李 田，董志軍

0引言

淚腺腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma of lacrimal gland，LGACC)是最常見的淚腺上皮性惡性腫瘤，約占眼眶腫瘤的1.6%，具有易復(fù)發(fā)、顱內(nèi)擴張、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后差的特點[1-2]。目前臨床上采用手術(shù)切除、放療、化療等手段治療LGACC，但其生存率仍低，5a生存率為50%，10a生存率僅為20%[3]，該病嚴(yán)重威脅人類的生命健康及生活質(zhì)量。目前，LGACC的發(fā)病機制仍未完全明確，尋找可能參與LGACC發(fā)生發(fā)展機制、影響其預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物成為該研究領(lǐng)域的熱點和焦點。本文將對LGACC生物標(biāo)志物的研究進(jìn)展作一綜述。

1原癌基因和抑癌基因與LGACC

1.1微小RNAs家族微小RNA(microRNAs，miRNAs)在淚腺腫瘤發(fā)生過程中作為癌基因或抑癌因子發(fā)揮著重要作用，是腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵調(diào)控因子[2]。miRNAs在LGACC發(fā)生、發(fā)展中的作用方式是通過與相應(yīng)靶基因結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控靶基因的表達(dá)來實現(xiàn)的[4]。

1.1.1miR-93-5p microRNA-93-5p(miR-93-5p)是一種原癌基因，參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。目前通過免疫組化和PCR技術(shù)證實，LGACC患者淚腺組織中miR-93-5p的表達(dá)水平高于正常人的淚腺組織[3]。當(dāng)miR-93-5p過表達(dá)時可以激活多種信號通路促進(jìn)腫瘤發(fā)展：(1)通過乳腺癌轉(zhuǎn)移抑制基因1相似基因參與調(diào)解Wnt/β-catenin信號通路從而促進(jìn)細(xì)胞的過度增殖、遷移及侵襲；(2)通過激活下游的血管內(nèi)皮生長因子A(vascular endothelial growth facto A，VEGFA)促進(jìn)癌組織發(fā)展；(3)通過激活磷酸?；?激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3 kinese/protein kinase B，PI3K/AKT)信號通路促進(jìn)癌細(xì)胞增殖；(4)通過激活下游其他靶因子促進(jìn)癌細(xì)胞增殖[3]。因此，miR-93-5p可以作為臨床治療LGACC的重要靶點。

1.1.2miR-24-3p microRNA-24-3p(miR-24-3p)既是原癌基因也是抑癌基因，目前研究認(rèn)為，miR-24-3p在LGACC中主要起抑制癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的作用。miR-24-3p主要通過負(fù)性調(diào)節(jié)蛋白激酶Cη(recombinant protein kinase C Eta，PRKCH)抑制癌細(xì)胞過度增殖及轉(zhuǎn)移。首先，PRKCH既可以直接促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲，也可以通過抑制抑癌基因p53/p21表達(dá)促進(jìn)癌組織發(fā)展。而miR-24-3p通過下調(diào)PRKCH抑制細(xì)胞增殖，同時也通過抑制PRKCH表達(dá)促進(jìn)p53/p21表達(dá)，進(jìn)而抑制癌組織發(fā)展。有研究通過基因芯片技術(shù)和qRT-PCR發(fā)現(xiàn)在LGACC癌組織中miR-24-3p呈低表達(dá)，進(jìn)一步證實miR-24-3p在LGACC中起抑癌作用[3-4]。

