曹曉莉，胡 毅，胡亞軍，陳開健

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南省特色水產(chǎn)資源利用工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙 410128)

蛋白質(zhì)是決定魚類生長速度的關(guān)鍵因素，也是在飼料成本中占比最大的部分，尤其肉食性魚類對蛋白質(zhì)的需求相對較高[1]。雞肉粉是由產(chǎn)蛋下架雞及白條雞分割出胸肉以后的剩余部分經(jīng)加工而成的，其具有供應(yīng)穩(wěn)定，價(jià)格低廉，不含抗?fàn)I養(yǎng)因子，粗蛋白(65%～73%)和粗脂肪(9.0%～10.2%)含量略高于魚粉，氨基酸平衡較好，生物轉(zhuǎn)化率高等優(yōu)點(diǎn)[2]，是水產(chǎn)動(dòng)物飼料中的優(yōu)質(zhì)蛋白源。目前，由于原料以及加工工藝的不同，一般將雞肉粉分為寵物級雞肉粉和飼料級雞肉粉[3]。有研究表明，雞肉粉可適量替代卵形鯧鲹(Trachinotusovatus)[4]、黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)幼魚[5]、大菱鲆(Scophthalmusmaximus)[6]、軍曹魚(Rachycentroncanadum)[7-8]、凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)[9]、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[10]等飼料中的魚粉而不影響生長性能和飼料的利用效果，最佳替代比例分別為20%、20.84%、20%、60%、50%～100%、59%。

黃鱔(Monopterusalbus)為雜食偏肉食性魚類，蛋白質(zhì)需求量約為40%～45%，是我國名特優(yōu)水產(chǎn)養(yǎng)殖品種之一，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值，深受消費(fèi)者的喜愛[11]。目前，針對黃鱔飼料中魚粉替代蛋白源的研究主要集中在不同大豆種類[12]、蠶蛹[13]和肉骨粉[14]等方面，關(guān)于飼料級雞肉粉的研究較少。筆者以黃鱔為試驗(yàn)對象，通過試驗(yàn)以飼料級雞肉粉替代不同比例魚粉對黃鱔生長、腸道消化酶和血清生理生化指標(biāo)的影響，探索飼料級雞肉粉替代魚粉的最佳比例，為飼料級雞肉粉在黃鱔飼料中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

依據(jù)黃鱔商品飼料組成，配制基礎(chǔ)飼料，以飼料級雞肉粉(由美國動(dòng)物蛋白及油脂提煉協(xié)會提供)分別替代黃鱔飼料中0、15%、30%、45%、60%的魚粉，設(shè)置成魚粉組(對照組)、15%替代組、30%替代組、45%替代組和60%替代組，共5組等氮等脂的試驗(yàn)飼料，魚粉和雞肉粉營養(yǎng)成分見表1，試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平見表2。先將飼料原料粉碎過80目篩，之后準(zhǔn)確稱取各飼料原料，并從小到大依次均勻混合，最終將飼料自然風(fēng)干至水分含量低于10%，-20 ℃保存?zhèn)溆?，在投喂前?0%的水調(diào)成面團(tuán)狀。

表1 魚粉和飼料級雞肉粉營養(yǎng)成分 %Tab.1 Nutritional composition of fish meal (FM) and feed grade poultry by-product meal (F-PBM)

表2 飼料組成及營養(yǎng)成分 %Tab.2 Ingredient and proximate nutritional composition of the experimental diets

1.2 養(yǎng)殖管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在湖南常德市西湖管理區(qū)養(yǎng)殖基地進(jìn)行。試驗(yàn)所用網(wǎng)箱為1.5 m×2.0 m×1.5 m的無結(jié)節(jié)聚乙烯網(wǎng)箱，網(wǎng)箱內(nèi)水花生(Alternantheraphiloxeroides)覆蓋水面90%以上。在養(yǎng)殖試驗(yàn)正式開始前先進(jìn)行馴化，首次少量投喂質(zhì)量比為1∶1的蚯蚓和鮮魚漿，依照攝食情況逐漸增大投喂量和鮮魚漿的投喂比例，直至黃鱔完全攝食鮮魚漿后開始投喂質(zhì)量比為4∶1的鮮魚漿和試驗(yàn)飼料的混合物，并依攝食情況調(diào)整投喂比例，至黃鱔完全攝食試驗(yàn)飼料。馴化結(jié)束后，禁食24 h，挑選體質(zhì)量為(26.67±0.05) g的健康野生黃鱔，隨機(jī)分為5個(gè)處理組，每組3個(gè)平行，每個(gè)網(wǎng)箱放置60尾黃鱔。試驗(yàn)期間，每日投喂1次(17:30—18:30)，每周調(diào)整1次投喂量(黃鱔體質(zhì)量的3%～5%)，養(yǎng)殖試驗(yàn)周期為56 d。

