邢 磊，焦穎華

急性冠脈綜合征是一種以冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂繼而引起完全性或非完全性血栓為特點(diǎn)的綜合征，包括不穩(wěn)定型心絞痛、急性ST段抬高型心肌梗死、急性非ST段抬高型心肌梗死，常見于老年人，危險(xiǎn)因素包括年齡、血脂、血壓、吸煙等，以胸痛為主要臨床表現(xiàn)，其中冠狀動(dòng)脈造影為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，主要治療方法包括經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入(percutaneous coronary intervention，PCI)、溶栓等[1]。相關(guān)研究表明，急性冠脈綜合征病人死亡率高，發(fā)病年齡趨于年輕化，因此，早期診斷急性冠脈綜合征具有重要的臨床意義[2]。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，分子診斷技術(shù)在臨床中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。miR-204是miRNA家族中的一員，有研究顯示，miR-204通過(guò)調(diào)控細(xì)胞凋亡等機(jī)制發(fā)揮保護(hù)心肌的作用[3]，避免心肌細(xì)胞損傷[4]。另有研究表明，miR-9與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生密切相關(guān)[5]。但miR-204和miR-9與急性冠脈綜合征的發(fā)生發(fā)展是否相關(guān)，尚缺乏充分證據(jù)。本研究通過(guò)測(cè)定miR-204與miR-9相對(duì)表達(dá)量，探討miR-204和miR-9在急性冠脈綜合征病人血清的表達(dá)及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月—2018年12月因胸痛于我院心內(nèi)科就診的急性冠脈綜合征病人63例作為觀察組，年齡40～65歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：于心內(nèi)科行冠狀動(dòng)脈造影明確診斷為急性冠脈綜合征；向病人說(shuō)明研究目的及相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)后，簽署知情同意書，本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有肝腎功能障礙、惡性腫瘤、凝血功能障礙、感染性疾病、免疫系統(tǒng)疾病等；先天性心血管系統(tǒng)疾病、心源性休克、嚴(yán)重性心力衰竭等；血壓≥180/110 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，未按時(shí)服用降壓藥。同時(shí)選取同期于我院體檢的70名健康者作為對(duì)照組，年齡和性別與觀察組匹配。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 抽取所有研究對(duì)象空腹靜脈血10 mL，采集完畢后將標(biāo)本送至實(shí)驗(yàn)室，三酰甘油L-20型高速離心機(jī)進(jìn)行離心，以10 000 r/min，離心結(jié)束后取上清液于低溫下保存，溫度-80～-70 ℃。

1.2.2 miR-204、miR-9相對(duì)表達(dá)量測(cè)定 采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)測(cè)定所有研究對(duì)象miR-204與miR-9相對(duì)表達(dá)量，具體操作：提取5 μL的RNA、1 μL反轉(zhuǎn)錄酶及2 μL引物，miR-204與miR-9的TaqMan引物及TaqMan反轉(zhuǎn)錄酶均由康為世紀(jì)公司生產(chǎn)，將混合好的反應(yīng)體系置于美國(guó)ABI公司生產(chǎn)的9700 PCR 擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件：16 ℃15 min，42 ℃ 10 min，85 ℃ 3 min，再提取2.5 μL反應(yīng)產(chǎn)物與引物混合，通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，記錄miR-204和miR-9相對(duì)表達(dá)量[6]。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄并比較兩組研究對(duì)象臨床資料，包括年齡、性別、是否吸煙、有無(wú)高血壓、收縮壓、舒張壓、總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、空腹血糖；測(cè)定兩組研究對(duì)象血清miR-204和miR-9相對(duì)表達(dá)量，并分析觀察組血清miR-204和miR-9相關(guān)性及診斷急性冠脈綜合征的臨床價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；采用Pearson方法分析相關(guān)性，采用受試者工作特征曲線(ROC)分析檢驗(yàn)診斷價(jià)值。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床資料比較 觀察組總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；觀察組高密度脂蛋白膽固醇低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。詳見表1。

表1 兩組臨床資料比較

2.2 兩組血清miR-204和miR-9相對(duì)表達(dá)量比較 觀察組血清miR-204和miR-9相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。詳見表2。

表2 兩組血清miR-204和miR-9相對(duì)表達(dá)量比較(x±s)

2.3 急性冠脈綜合征病人血清miR-204與miR-9的相關(guān)性分析 結(jié)果顯示：急性冠脈綜合征病人血清miR-204與miR-9呈正相關(guān)(r=0.483，P<0.05)。詳見圖1。