1.2MYB和NFIB V-Myb病毒性髓細(xì)胞增生致癌同源體(v-myb avian myeloblastosis viral oncogene homolog，MYB)基因是LGACC癌基因研究中相對成熟的一類原癌基因，MYB轉(zhuǎn)錄因子是促進(jìn)細(xì)胞增殖的關(guān)鍵調(diào)控因子。當(dāng)MYB和核因子I/B(nuclear factor I/B，NFIB)基因發(fā)生融合后激活MYB基因，使MYB蛋白表達(dá)急劇增加，進(jìn)而參與細(xì)胞增殖、凋亡、轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞周期調(diào)控過程，從而促進(jìn)腫瘤發(fā)展。目前已證實，腺樣囊性癌發(fā)生t(6；9)(q22-23；p23-24)易位，進(jìn)而發(fā)生MYB-NFIB基因重排。同時，Chen等[5]通過熒光原位雜交實驗證實MYB與NFIB基因融合同樣發(fā)生在LGACC中，并且通過對比發(fā)現(xiàn)，MYB基因重排在LGACC中的表達(dá)明顯高于淚腺多形性腺瘤，進(jìn)一步證實MYB基因重排是腺樣囊性癌的特征。目前認(rèn)為發(fā)現(xiàn)融合基因MYB-NFIB對LGACC的診斷具有一定敏感性和特異性，可作為淚腺腫瘤病理檢查的診斷方法[6]。

1.3Survivin Survivin基因是凋亡抑制因子家族成員之一，具有抑制細(xì)胞凋亡、參與細(xì)胞有絲分裂、促進(jìn)細(xì)胞增殖以及血管形成等作用。Survivin作為最強的凋亡抑制因子，其可作為預(yù)后指標(biāo)的潛在功能，已成為腫瘤相關(guān)疾病的研究熱點。Survivin基因通過抑制半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-7進(jìn)而阻斷細(xì)胞凋亡或程序性死亡，同時，通過與微管蛋白相互作用參與細(xì)胞有絲分裂過程，從而促進(jìn)細(xì)胞過度增殖。Mulay等通過免疫印跡實驗和免疫組織化學(xué)實驗發(fā)現(xiàn)Survivin在LGACC中高表達(dá)，且Survivin的表達(dá)程度與LGACC的組織學(xué)分級及分期有關(guān)，進(jìn)一步說明Survivin可作為LGACC的預(yù)后指標(biāo)[7]。

1.4p53 抑癌基因p53是人類腫瘤中最常見的突變基因之一，因其編碼的蛋白條出現(xiàn)在Marker所示53kDa處，故命名為p53基因。p53基因編碼的蛋白為一種轉(zhuǎn)錄因子蛋白，通常在含有受損DNA的細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或細(xì)胞周期阻滯，防止其增殖。p53既可以通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡抑制腫瘤的發(fā)生，也可以通過與miRNAs 的相互調(diào)節(jié)實現(xiàn)對細(xì)胞凋亡的調(diào)控。但突變的p53基因?qū)?xì)胞沒有抑制作用。目前已發(fā)現(xiàn)，突變后的p53在涎腺腺樣囊性癌的癌細(xì)胞胞核中呈高表達(dá)，同樣，在LGACC的病理組織中也發(fā)現(xiàn)突變p53的表達(dá)為強陽性，而在淚腺多形性腺瘤中突變p53的表達(dá)為弱陽性或陰性，且有突變p53蛋白高表達(dá)的腫瘤惡性程度高，進(jìn)一步說明p53參與了LGACC的發(fā)生、發(fā)展，p53可作為一種鑒別正常淚腺組織、淚腺良性腫瘤組織及淚腺惡性腫瘤組織的有效生物學(xué)標(biāo)志物[8-10]。

1.5PTEN 磷酸酶和張力同源物(phosphatase and tension homolog，PTEN)作為一種抑癌基因其表達(dá)的缺失在腺樣囊性癌的癌組織中很常見[11]。PTEN基因所編碼的蛋白主要通過以下途徑發(fā)揮抑癌作用：(1)通過發(fā)揮脂質(zhì)磷酸酶活性，促使細(xì)胞內(nèi)PIP3去磷酸化，進(jìn)而負(fù)性調(diào)節(jié)磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinase，PI3K)，抑制細(xì)胞生長繁殖[11-14]；(2)通過發(fā)揮蛋白磷酸酶活性從而抑制絲裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)，抑制細(xì)胞生長和增殖[13]；(3)使局灶黏附激酶(focal adhesion kinase，F(xiàn)AK)去磷酸化，抑制其活性，從而負(fù)性調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏連、轉(zhuǎn)移和浸潤[14]。但是，當(dāng)PTEN缺失，無法編碼蛋白時或蛋白表達(dá)異常時，就會失去對細(xì)胞生長、黏連、轉(zhuǎn)移和浸潤的負(fù)調(diào)控，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生過度生長、增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移。PTEN基因缺失在LGACC發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

