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        HIV感染者宮頸組織中轉(zhuǎn)化生長因子-β1蛋白表達(dá)及其與HPV感染的關(guān)系

        2021-03-26 09:07:38靈,曾靜,張
        關(guān)鍵詞:內(nèi)瘤危型上皮

        彭 靈,曾 靜,張 容

        (1.重慶市公共衛(wèi)生醫(yī)療救治中心婦產(chǎn)科,重慶 400036;2.重慶渝北區(qū)第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,重慶 401120;3.重慶市涪陵區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,重慶 408000)

        2016年我國新發(fā)人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染6.441 6/100 000例,因感染致死1.034 2/100例[1]。人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染在HIV感染患者中較為常見,HIV陽性女性的HPV感染率高出HIV陰性女性的2.2~2.8倍[2],而HPV感染又是宮頸癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素[3]。高危型HPV檢測是篩查HIV感染宮頸癌患者的重要方法,但是靈敏度和特異度不高[4],并且不能區(qū)分HPV短暫感染和持續(xù)感染,因此亟需尋找潛在的生物學(xué)標(biāo)志物。

        轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)在免疫炎癥、組織修復(fù)和胚胎發(fā)育等過程中起到重要作用[5]。有研究[6]顯示,TGF-β1與高危型HPV感染有關(guān),對宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展有一定價(jià)值。然而HIV感染會引起機(jī)體免疫功能紊亂,造成TGF-β1水平變化[7],因此,有必要探討HIV感染宮頸癌患者TGF-β1的表達(dá)及意義。本研究對TGF-β1與HPV感染的關(guān)系進(jìn)行分析,并探討TGF-β1表達(dá)與HIV陽性宮頸病變的關(guān)系,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

        1 對象與方法

        1.1 研究對象

        選取2014年6月至2018年9月重慶市公共衛(wèi)生醫(yī)療救治中心收治的89例HIV感染婦女為研究對象,年齡21~56歲,平均(30.08±11.07)歲;配偶HIV感染41例(46.07%);性伴侶(3.12±1.48)個;均為漢族。其中CIN1級30例,CIN2級22例,CIN3級16例,無宮頸癌癌前病變21例。所有受試者對本研究均知情同意并簽署知情同意書。

        納入標(biāo)準(zhǔn):1)HIV感染陽性,符合《中國艾滋病診療指南(2018版)》[8];2)均接受陰道鏡檢查和宮頸活檢;3)年齡≥18歲。排除標(biāo)準(zhǔn):1)子宮手術(shù)史;2)合并急慢性感染性疾??;3)妊娠。

        1.2 檢測方法

        1.2.1 HPV基因分型檢測

        充分暴露宮頸外口,用無菌棉球輕輕拭去宮頸表面過多的分泌物,將專用HPV采樣刷尖端插入宮頸口,順時針旋轉(zhuǎn)5圈,隨后去除刷柄放入細(xì)胞保存液。HPV分型檢測試劑盒購于廣東凱普生物科技股份有限公司,通過提取DNA,基因擴(kuò)增,倒流雜交,最后顯色和分析。該試劑盒可以一次性檢測15種HPV高危亞型:16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68,6種HPV低危型:6、11、42、43、44、81。

        1.2.2 陰道鏡及宮頸活檢

        首先用無菌棉球輕輕擦拭宮頸表面分泌物,先低倍鏡后高倍鏡觀察局部改變,用3%醋酸涂抹宮頸30 s,綠色濾鏡下觀察宮頸血管形態(tài),隨后用5%盧戈試劑涂抹宮頸了解病變范圍。對陰道鏡下提示異常的宮頸行多點(diǎn)活檢,均由本院病理科檢查,對患者進(jìn)行宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraep-ithelial neoplasia,CIN)分級,CIN1級為輕度非典型增生,CIN2級為中度非典型增生;CIN3級為重度非典型增生和原位癌。

        1.2.3 組織TGF-β1蛋白表達(dá)

        采用免疫組織化學(xué)法檢測組織TGF-β1蛋白表達(dá)。由重慶市公共衛(wèi)生醫(yī)療救治中心平頂山院區(qū)病理科制作宮頸組織石蠟切片,厚度為4 μm,在70 ℃下烤片30 min,隨后進(jìn)行脫蠟處理。用Tris/EDTA修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù),羊血清封閉30 min,加入鼠抗人TGF-β1單克隆抗體(1:200)4 ℃過夜,加入辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG,37 ℃孵育30 min。隨后用辣根標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液和DAB顯色液處理,蘇木紫復(fù)染。經(jīng)過脫水、透明、封片處理后在顯微鏡下觀察。每張切片隨機(jī)取10個視野,每個視野計(jì)數(shù)100個細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞的染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞比例判斷TGF-β1表達(dá)情況。染色強(qiáng)度分為:0分(陰性),1分(弱陽性,染色為淺黃色),2分(中度陽性,染色為棕黃色),3分(強(qiáng)陽性,染色為棕褐色)。陽性細(xì)胞比例:1分為0%~10%,2分為>10%~50%,3分為>50%~80%,4分為>80%~100%。將2個得分相乘得出最終結(jié)果:0(-);1~3(+);4~8();9~12()。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用SPSS20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,組間比較用卡方檢驗(yàn);等級資料比較用非參數(shù)檢驗(yàn);相關(guān)性分析用Spearman秩相關(guān)性分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 HIV患者宮頸組織TGF-β1蛋白表達(dá)與高危型HPV感染的關(guān)系

        89例HIV感染患者中,高危型HPV感染65例,占73.03%。單型高危HPV感染患者TGF-β1蛋白陽性表達(dá)率明顯較高(P<0.05),見表1。

        表1 高危型HPV感染患者TGF-β1蛋白陽性表達(dá)情況 n(%)

