黃偉，賀亞男，朱志，何仲清，俸世洪，許潤春▲，胡昌江,

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137；2.成都潤馨堂藥業(yè)有限公司,四川 成都 611137)

膏滋，是中藥傳統(tǒng)劑型之一。近代名醫(yī)秦伯未在《膏方大全》中指出 ：“膏方者，蓋煎熬藥汁成脂液，而所以營養(yǎng)五臟六腑之枯燥虛弱者也，故稱膏滋藥?！盵1]膏滋藥性滋潤，具有濃度高、體積小、保存性好、便于服用等特點(diǎn)。亞健康主要是指在無明確疾病診斷的情況下過早表現(xiàn)出反應(yīng)能力及活力降低、疲勞增加、適應(yīng)能力減退等癥狀，是一種介于健康與疾病之間的臨床狀態(tài)[2]。隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，睡眠不足、精神緊張、心理壓力大、長期不良情緒等亞健康現(xiàn)象愈加普遍[3]。參精膏是近年來開發(fā)的一款滋補(bǔ)膏滋，主要由蜂蜜、茯苓、芡實(shí)、黃精、橘皮、人參等“藥食同源”類中藥組成，用于改善人體生理功能、增強(qiáng)機(jī)體活力及調(diào)節(jié)適應(yīng)能力，供體虛的亞健康人群使用[4]。由于該方中多糖類成分含量較高，且同時(shí)含有貴重藥材，因此為保證參精膏滋質(zhì)量，增加其質(zhì)量穩(wěn)定性，有必要對(duì)其制備工藝及控制參數(shù)進(jìn)行考察，以期為參精膏的生產(chǎn)提供參考。

1 材料

1.1 藥材與試劑

蜂蜜(20190403AHJ)、茯苓(20190418)、芡實(shí)(20190328)、黃精(20190410)、橘皮(20190320)、人參(20190301)由成都潤馨堂藥業(yè)有限公司提供，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院炮制與制劑教研室許潤春副教授鑒定為符合《中國藥典》2015年版的標(biāo)準(zhǔn)飲片。

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，純度≥98%，批號(hào)：T20190311)，苯酚 (成都克洛瑪生物科技有限公司，純度≥98%,批號(hào):20190318)，濃硫酸(成都市科龍?jiān)噭┯邢薰?，分析純，批?hào)：20180928)

1.2 儀器

20 L智能恒溫電熱套(南京文科儀器科技有限公司)、20 L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(南京文科儀器科技有限公司)、UV-2600紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司)、TDL-40B 型離心機(jī)(常州丹瑞公司)、A1104N 電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 參精膏的制備

除人參和蜂蜜外，將茯苓、芡實(shí)、黃精、橘皮藥材各20 g，加入純凈水浸泡透心，煎煮提取2次，合并兩次濾液，過濾，并減壓濃縮至80 g浸膏，加入100 g老蜜(本方中老蜜采用傳統(tǒng)煉蜜方法判定，即蜂蜜在119～122℃煉至密度1.4，色澤呈紅棕色至棕色)，加熱攪拌收膏至密度為1.2，膏體性狀滿足“滴水成珠”“掛旗”，口感細(xì)膩，甜度適宜，無焦屑狀況。最后加入10 g人參細(xì)粉(過100目篩)，攪拌均勻即得。

2.2 浸泡時(shí)間考察與吸水率測(cè)定

稱取處方量的藥材于燒杯中，加入藥材量10倍量的水，確保所有藥材浸沒于水中，于20 min、30 min、40 min后觀察所有藥材是否浸透過芯。結(jié)果表明，浸泡20 min后，僅有茯苓未浸泡過芯。所有藥材在30 min和40 min均完全浸透。因此選擇藥材浸泡時(shí)間為30 min。進(jìn)一步計(jì)算浸泡30 min藥材的吸水率，并按照式1進(jìn)行計(jì)算，重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，藥材平均吸水率為183%。