2調(diào)控因子與LGACC

2.1細(xì)胞周期調(diào)控蛋白

2.1.1Ki-67蛋白Ki-67蛋白是由增殖標(biāo)志物Ki-67基因編碼的、表達(dá)于細(xì)胞增殖期的一種核抗原，在細(xì)胞周期的G1、S、G2和M期均表達(dá)，但在組織切片中觀察其在靜止期(G0)不表達(dá)[15]，可以較準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖活性。目前研究認(rèn)為Ki-67蛋白可以作為判斷淚腺上皮腫瘤生物學(xué)行為及預(yù)后的一種指標(biāo)[16]。同時，有研究發(fā)現(xiàn)Ki-67在LGACC中的表達(dá)明顯高于淚腺多形性腺瘤，且通過免疫組織化學(xué)實驗發(fā)現(xiàn)Ki-67免疫反應(yīng)性隨著腺樣囊性癌組織病理學(xué)分級的增加而增加，說明Ki-67蛋白表達(dá)的強弱性可作為反映腺樣囊性癌惡性程度的指標(biāo)[17]。

2.1.2cyclinD1和p16 細(xì)胞周期蛋白D1(cyclinD1)和p16基因是調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的重要因子，cyclinD1可以促進(jìn)細(xì)胞分裂，而p16可以與cyclinD1競爭性結(jié)合周期蛋白依賴性激酶4(cyclin-dependent kinases 4，CDK4)，阻止其對CDK4的活化作用限制細(xì)胞增殖進(jìn)程。cyclinD1主要在細(xì)胞周期G1期發(fā)揮作用。在細(xì)胞周期G1期，p16蛋白競爭性結(jié)合CDK4，阻止cyclinD1對CDK4的活化，使CDK4不能發(fā)揮激酶活性，不能完成對pRb的磷酸化，從而抑制轉(zhuǎn)錄因子E2F的轉(zhuǎn)錄作用。當(dāng)p16基因缺失、突變或甲基化導(dǎo)致p16蛋白不能正常表達(dá)時，則失去與CDK4結(jié)合的能力，無法阻止細(xì)胞分裂，從而導(dǎo)致cyclinD1與CDK4結(jié)合，使細(xì)胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)化，促進(jìn)細(xì)胞分裂，使細(xì)胞增殖失去控制，向惡性發(fā)展[18-20]。Wang等[21]研究發(fā)現(xiàn)cyclinD1和p16基因在LGACC癌細(xì)胞中呈高表達(dá)狀態(tài)，進(jìn)一步證實cyclinD1和p16參與LGACC的發(fā)生、發(fā)展過程，為未來的基因靶向治療提供了方向。

2.2Notch信號通路相關(guān)調(diào)控因子Notch信號通路參與細(xì)胞分化、增殖、凋亡、黏附及表皮細(xì)胞向間質(zhì)轉(zhuǎn)化等過程，對大多數(shù)組織的正常發(fā)育有著重要作用。Notch主要通過調(diào)控下游靶基因的表達(dá)進(jìn)而對細(xì)胞周期進(jìn)行調(diào)控。在癌組織中，Notch激活下游的毛發(fā)分裂相關(guān)增強子1(hairy/enhancer-of-split related with YRPW motif 1，HEY1)，HEY1通過驅(qū)動上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)基因和基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)的表達(dá)，增加細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。Xie等[22]在涎腺腺樣囊性癌的癌組織中發(fā)現(xiàn)Notch及其下游靶因子HEY1高表達(dá)，且兩者的表達(dá)呈正相關(guān)，進(jìn)一步說明Notch-HEY1信號通路參與癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。此外，Sant等[23]通過Western blot驗證Notch基因在LGACC中被特異性上調(diào)，進(jìn)一步說明Notch通路在LGACC的發(fā)生和發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。