1.3 樣品采集與指標(biāo)測定

1.3.1 生長性能指標(biāo)

養(yǎng)殖試驗(yàn)開始時(shí)和結(jié)束后稱量每個(gè)網(wǎng)箱黃鱔總質(zhì)量，并記錄總尾數(shù)，再從每個(gè)網(wǎng)箱中隨機(jī)選取5尾黃鱔，測定體長、體質(zhì)量以及內(nèi)臟和肝臟質(zhì)量，用于計(jì)算飼料系數(shù)(RFC)、成活率(RS)、質(zhì)量增加率(wWGR)、肝體比(wHSI)、臟體比(wVSI)和肥滿度(CF)：

wWGR= (mt-m0)/m0×100%

RS=Nt/N0×100%

RFC=mF/(mt-m0)

wHIS=mh/mk×100%

wVSI=mv/mk×100%

CF=100mk/L3

式中，mt為末均質(zhì)量(g)；m0為初均質(zhì)量(g)；Nt為終末尾數(shù)；N0為初始尾數(shù)；mF為飼料攝入量(g)；mh為肝臟質(zhì)重(g)；mk為體質(zhì)量(g)；mv為內(nèi)臟質(zhì)量(g)；L為體長(cm)。

1.3.2 全魚體成分

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后禁食24 h，每個(gè)網(wǎng)箱中隨機(jī)選取5尾黃鱔置于-20 ℃保存，用于全魚體成分分析。水分含量采用105 ℃烘箱干燥恒定質(zhì)量法測定；粗蛋白含量采用凱氏定氮法測定；粗脂肪采用索氏抽提法測定，提取試劑為乙醚；粗灰分采用550 ℃灼燒法測定。

1.3.3 腸道消化酶活性

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后禁食24 h，每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)取5尾黃鱔，解剖取整個(gè)腸道，去除內(nèi)容物，并用冰生理鹽水清洗腸道，濾紙吸干，置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩z測前將腸道剪碎，準(zhǔn)確稱量質(zhì)量并于冰水浴條件下勻漿，4 ℃，3000 r/min離心10 min，取上清液，依據(jù)南京建成生物工程研究所試劑盒操作要求測定腸道淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性。淀粉酶活性單位定義為：組織中每毫克蛋白在37 ℃與底物作用30 min，水解10 mg淀粉定義為1個(gè)酶活性單位(U)；胰蛋白酶活性單位定義為：在pH 8.0，37 ℃條件下，每毫克蛋白中含有的胰蛋白酶每分鐘使吸光度變化0.003即為1個(gè)酶活性單位(U)；脂肪酶活性單位定義為：每毫克蛋白質(zhì)在37 ℃條件下，每分鐘水解甘油三酯生成1 μmol脂肪酸定義為1個(gè)酶活性單位(U)。

1.3.4 血清生化指標(biāo)

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后禁食24 h，每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)取5尾黃鱔，用1 mL注射器在尾靜脈處采血，置于2 mL無菌離心管中，4 ℃靜置過夜后，3500 r/min離心10 min，取上清液分裝于0.5 mL離心管中，于-80 ℃保存?zhèn)溆?。葡萄糖、白蛋白、尿素氮、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定。補(bǔ)體3及補(bǔ)體4采用浙江伊利康生物技術(shù)有限公司試劑盒測定。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差統(tǒng)計(jì)分析，若組間差異顯著水平P<0.05，則進(jìn)行Duncan氏多重比較顯著性分析。