吸水率=(實(shí)際加水量-剩余水量)/藥材干重× 100%

2.3 提取工藝考察

傳統(tǒng)膏滋提取過程中，加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)對(duì)提取效果影響較大，本實(shí)驗(yàn)選取粗多糖含量和干膏率為考察指標(biāo)，對(duì)其進(jìn)行L9(34)正交實(shí)驗(yàn)考察，以優(yōu)化提取條件。因素水平設(shè)計(jì)見表1。

表1 參精膏提取工藝正交設(shè)計(jì)表

粗多糖含量測(cè)定：合并提取液沉淀冷卻后，量取500 mL，搖勻,精密量取200 mL,加入適量乙醇,搖勻,4℃放置10 h,取出,2 800×g離心10 min,傾去上清液,沉淀再加適量乙醇反復(fù)洗滌、離心2次,最后加水溶解并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,再精密量取上述溶液10 mL至50 mL容量瓶中,加水定容搖勻,即得供試品溶液，采用苯酚-硫酸法[5]對(duì)其進(jìn)行粗多糖含量的測(cè)定，以葡萄糖計(jì)的粗多糖含量為指標(biāo)。

干膏率測(cè)定[6]：合并提取液沉淀冷卻后，分別精密量取提取液200 mL,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,水浴蒸干后置105℃烘箱中干燥3 h,置干燥器中冷卻0.5 h,迅速精密稱定質(zhì)量,記錄各樣品液的干膏質(zhì)量,計(jì)算干膏率。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2、表3所示。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果

表3 正交試驗(yàn)方差分析表

正交結(jié)果顯示A、B、C因素對(duì)粗多糖含量和干膏率影響是一致的(表2)。進(jìn)一步對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析結(jié)果表明：偏差平方和B>C>A，即提取時(shí)間影響最大。提取時(shí)間B具有顯著影響(P<0.05)，而A、C因素差異均不顯著(P>0.05)。即提取時(shí)間對(duì)粗多糖含量和出膏率的影響最大且有顯著影響，提取次數(shù)的影響次之，加水量影響最小。表4為正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的直觀分析結(jié)果，粗多糖含量和干膏率下A因素中均為A2>A3>A1,B因素中B2>B3>B1，C因素中C2>C3>C1。綜合以上分析結(jié)果，確定其提取工藝為A2B2C2。即取處方量的藥材加入10倍量水，提取2次，每次2.5 h。

2.4 人參粉碎細(xì)度及回收率考察

根據(jù)《中國藥典》2015年版，煎膏劑生產(chǎn)過程中一般應(yīng)加入細(xì)粉，但粉末過粗會(huì)影響膏滋口感，有砂礫感，粉末過細(xì)易導(dǎo)致膏滋表面起球，不易均勻分散。參考藥典粉末分等，將人參粉末分為過80目篩、100目篩、120目篩三類，分別加入成型膏劑中。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4 人參粉碎細(xì)度考察

結(jié)果表明過100目篩的人參細(xì)粉，加入成型膏劑中，藥材于膏體中均勻分散，膏滋口感平滑、無砂礫感，且參味明顯。人參為貴細(xì)藥材，有必要對(duì)其粉碎后的回收率進(jìn)行考察，便于生產(chǎn)控制。稱取100 g烘干后的人參，粉碎過100目篩，稱取過篩后的細(xì)粉，其與粉碎前重量的比值即為回收率，重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。人參粉碎過后的回收率約87.8%，因小試藥材量小，影響回收率。實(shí)際生產(chǎn)中粉末回收率會(huì)有所上升。

2.5 滅菌考察

采用加速穩(wěn)定性試驗(yàn)，考察本品是否需添加抑菌劑及終端滅菌。選取山梨酸鉀(0.05%)作為抑菌劑，分別制作添加抑菌劑樣、添加抑菌劑且終端滅菌樣及不添加抑菌劑樣品，每種4份，在溫度 (25±2) ℃,相對(duì)溫度 (40±10)% 的條件下放置6個(gè)月，分別于1、2、3、6月份取樣，并檢查相關(guān)項(xiàng)目。實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表5)表明參精膏滋無需添加滅菌劑或終端滅菌。