2.3FGF/FGFR信號通路相關(guān)調(diào)控因子成纖維細(xì)胞生長因子受體(fibroblast growth factor receptors，F(xiàn)GFRs)是單通道跨膜的酪氨酸激酶受體。在正常組織中，成纖維細(xì)胞生長因子(fibroblast growth factor，F(xiàn)GF)/FGFR信號通路參與細(xì)胞存活、增殖、遷移、分化、胚胎發(fā)育、器官發(fā)生、組織修復(fù)/再生和代謝等過程[24]。在配體結(jié)合時，F(xiàn)GFRs通過PLC-γ激活而二聚，并觸發(fā)下游信號通路，包括RAS/MAPK信號通路和PI3K/AKT信號通路等，進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移及侵襲[25]。在LGACC中發(fā)現(xiàn)FGF/FGFR信號通路有強烈的上調(diào)作用。而過表達(dá)的FGF/FGFR信號通路則進(jìn)一步促進(jìn)LGACC癌細(xì)胞的增殖。Doddapaneni等[26]研究發(fā)現(xiàn)，順鉑聯(lián)合AZD4547的治療方式限制了LGACC細(xì)胞的增殖和遷移，說明抑制FGFR 1有助于抑制LGACC的發(fā)生、發(fā)展，進(jìn)一步說明FGF/FGFR信號通路的過表達(dá)是促進(jìn)LGACC發(fā)生發(fā)展的機制之一。

2.4CD117 CD117是c-Kit基因編碼的一種Ⅲ型受體酪氨酸激酶，作用于多種細(xì)胞類型的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，CD117被激活后啟動細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞發(fā)育和生長。CD117通過與配體的結(jié)合被激活，從而導(dǎo)致磷酸化級聯(lián)，最終激活不同細(xì)胞類型的各種轉(zhuǎn)錄因子，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。研究發(fā)現(xiàn)，晚期腺樣囊性癌組織中p63陽性/CD117陽性細(xì)胞增多，預(yù)后則較差；另有研究通過免疫組織化學(xué)實驗發(fā)現(xiàn)，CD117在LGACC中高表達(dá)，進(jìn)一步說明CD117在LGACC的發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[6，27]。

2.5HIF-1 缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia-inducible factor-1，HIF-1)是一種重要的異二聚體轉(zhuǎn)錄因子。在常氧條件下，HIF-1α被蛋白降解；而在低氧條件下，HIF-1α被穩(wěn)定地轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，與HIF-1β形成復(fù)合物，而HIF-1β又與缺氧反應(yīng)元件結(jié)合并誘導(dǎo)其他相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。HIF-1α在缺氧條件下誘導(dǎo)的腺樣囊性癌自噬機制中具有重要意義[28]。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是HIF-1α最重要的靶基因之一，在腫瘤組織缺氧的微環(huán)境下，HIF-1α活性升高不僅可以促進(jìn)VEGF轉(zhuǎn)錄，還可以增加VEGF mRNA的穩(wěn)定性，進(jìn)而上調(diào)VEGF表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成和細(xì)胞能量代謝，最終促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。張蕾等[29]研究發(fā)現(xiàn)，HIF-1α和VEGF在LGACC組織中均呈現(xiàn)較高的陽性表達(dá)，且陽性程度與其病理類型及復(fù)發(fā)情況相關(guān)。這說明HIF-1α參與LGACC的形成及發(fā)展，且通過影響腫瘤血管的生成進(jìn)而使LGACC具有相應(yīng)的侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為，但與HIF-1α密切相關(guān)的其他靶細(xì)胞是否在LGACC的發(fā)生、發(fā)展中起作用則目前研究較少。

3跨膜糖蛋白與LGACC

CD44、CD22/CD133均屬于跨膜糖蛋白類，表達(dá)于多種細(xì)胞類型，包括內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和白細(xì)胞。CD44在細(xì)胞增殖、黏附、遷移和淋巴細(xì)胞活化等生理過程中起著重要作用。在涎腺腺樣囊性癌中CD44v6亞型首次被確定為癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的決定因素之一，故靶向抑制CD44作為癌癥治療手段被證明是一種很有前途的方法[30]。CD22/CD133的高表達(dá)可以激活STAT3和Wnt信號通路，從而進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞惡性增殖[31]。目前認(rèn)為，跨膜糖蛋白與LGACC的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但機制尚未明確，仍需進(jìn)一步研究[32]。