2 結(jié) 果

2.1 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔生長性能的影響

各組間黃鱔成活率無顯著性差異(P>0.05)。隨著雞肉粉替代比例的升高，飼料系數(shù)呈上升趨勢且均無顯著性差異(P>0.05)，質(zhì)量增加率呈下降趨勢，60%替代組的質(zhì)量增加率最低(P<0.05)(表3)。

表3 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔生長性能的影響Tab.3 Effects of FM replacement by F-PBM on growth performance of rice field eel M.albus

2.2 雞肉粉替代魚粉對黃鱔體指標(biāo)的影響

相較于魚粉組，15%替代組和30%替代組的肝體比與其相近，而45%替代組較低，60%替代組較高，但均無顯著性差異(P>0.05)，各組間的臟體比和肥滿度也無顯著性差異(P>0.05)(表4)。

表4 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔體指標(biāo)的影響Tab.4 Effects of FM replacement by F-PBM on body indices of rice field eel M.albus

2.3 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔體成分的影響

飼料級雞肉粉替代不同比例魚粉對黃鱔全魚水分、粗蛋白和粗灰分含量均無顯著性影響(P>0.05)。當(dāng)替代比例為45%和60%時(shí)，黃鱔全魚粗脂肪含量顯著高于魚粉組 (P<0.05)(表5)。

表5 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔全魚體成分的影響 %Tab.5 Effects of FM replacement by F-PBM on body composition of rice field eel M.albus

2.4 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔腸道消化酶活力的影響

與魚粉組相比，腸道淀粉酶活力和胰蛋白酶活力無顯著性差異(P>0.05)。30%替代組和60%替代組脂肪酶活力顯著低于魚粉組和45%替代組(P<0.05)，15%替代組和45%替代組與魚粉組無顯著性差異(P>0.05)(表6)。

表6 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔腸道消化酶活性的影響Tab.6 Effects of FM replacement by F-PBM on digestive enzyme activities in intestine of rice field eel M.albus

2.5 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔血清生化指標(biāo)的影響

隨著替代比例升高，血清甘油三酯含量呈上升趨勢，且替代比例為45%和60%時(shí)顯著高于魚粉組(P<0.05)。30%替代組和45%替代組的低密度脂蛋白顯著高于魚粉組(P<0.05)。15%替代組、30%替代組谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性和60%替代組的谷草轉(zhuǎn)氨酶活性顯著高于魚粉組(P<0.05)。當(dāng)替代比例超過30%，血清補(bǔ)體3與補(bǔ)體4含量呈上升趨勢且顯著高于魚粉組(P<0.05)。各組白蛋白含量無顯著性差異(P>0.05)(表7)。

表7 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔血清生化指標(biāo)的影響Tab.7 Effects of FM replacement by F- PBM on serum biochemical indices of rice field eel M.albus

3 討 論

3.1 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔生長及消化酶活性的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著雞肉粉替代魚粉比例升高，黃鱔生長性能呈下降趨勢。與魚粉組相比，各試驗(yàn)組黃鱔全魚水分、粗蛋白、粗灰分、肝體比、臟體比和肥滿度均無顯著性差異，45%替代組和60%替代組的全魚粗脂肪顯著高于魚粉組，表明高比例飼料級雞肉粉替代魚粉會降低黃鱔的生長性能，影響魚體脂肪沉積，這與在大菱鲆[6]、凡納濱對蝦[9]、草魚[15]、黃顙魚[16]中的研究結(jié)果相似。飼料級雞肉粉替代魚粉限制魚類生長的原因可能是雞肉粉中賴氨酸和蛋氨酸含量較魚粉低，而賴氨酸和蛋氨酸對魚類生長、發(fā)育及代謝均有重要的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，飼料中缺乏賴氨酸會造成負(fù)氮作用，降低蛋白質(zhì)利用率，同樣蛋氨酸參與眾多機(jī)體代謝過程，也會影響魚類生長[17-18]。有研究證實(shí)，在雞肉粉完全替代魚粉的基礎(chǔ)上，添加適量必需氨基酸可提高北美鯧鲹(Trachinotuscarolinus)的生長性能[19]；其次，在養(yǎng)殖試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，高替代比例組的攝食積極性降低，可能是由于黃鱔主要靠嗅覺覓食[11]，雞肉粉的特殊氣味影響黃鱔的攝食積極性和攝食率，從而降低生長性能；另一方面，消化酶是機(jī)體內(nèi)具有催化作用的活性物質(zhì)，消化酶活性的增強(qiáng)可促進(jìn)機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。本試驗(yàn)中，45%替代組的脂肪酶活性、淀粉酶活性和胰蛋白酶活性均最高，其他試驗(yàn)組的脂肪酶活性均顯著低于魚粉組，表明雞肉粉適量替代魚粉可提高黃鱔對脂肪、淀粉物質(zhì)和蛋白質(zhì)的消化，進(jìn)一步影響黃鱔的生長性能。

