孔凡榮

(錦州市中心醫(yī)院 消化一科,遼寧 錦州121000)

肝細(xì)胞癌(HCC)是原發(fā)性肝癌最常見(jiàn)的類型，大約占所有原發(fā)性肝癌的70%-90%[1-3]。HCC的早發(fā)現(xiàn)、早治療是提高患者生存率的關(guān)鍵要素。Jianjun Zhu等發(fā)現(xiàn)，腫瘤壞死因子α(TNFα)能夠通過(guò)瞬時(shí)受體電位通道促使Ca2+從細(xì)胞外流入細(xì)胞內(nèi)，從而激活鈣蛋白酶/IAP/caspase3 信號(hào)通路促進(jìn)HCC細(xì)胞凋亡[4]。Hang X等發(fā)現(xiàn)NEDD4基因沉默將導(dǎo)致磷酸酶和張力蛋白同源物(PTEN)表達(dá)增加，從而使STAT3、AKT和ERK1/2表達(dá)失活，最終抑制HCC細(xì)胞生長(zhǎng)[5]。Zhang G等實(shí)驗(yàn)表明MAGI1能夠通過(guò)上調(diào)PTEN表達(dá)從而抑制HCC細(xì)胞的遷移和侵襲[6]。本試驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)HCC患者TNFα與PTEN表達(dá)水平，分析二者在HCC中的診斷價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 組織獲取

選取錦州市中心醫(yī)院2017年10月-2019 年10月HCC病人(所有病人均為男性，年齡40歲±2.0歲)30例。取癌區(qū)、癌旁區(qū)(距癌邊緣2-5 cm)組織標(biāo)本，分別記為CT(carcinoma tissue)組和PCT (para-carcinoma tissue)組。所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)。

1.2 定量PCR(qRT-PCR)試驗(yàn)

根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)(Ambion,Austin,TX,USA)，使用Trizol裂解液提取樣本總RNA，并且逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNA。PTEN基因的PCR反應(yīng)總體系25 μl，反應(yīng)條件為：95℃ 12 min，94℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 45 s，共40個(gè)循環(huán)。TNFα基因的PCR反應(yīng)總體系25 μl，反應(yīng)條件為：94℃ 5 min，94℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)?；蛞镄蛄幸?jiàn)表1。PCR產(chǎn)物置于1.5%瓊脂糖凝膠電泳，并且使用Quantity One Imager version 4.6.2 (Bio-Rad Laboratories,Inc.,Hercules,CA,USA)對(duì)圖像進(jìn)行分析。同時(shí)，選取甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)參。

表1 基因引物信息

1.3 癌組織TNFα與PTEN基因表達(dá)水平與HCC臨床病理因素的關(guān)系

利用PCR技術(shù)分別檢測(cè)癌組織TNFα與PTEN基因表達(dá)水平。同時(shí)，分析TNFα與PTEN基因表達(dá)與癌組織分化和衛(wèi)星灶的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(means±SD)。采用t檢驗(yàn)對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TNFα與PTEN mRNA表達(dá)水平

結(jié)果表明，與PCT組比較，CT組PTEN和TNFα mRNA表達(dá)水平均明顯降低(圖1、圖2)。

2.2 癌組織TNFα與PTEN基因表達(dá)水平與HCC臨床病理因素的關(guān)系

低分化HCC TNFα與PTEN基因表達(dá)水平明顯低于高、中分化HCC，有衛(wèi)星灶HCC TNFα與PTEN基因表達(dá)水平明顯低于無(wú)衛(wèi)星灶HCC，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。

2.3 PTEN和TNFα相關(guān)性分析

PTEN和TNFα呈正相關(guān)(r=0.47,P<0.05)。

圖1 TNFα基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

圖2 PTEN基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

表2 TNFα與PTEN基因表達(dá)水平與HCC臨床病理因素的關(guān)系

3 討論

HCC是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，也是癌癥相關(guān)死亡第三常見(jiàn)的原因[2,7]，隨著環(huán)境的惡化和乙/丙肝病毒傳染率的增加，HCC的發(fā)病率逐年升高[8]。研究表明，HCC具有特定的流行病學(xué)特征，包括動(dòng)態(tài)的時(shí)間趨勢(shì)、地理區(qū)域、種族和族群之間的顯著變異、性別差異和環(huán)境潛在危險(xiǎn)因素[9]。雖然手術(shù)、放療和化療等已經(jīng)被廣泛用于HCC的治療，但是其預(yù)后依舊較差[8]。此外，HCC術(shù)后高的復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率使得其5年生存率保持較低水平[10]。因此，HCC的早診斷和早治療，成為了緩解其癥狀，并且大幅改善其預(yù)后的有效措施。研究表明，TNFα是一種特異性的高效抗癌劑，可以對(duì)抗多種腫瘤[11]。Li D等發(fā)現(xiàn)生存素失活能夠促發(fā)TNFα的協(xié)同致死作用，從而引起HCC細(xì)胞的死亡[12]。PTEN基因突變或沉默與多種腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[13-14]。PTEN基因表達(dá)下調(diào)將導(dǎo)致腫瘤血管生成，從而促進(jìn)腫瘤的增殖和發(fā)生[15]。本研究分別測(cè)定HCC癌組織和癌旁組織的TNFα和PTEN基因表達(dá)水平。結(jié)果表明，HCC癌組織TNFα和PTEN基因表達(dá)水平明顯低于癌旁組織。同時(shí)，病理分析結(jié)果顯示，癌組織TNFα和PTEN基因表達(dá)水平越低，HCC分化越低，衛(wèi)星灶轉(zhuǎn)移率越高。此外，相關(guān)性分析結(jié)果顯示，PTEN和TNFα表達(dá)呈正相關(guān)。檢測(cè)TNFα和PTEN基因表達(dá)水平將有助于對(duì)HCC惡性程度和轉(zhuǎn)移潛能的評(píng)估和預(yù)測(cè)，對(duì)HCC患者的早期診斷和治療有著重要的意義。