4缺氧機制與LGACC

4.1自噬調(diào)節(jié)及活性氧相關(guān)蛋白自噬調(diào)節(jié)和活性氧相關(guān)蛋白的改變與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。癌細(xì)胞通過血管生成、有氧糖酵解能夠在缺氧和營養(yǎng)缺乏的環(huán)境中生存。在需要高代謝需求的高侵襲性惡性腫瘤中，諸如自噬等替代代謝途徑可以通過細(xì)胞漿成分的循環(huán)提供細(xì)胞能量，作為幫助癌細(xì)胞抵抗抗癌治療的細(xì)胞保護(hù)機制。活性氧相關(guān)蛋白包括硫氧還蛋白還原酶、過氧化氫酶、硫氧還蛋白相互作用蛋白(硫氧還蛋白)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶和錳超氧化物歧化酶等。Koo等[33-34]通過研究自噬和活性氧相關(guān)蛋白在LGACC中的表達(dá)及其意義，并與涎腺腺樣囊性癌進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)LGACC在間質(zhì)組分中表達(dá)的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶水平高于涎腺腺樣囊性癌組分，而錳超氧化物歧化酶在上皮分組中的表達(dá)水平低于涎腺腺樣囊性癌組分，同時，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)LGACC中錳超氧化物歧化酶的低表達(dá)可能與LGACC的預(yù)后差有關(guān)。這進(jìn)一步證明自噬調(diào)節(jié)和活性氧相關(guān)蛋白與LGACC的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

4.2COX-2 常氧條件下，環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenases-2，COX-2)在正常組織中極少表達(dá)，近年研究發(fā)現(xiàn)缺氧微環(huán)境中，COX-2在多數(shù)腫瘤細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。目前認(rèn)為，COX-2是通過刺激腫瘤細(xì)胞生長、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生長促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。劉偉偉等[35]研究發(fā)現(xiàn)COX-2在LGACC癌細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，同時很大程度提示預(yù)后較差，進(jìn)一步說明COX-2高表達(dá)是LGACC的發(fā)病機制之一。

5侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白與LGACC

基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的重要成員之一。目前研究證實，MMP-9通過降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜介導(dǎo)腫瘤的轉(zhuǎn)移及侵襲[36]。另有研究證明，MMP-9在缺氧條件下可以促進(jìn)腫瘤新生血管形成，為腫瘤的進(jìn)一步發(fā)展提供有利條件[6]。通過免疫組織化學(xué)實驗發(fā)現(xiàn)，在LGACC病理組織中MMP-9呈高表達(dá)，且很大程度提示預(yù)后較差，進(jìn)一步證明MMP-9參與LGACC癌細(xì)胞的遷移及侵襲。

6嗜神經(jīng)性相關(guān)蛋白與LGACC

S100蛋白是一種小分子酸性蛋白，是雪旺細(xì)胞的標(biāo)志物。目前研究發(fā)現(xiàn)，S100蛋白在具有嗜神經(jīng)性侵襲性的LGACC病理組織中呈高表達(dá)，提示LGACC癌細(xì)胞可能發(fā)生雪旺細(xì)胞分化，導(dǎo)致LGACC進(jìn)一步向侵襲神經(jīng)發(fā)展。可考慮將S100蛋白作為LGACC嗜神經(jīng)侵襲的預(yù)警指標(biāo)，但目前S100蛋白介導(dǎo)LGACC嗜神經(jīng)性的作用機制尚未完全明確，仍需進(jìn)一步研究[37]。

7小結(jié)

針對LGACC生物標(biāo)志物，國內(nèi)外學(xué)者在原癌基因及抑癌基因、調(diào)控因子、跨膜糖蛋白、嗜神經(jīng)性相關(guān)蛋白等方面進(jìn)行了階段性研究，但LGACC的發(fā)生發(fā)展并非僅由單一因素所致，而是多因素始動的復(fù)雜的病理生理過程，因此對其分子機制進(jìn)行多維度的立體研究，進(jìn)而探究診治新方法，成為目前該領(lǐng)域研究的新方向。