3.2 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔血清生化指標(biāo)的影響

總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白均是反映機(jī)體脂肪代謝的重要指標(biāo)，其中甘油三酯是魚類脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)主要成分[20-21]。高密度脂蛋白主要由肝臟合成，通過血液循環(huán)運(yùn)載外周組織的膽固醇至肝臟，膽固醇在肝臟中被代謝清除，低密度脂蛋白則與之相反，被稱為“壞的膽固醇”[22]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著替代比例升高，血清甘油三酯含量呈上升趨勢，且替代比例超過45%時(shí)，甘油三酯含量顯著高于魚粉組，這與脂肪酶活性結(jié)果相吻合，表明適量雞肉粉可促進(jìn)機(jī)體對脂肪的消化，但30%替代組和45%替代組的低密度脂蛋白均顯著上升，由此可知，雞肉粉替代魚粉會一定程度阻礙機(jī)體對脂肪的吸收利用。尿素是蛋白質(zhì)代謝主要終產(chǎn)物，血液中尿素氮來源于肝臟，且通過腎臟隨尿液排出體外。白蛋白是血清中主要蛋白質(zhì)成分，其主要功能是承載營養(yǎng)物質(zhì)[23]。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組白蛋白含量均低于魚粉組，表明飼料級雞肉粉替代魚粉不利于蛋白質(zhì)的合成與沉積，30%替代組和45%替代組的蛋白質(zhì)分解代謝較強(qiáng)，60%替代組的蛋白質(zhì)代謝水平低于魚粉組。

血清谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶是氨基酸代謝的兩個(gè)關(guān)鍵酶，常被用來反映氨基酸代謝的程度和指示肝臟功能狀況，其中谷丙轉(zhuǎn)氨酶是肝臟發(fā)生急性損傷后極為敏感的指標(biāo)，當(dāng)肝細(xì)胞受到損傷時(shí)，細(xì)胞膜通透性增大，大量谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶進(jìn)入血液[24]。本試驗(yàn)中，各替代組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性均高于魚粉組，且15%替代組和30%替代組顯著高于魚粉組，但不能僅憑谷草轉(zhuǎn)氨酶的水平判斷是否患病和疾病的嚴(yán)重程度[25]。結(jié)合60%替代組的谷草轉(zhuǎn)氨酶顯著升高的檢測結(jié)果可知，60%替代組黃鱔肝臟可能有一定的損傷，而低替代組肝臟受損較輕或無損傷。補(bǔ)體是魚類抵抗微生物感染的重要成分，可介導(dǎo)免疫病理的損傷反應(yīng)，是具有重要生物學(xué)作用的效應(yīng)系統(tǒng)和效應(yīng)放大系統(tǒng)[26]。本試驗(yàn)中，當(dāng)替代比例超過30%，血清補(bǔ)體3與補(bǔ)體4含量均顯著高于魚粉組，表明機(jī)體可能存在一定的損傷反應(yīng)，從而刺激了黃鱔的免疫系統(tǒng)，結(jié)合谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的變化趨勢可知，當(dāng)替代比例超過30%時(shí)黃鱔肝臟受到一定損傷，其對肝臟的影響機(jī)制有待進(jìn)一步探究。

4 結(jié) 論

綜上所述，在本試驗(yàn)條件下，飼料級雞肉粉可替代飼料中30%的魚粉而不影響黃鱔的生長和生理功能。