表5 滅菌效果情況表

3 討論

參精膏處方中的黃精、芡實(shí)、茯苓等藥材多糖類成分含量較高。多糖較易溶于水、堿、酸等極性較大的溶劑中，但多糖類成分在高溫條件下易發(fā)生變化[7-8]，因而常采用適宜溫度下的熱水浸提法提取。對(duì)于使用含糖量較高的藥材處方制備而成的膏滋，應(yīng)在提取工藝中重點(diǎn)考察溫度對(duì)于粗多糖含量的影響，盡可能在較低溫度下最大程度地提取藥物中的多糖類成分，充分保留藥物活性并發(fā)揮藥效。傳統(tǒng)膏滋制備過程中常采用煎煮法提取，不利于保留藥材中多糖類成分。

膏滋經(jīng)高度濃縮再經(jīng)冷卻變?yōu)檫^飽和狀態(tài)后，砂糖分子在濃度足夠時(shí)，分子碰撞在一起形成游離能量減小，這些狀況導(dǎo)致最終形成晶核。而晶核是引起返砂結(jié)晶最重要的起因。然而，在煉蜜過程中，在高溫和低pH值條件下，糖分子會(huì)產(chǎn)生轉(zhuǎn)化作用，并且果糖會(huì)產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)2～4個(gè)果糖分子的聚合，這些轉(zhuǎn)化糖及果糖聚合分子抑制了晶核的形成[9]。在煉蜜的過程中，需要盡可能地除去蜂蜜中的雜質(zhì)并降低其含水量。因?yàn)楦嘧汤鋮s后變?yōu)楦唣ざ惹闆r下，體系中的水分子會(huì)逐漸在糖體表面蓄積，溶解糖類分子，最終產(chǎn)生發(fā)黏或者返砂現(xiàn)象。另外，在儲(chǔ)存的過程中需要注意溫度的控制，若膏滋儲(chǔ)存過程中溫度過高，導(dǎo)致膏滋黏度降低，內(nèi)部分子移動(dòng)性增加，會(huì)加速晶核聚集生長，出現(xiàn)返砂[9]。

本實(shí)驗(yàn)采用加速穩(wěn)定性試驗(yàn)考察了參精膏在無需添加抑菌劑及終端滅菌的情況下，微生物限度符合《中國藥典》2015年版的微生物限度檢查要求。煎膏劑在提取、濃縮和收膏過程中，經(jīng)高溫滅菌，使微生物限度處于安全限度以下。而參精膏中浸膏量與輔料的比例為1∶1.5，制得的膏滋含糖量很高。由于含糖量高的膏滋具有高滲透、低水分等特點(diǎn)；加之未加工的蜂蜜pH值在3.2～4.5之間[10]，而蜂蜜在140 ℃以下加熱條件下隨著加熱溫度的升高pH值呈線性下降[11]，足以抑制膏滋體系中的微生物生長，使得參精膏具備了良好的抑菌及防腐能力。在保證盛裝膏滋的容器經(jīng)消毒、干燥后，待膏滋充分冷卻后加蓋[12]。在不加入抑菌劑和終端滅菌的情況下，可以在保質(zhì)期內(nèi)保證產(chǎn)品的微生物限度符合藥典規(guī)定。

本文圍繞參精膏的制劑方法與工藝條件，開展了提取工藝研究、濃縮收膏工藝研究以及滅菌考察試驗(yàn)研究，并經(jīng)小試放大試驗(yàn)驗(yàn)證了制劑工藝的科學(xué)性與合理性。本文優(yōu)選的制劑方法穩(wěn)定可行，為參精膏制備工藝的確定及生產(chǎn)條件的控制提供了科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。