圖1 急性冠脈綜合征病人血清miR-204與miR-9相關(guān)性分析的散點(diǎn)圖

2.4 miR-204和miR-9預(yù)測(cè)急性冠脈綜合征的ROC曲線 miR-204的ROC曲線下面積(AUC)為0.749，取最佳臨界值時(shí)特異度為65.7%，靈敏度為74.6%；miR-9的AUC為0.751，取最佳臨界值時(shí)特異度為60.0%，靈敏度為82.5%，二者對(duì)急性冠脈綜合征具有一定的診斷價(jià)值。二者聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.818，取最佳臨界值時(shí)特異度為69.6%，靈敏度為90.5%，聯(lián)合預(yù)測(cè)急性冠脈綜合征的臨床價(jià)值、特異度及靈敏度均優(yōu)于單一指標(biāo)檢測(cè)。詳見圖2、表3、表4。

圖2 miR-204和miR-9預(yù)測(cè)急性冠脈綜合征的ROC曲線圖

表3 miR-204、miR-9和聯(lián)合檢測(cè)的臨床價(jià)值

表4 miR-204、miR-9和聯(lián)合檢測(cè)的特異度和靈敏度

3 討 論

急性冠脈綜合征是一種心內(nèi)科常見疾病，起病急，常威脅病人生命，臨床主要的治療方法為手術(shù)，通過(guò)改善心肌缺血狀態(tài)從而緩解病情[7-8]。因此，急性冠脈綜合征的早期診治尤為重要。miRNA是真核生物體內(nèi)不編碼的短序列RNA，性質(zhì)穩(wěn)定，對(duì)溫度、pH等環(huán)境改變不敏感[9-10]。miRNA家族種類豐富，對(duì)疾病發(fā)生發(fā)展具有重要作用，同時(shí)對(duì)疾病診斷具有臨床意義[11]。有研究表明，miRNA參與心肌細(xì)胞凋亡與重構(gòu)的過(guò)程，而miR-204和miR-9是miRNA中兩種重要的成員[12]。相關(guān)研究表明，miR-204通過(guò)調(diào)控心肌細(xì)胞自噬功能，參與心肌細(xì)胞缺氧后保護(hù)機(jī)制，避免心肌細(xì)胞受到損傷，而miR-9與心血管系統(tǒng)功能密切相關(guān)[13-14]。有研究表明，miR-9可抑制脂肪酰輔酶A表達(dá)，從而參與調(diào)節(jié)膽固醇，而膽固醇是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的重要危險(xiǎn)因素；miR-9通過(guò)激活磷酸腺苷蛋白激酶途徑促進(jìn)血管生成[15-16]。因此，本研究通過(guò)測(cè)定血清miR-204和miR-9相對(duì)表達(dá)量探討miR-204和miR-9在急性冠脈綜合征病人診斷中的臨床意義。

本研究結(jié)果顯示，觀察組總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；觀察組高密度脂蛋白膽固醇低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。兩組年齡、性別、是否吸煙、有無(wú)高血壓、收縮壓、舒張壓、空腹血糖比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。觀察組血清miR-204和miR-9相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。miR-204和miR-9相對(duì)表達(dá)量降低，減弱了心肌保護(hù)能力，血管生成能力降低，心肌易受到損傷，從而引起急性冠脈綜合征[17-18]。急性冠脈綜合征病人血清miR-204與miR-9呈正相關(guān)(r=0.483，P<0.05)；急性冠脈綜合征病人miR-204和miR-9相對(duì)表達(dá)量均降低，且二者呈正相關(guān)，表明二者同時(shí)作用于急性冠脈綜合征的發(fā)生[19]。miR-204的AUC為0.749，取最佳臨界值時(shí)特異度為65.7%，靈敏度為74.6%；miR-9的AUC為0.751，取最佳臨界值時(shí)特異度為60.0%，靈敏度為82.5%，二者預(yù)測(cè)急性冠脈綜合征具有一定的診斷價(jià)值；二者聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.818，取最佳臨界值時(shí)特異度為69.6%，靈敏度為90.5%，聯(lián)合預(yù)測(cè)急性冠脈綜合征的臨床價(jià)值、特異度及靈敏度均優(yōu)于單一項(xiàng)目檢測(cè)。臨床早期測(cè)定血清miR-204和miR-9相對(duì)表達(dá)量，可預(yù)測(cè)急性冠脈綜合征發(fā)生，進(jìn)行早期治療，降低病死率[20]。

綜上所述，通過(guò)測(cè)定病人血清miR-204和miR-9的相對(duì)表達(dá)量，從而早期診斷急性冠脈綜合征，對(duì)急性冠脈綜合征的診治具有重要意義，后期研究進(jìn)一步探討其在急性冠脈綜合征的診斷價(jià)值，具有較好的應(yīng)用前景。