)性率高于Gleason評(píng)分≤7分者（P<0.05）;生化復(fù)發(fā)患者SATB2表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)生化復(fù)發(fā)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：SATB2在前列腺癌組織中表達(dá)上調(diào)，且其高表達(dá)與前列腺癌患者的預(yù)后不良相關(guān)。SATB2可能是前列腺癌的治療靶點(diǎn)和潛在的診斷標(biāo)志物。

【關(guān)鍵詞】 前列腺癌 SATB2 生化復(fù)發(fā)

[Abstract] Objective： To investigate the expression level of SATB2 in prostate cancer tissues and analyze its clinical significance. Method： A total of 40 cases of prostate cancer and corresponding paracancerous tissue samples were collected from our hospital from January 2015 to January 2019. The expression levels of SATB2 in prostate cancer and corresponding paracancerous tissues were detected by immunohistochemistry and compared. The expression of SATB2 in patients with different ages， Gleason score and biochemical relapse were compared. Survival curves were drawn to compare the survival of people with different expressions of SATB2. Result： SATB2 was highly expressed in prostate cancer tissues compared with normal paracancerous tissues （P<0.05）. The follow-up time was up to December 2019. The median survival time of SATB2-negative patients was 94 months [95%CI （90.49， 97.51）]， and 1 case died. The median survival time of SATB2-positive patients was 85 months [95%CI （80.46， 89.54）]， and 17 patients died. There was statistically significant difference in the survival of patients with different levels of SATB2 expression （P<0.05）. The positive rate of SATB2 expression in patients with Gleason score > 7 was higher than that in Gleason score ≤7 （P<0.05）. The positive rate of SATB2 expression in patients with biochemical recurrence was higher than that in patients without biochemical recurrence， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion： SATB2 expression is upregulated in prostate cancer tissues， and its high expression is associated with poor prognosis in prostate cancer patients. SATB2 may be a therapeutic target and a potential diagnostic marker for prostate cancer.

[Key words] Prostate cancer SATB2 Biochemical recurrence

First-authors address： Jinshan Branch of Shanghai Sixth Peoples Hospital， Shanghai 201599， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.19.006

前列腺癌是男性泌尿系統(tǒng)腫瘤常見(jiàn)的惡性腫瘤，在歐美國(guó)家特別是美國(guó)發(fā)病率最高[1-2]。在我國(guó)，前列腺癌發(fā)病率比較低，但近年來(lái)，隨著人口老齡化的加劇，生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)的改變以及環(huán)境污染的加重等，前列腺癌在我國(guó)發(fā)病率有逐年增高的趨勢(shì)。流行病學(xué)調(diào)查顯示，中國(guó)前列腺癌發(fā)病率從2005年的7.9人/10萬(wàn)男性人口增加到2015年的32.3人/10萬(wàn)男性人口，而且在以每年10%的速度攀升。對(duì)于我國(guó)城市男性，前列腺癌的發(fā)病率已在所有惡性腫瘤中居前十位[3]。前列腺癌的病因尚未明確，除與年齡，種族和高動(dòng)物脂肪飲食等因素相關(guān)外，還具有遺傳易感性[4]。有數(shù)據(jù)表明前列腺原位癌、局部浸潤(rùn)癌以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移性癌的10年生存率差異明顯，分別為75%、55%和15%[5]。因此，對(duì)于前列腺癌患者，早期診斷是至關(guān)重要的。

特異AT序列結(jié)合蛋白2（SATB2）是一種核基質(zhì)相關(guān)蛋白，對(duì)動(dòng)物正常生長(zhǎng)發(fā)育十分重要[6-7]。自從2003年首次發(fā)現(xiàn)SATB2蛋白以來(lái)，關(guān)于該蛋白在生物體內(nèi)的生物功能的研究迅速增加[8]。SATB2由11個(gè)外顯子組成，分布在2號(hào)染色體上，全長(zhǎng)191 kb，編碼733個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分子量為82.5 kDa。該蛋白有兩個(gè)剪切結(jié)構(gòu)域（氨基酸352-437）和一個(gè)同源結(jié)構(gòu)域（氨基酸614-677）[8]。從斑馬魚(yú)到雞再到高等哺乳動(dòng)物，SATB2序列在脊椎動(dòng)物中高度保守[9]。SATB2表達(dá)具有組織特異性，參與神經(jīng)元、干細(xì)胞和成骨細(xì)胞的分化[10-11]。SATB2最早被發(fā)現(xiàn)是在骨發(fā)育和成骨細(xì)胞分化中發(fā)揮關(guān)鍵作用的轉(zhuǎn)錄因子，它被認(rèn)為參與染色質(zhì)重塑，通過(guò)招募組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶和去乙酰轉(zhuǎn)移酶到染色質(zhì)來(lái)調(diào)節(jié)基因表達(dá)[12-13]。SATB2的異常表達(dá)已被發(fā)現(xiàn)與各種癌癥，包括肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、胃癌和肝癌高度相關(guān)[14-16]。隨著研究的深入，SATB2有可能會(huì)成為新型分子標(biāo)志物，對(duì)許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展都有較大的提示意義。然而，有關(guān)SATB2在前列腺癌中的作用尚未有報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 臨床組織標(biāo)本 收集2015年1月-2019年1月在本院經(jīng)病理診斷確認(rèn)為前列腺癌并進(jìn)行手術(shù)切除的40例前列腺癌組織及相應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本，所有患者均未接受內(nèi)分泌和放化療的治療，從手術(shù)中所獲得的組織標(biāo)本存儲(chǔ)于液氮中?；颊吣挲g45～82歲，平均（64.2±4.4）歲。組織學(xué)分型：37例根治及穿刺標(biāo)本組織類(lèi)型均為經(jīng)典型前列腺癌，3例組織學(xué)類(lèi)型為前列腺癌伴神經(jīng)內(nèi)分泌分化。該研究獲得了上海市第六人民醫(yī)院人體研究倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。所有患者均獲得書(shū)面知情同意書(shū)。所有標(biāo)本均按照倫理和法律標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行匿名處理。