        2.2 TGF-β1蛋白表達(dá)與病理診斷的關(guān)系

        TGF-β1在HIV感染患者的宮頸組織中的表達(dá)見圖1。CIN1級患者TGF-β1陽性細(xì)胞主要位于上皮下1/3,以細(xì)胞漿染色為主,少見細(xì)胞核染色;CIN2級和CIN3級患者TGF-β1陽性細(xì)胞主要位于上皮下2/3或全層,細(xì)胞漿和細(xì)胞核均可見染色。89例患者無宮頸癌癌前病變21例(對照組)、CIN1級30例、CIN2級22例、CIN3級16例,對照組和CIN 1-3級間基線資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),CIN 1-3各分級患者間基線資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。TGF-β1蛋白陽性表達(dá)的HIV感染患者CIN級別更高(Z=-4.904,P<0.001),見表2。

        A:對照組;B:CIN1級;C:CIN2級;D:CIN3級。圖1 TGF-β1蛋白在HIV感染患者宮頸組織中的表達(dá)(×10)

        表2 TGF-β1蛋白表達(dá)與病理診斷的關(guān)系n(%)

        2.3 TGF-β1表達(dá)強(qiáng)度與病理診斷的關(guān)系

        TGF-β1蛋白表達(dá)強(qiáng)度與CIN分級的關(guān)系如表3所示,Spearman秩相關(guān)性分析顯示,TGF-β1蛋白表達(dá)強(qiáng)度與CIN分級呈正相關(guān)(r=0.420,P<0.001)。

        表3 TGF-β1表達(dá)強(qiáng)度與病理診斷的關(guān)系n(%)

        3 討論

        HIV感染陽性患者罹患宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)及死亡風(fēng)險(xiǎn)較高[9]。有些HIV感染患者并未早期接受有效的宮頸癌篩查。HPV感染是宮頸癌發(fā)生的重要機(jī)制,但是在HPV感染的婦女中,僅有少部分發(fā)展為功宮頸癌,提示還有其他病理機(jī)制涉及宮頸癌的發(fā)生,逃避TGF-β的調(diào)控就是重要的機(jī)制之一[10]。

        TGF-β是一個同源二聚體,包括TGF-β1、TGF-β2及TGF-β3共3種亞型,其中TGF-β1在細(xì)胞中含量最多、活性最強(qiáng)、功能最廣泛,是近年來研究的重點(diǎn)[5]。它在胚胎發(fā)育、組織再生、免疫炎癥和血管再生等病理生理過程中起到重要作用[5,11],能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、凋亡、遷移和血管生成等促進(jìn)腫瘤發(fā)生和發(fā)展[12-13]。TGF-β1能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞侵襲和遷移促進(jìn)宮頸癌的發(fā)展[6]。它在宮頸癌組織和外周血中表達(dá)水平均升高,提示TGF-β1對宮頸癌的早期診斷可能有重要價(jià)值[14-15],可能是HPV感染誘導(dǎo)宮頸癌的一個中介因素[16]。有研究[10]發(fā)現(xiàn),TGF-β1能夠抑制T淋巴細(xì)胞的增殖分化、誘導(dǎo)凋亡,引起免疫抑制,進(jìn)而影響機(jī)體對HPV的清除,最終導(dǎo)致HPV感染相關(guān)的子宮頸上皮內(nèi)瘤變。故TGF-β1參與HPV引起宮頸癌的機(jī)制尚不明確,需要今后深入分析。

        本研究顯示,HPV感染陽性患者TGF-β1蛋白陽性表達(dá)率較高,并且在單型HPV感染中表現(xiàn)得尤為明顯,提示TGF-β1蛋白對鑒別單型和多型HPV感染可能有一定價(jià)值。TGF-β1在HIV感染中同樣也起到重要作用,例如在慢性呼吸道疾病患者中,TGF-β1可提高HIV病毒載量,進(jìn)而加重肺部疾病[17],TGF-β1還與抗病毒療效有關(guān)[18]。

        TGF-β1在HIV感染患者宮頸組織中的表達(dá)及意義既往少有報(bào)道。CARNEIRO等[19]分析了11例HIV感染宮頸上皮內(nèi)瘤變患者和12例HIV未感染宮頸上皮內(nèi)瘤變患者,發(fā)現(xiàn)TGF-β1在2組高級別宮頸病變患者中均高水平表達(dá),并且外周血CD4+T細(xì)胞水平與TGF-β1呈正相關(guān)。早期也有研究[20]顯示,與單純CIN患者比較,HIV感染CIN患者TGF-β1表達(dá)水平降低。由于既往研究樣本量較小,難以得出明確結(jié)論。本研究分析了89例HIV感染患者的宮頸組織標(biāo)本,TGF-β1蛋白在對照組、CIN1級、CIN2級和CIN3級中陽性表達(dá)率逐漸升高。另外TGF-β1蛋白表達(dá)強(qiáng)度與CIN分級呈正相關(guān),提示TGF-β1蛋白免疫組織化學(xué)染色對鑒別低級別和高級別的宮頸上皮內(nèi)瘤變有一定價(jià)值。

        綜上所述,在HIV感染患者中,HPV感染陽性患者TGF-β1蛋白陽性表達(dá)率較高,并且在單型HPV感染中表現(xiàn)得尤為明顯,提示TGF-β1蛋白對鑒別單型和多型HPV感染可能有一定價(jià)值。TGF-β1蛋白與HPV感染密切相關(guān),對宮頸上皮內(nèi)瘤變及嚴(yán)重程度有一定預(yù)測價(jià)值,可以考慮成為HIV感染患者宮頸癌的一個篩查指標(biāo)。

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