1.2 試劑及免疫組化染色 對(duì)臨床前列腺癌樣本石蠟包埋的組織切片進(jìn)行免疫組化分析，所有標(biāo)本均采用10 %中性福爾馬林固定，經(jīng)脫水、石蠟包埋，石蠟包埋，冰凍切片機(jī)切成5 mm厚度的切片，并按照標(biāo)準(zhǔn)免疫組織化學(xué)進(jìn)行染色。SATB2為鼠單克隆抗體，購(gòu)于Abcam公司，ab92446。使用一抗稀釋液代替SATB2抗體作為空白對(duì)照，采用DAB顯色，蘇木精對(duì)比染色。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定：（1）按照2019版《中國(guó)泌尿外科疾病診斷治療指南》對(duì)前列腺癌組織標(biāo)本進(jìn)行Gleason分級(jí)，①根據(jù)腺體分化程度，按5級(jí)評(píng)分。1級(jí)為一致性規(guī)則的大腺體，背靠背密集，形成小結(jié)節(jié);2級(jí)為較不規(guī)則的大腺體，背靠背密集，形成小結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)內(nèi)腺體不融合;3級(jí)為浸潤(rùn)性生長(zhǎng)的小腺體或腺泡，或小型篩狀結(jié)構(gòu)腺體;4級(jí)為融合腺體，大型篩狀腺體，或呈腎透明細(xì)胞癌樣;5級(jí)為實(shí)性癌巢（無(wú)腺樣結(jié)構(gòu)），單個(gè)癌細(xì)胞浸潤(rùn)，或呈粉刺樣癌（癌細(xì)胞壞死）;②對(duì)于同一腫瘤不同區(qū)域腺癌結(jié)構(gòu)的變異，按其主要和次要分化程度分別評(píng)分，以該兩項(xiàng)評(píng)分相加的總分作為判斷預(yù)后的標(biāo)準(zhǔn)（例如腺癌主要結(jié)構(gòu)評(píng)為2分，次要結(jié)構(gòu)評(píng)為4分，則積分為2+4=6分;只有1個(gè)結(jié)構(gòu)類(lèi)型，評(píng)分為3分，則積分為3+3=6分）。（2）免疫反應(yīng)性評(píng)分（IRS）：通過(guò)評(píng)估陽(yáng)性細(xì)胞百分比和染色強(qiáng)度綜合評(píng)估，陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分方法如下，0為0～5%，1為6%～25%，2為26%～50%，3為51%～75%，4為>75%;染色強(qiáng)度評(píng)分方法如下，0為陰性，1為微弱，2為中等，3為強(qiáng)。通過(guò)將陽(yáng)性細(xì)胞百分比和染色強(qiáng)度評(píng)分相乘得到最終IRS，0～2分為陰性，3～6分為弱陽(yáng)性，7～9分為陽(yáng)性，10～12分為強(qiáng)陽(yáng)性。生化復(fù)發(fā)：指前列腺癌根治手術(shù)或根治性放療達(dá)到根治效果后，前列腺特異性抗原（prostate specific antigen，PSA）連續(xù)兩次超過(guò)0.2 ng/mL。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)或者Fisher精確檢驗(yàn)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 前列腺癌組織及正常癌旁組織SATB2表達(dá)情況 SATB2在正常癌旁組織中染色呈陰性，而在前列腺癌組織中染色呈棕褐色，見(jiàn)圖1。前列腺癌組織的SATB2陽(yáng)性率為92.5%（37/40）明顯高于正常癌旁組織的35.0%（14/40），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=28.614，P<0.05）。40例正常癌旁組織中SATB2陰性有26例（65.0%），弱陽(yáng)性12例（30.0%），陽(yáng)性2例（5.0%），強(qiáng)陽(yáng)性0例;40例前列腺癌組織中SATB2陰性有3例（7.5%），弱陽(yáng)性7例（17.5%），陽(yáng)性21例（52.5%），強(qiáng)陽(yáng)性9例（22.5%）。見(jiàn)表1。

2.2 不同臨床特征前列腺癌患者SATB2表達(dá)情況 采用電話及門(mén)診或住院復(fù)查等方式進(jìn)行隨訪，了解患者生存情況，隨訪時(shí)間截止2019年12月。SATB2陰性者中位生存時(shí)間為94個(gè)月[95%CI（90.49，97.51）]，死亡1例;SATB2陽(yáng)性者中位生存時(shí)間為85個(gè)月[95%CI（80.46，89.54）]，死亡17例，SATB2不同表達(dá)情況者生存情況比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)圖2。Gleason評(píng)分>7分患者中SATB2表達(dá)陽(yáng)性率高于Gleason評(píng)分≤7分者（P<0.05）;生化復(fù)發(fā)患者SATB2表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)生化復(fù)發(fā)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

見(jiàn)表2。

3 討論

目前，前列腺癌的早期診斷主要是通過(guò)直腸指檢（digital rectal examination，DRE）篩查結(jié)合前列腺特異性抗原（prostate specific antigen，PSA）。確診主要依靠前列腺穿刺活檢或病理。PSA的發(fā)現(xiàn)對(duì)于前列腺癌的早期診斷具有里程碑的意義。測(cè)定血液中的血清PSA可反映出前列腺本身的改變。PSA水平高于4 ng/mL的男性被認(rèn)為有患前列腺癌的風(fēng)險(xiǎn)。PSA篩查的廣泛應(yīng)用使轉(zhuǎn)移階段的前列腺癌、早期浸潤(rùn)前列腺癌得到了診斷，并及時(shí)進(jìn)行治療，降低了疾病的死亡率。但PSA只具有前列腺組織特異性，而不具備前列腺腫瘤特異性。近年來(lái)，PSA對(duì)前列腺癌診斷的特異性和敏感度受到了越來(lái)越多的質(zhì)疑。因此，尋找更具特異性與敏感度的分子標(biāo)志物對(duì)于前列腺癌的篩查與早期診斷具有非常重要的作用。

本研究探討了SATB2在前列腺癌中表達(dá)及分析其臨床意義。SATB2是一種核基質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子，參與染色質(zhì)重塑和基因調(diào)控，對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育非常重要[17]。SATB2基因的表達(dá)具有組織特異性，只有在前列腺的腔細(xì)胞表達(dá)SATB2[18]。SATB2及其同系物SATB1被認(rèn)為與各種癌癥有關(guān)，它們?cè)谶@種疾病中的作用是特定于這種類(lèi)型的癌癥的。SATB2是良惡性間充質(zhì)腫瘤成骨細(xì)胞分化的標(biāo)志物，并促進(jìn)骨肉瘤的遷移和侵襲[19]。SATB2在喉鱗狀細(xì)胞癌中屬于抑癌基因，其表達(dá)缺失與復(fù)發(fā)和腫瘤高分級(jí)有關(guān)，而在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中，SATB2的表達(dá)不能增加化療患者的益處[20]。SATB1與SATB2的相互拮抗關(guān)系究竟如何，需要進(jìn)一步的分子細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)加以研究證實(shí)。在前列腺癌中，SATB2抑制癌癥進(jìn)展的獨(dú)特能力可能與其組織特異性表達(dá)有關(guān)，因?yàn)楸磉_(dá)該蛋白的唯一上皮細(xì)胞是位于前列腺腔細(xì)胞。有研究表明，SATB2免疫組化染色尤其是血清SATB的ELISA法檢測(cè)顯示出很好的特異性和敏感度[21]。因此，探明SATB2在前列腺上皮細(xì)胞中的正常功能可能有助于了解其在前列腺癌中的獨(dú)特作用機(jī)制，還為SATB2作為前列腺癌臨床診斷、預(yù)后判斷和潛在的基因靶向治療提供理論依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，SATB2在前列腺癌細(xì)胞和正常細(xì)胞中均主要分布在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，且SATB2在前列腺癌組織中的表達(dá)高于正常癌旁組織（P<0.05）。SATB2不同表達(dá)情況者生存情況比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Gleason評(píng)分>7分患者中SATB2表達(dá)陽(yáng)性率高于Gleason評(píng)分≤7分者（P<0.05）;生化復(fù)發(fā)患者SATB2表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)生化復(fù)發(fā)者（P<0.05）。SATB2在前列腺癌組織中表達(dá)上調(diào)，且其高表達(dá)與前列腺癌患者的預(yù)后不良相關(guān)。SATB2可能是前列腺癌的治療靶點(diǎn)和潛在的診斷標(biāo)志物。如果能將SATB2與PSA篩查聯(lián)合應(yīng)用，勢(shì)必能降低不必要的前列腺穿刺活檢數(shù)和減少漏診率，SATB2有可能將成為篩查和診斷前列腺癌新的特異性標(biāo)記物。

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（收稿日期：2020-09-21） （本文編輯：田婧）