童星

關(guān)鍵詞：曬后修復(fù);玫瑰茄花;金花葵

紫外線屬于太陽光中的不可見光，根據(jù)波長分為UVA、UVB、UVC、UVD，其中對皮膚有危害的主要是UVA和UVB。當(dāng)人體皮膚受到超過耐受量的UVA和UVB照射后，會(huì)促使細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)，導(dǎo)致真皮毛細(xì)血管擴(kuò)張充血、皮下組織水腫并激發(fā)炎癥，出現(xiàn)刺痛、紅斑、脫屑等不適癥狀[1]。在陽光的強(qiáng)烈照射下，即使做了防曬措施也無法完全避免紫外線的傷害，所以，曬后對皮膚進(jìn)行修復(fù)尤為重要。

玫瑰茄花又名洛神花，具有抗氧化、抗腫瘤、降血脂、降血壓等生物活性。黃瓊等[2]研究發(fā)現(xiàn)，玫瑰茄多糖具有較好的還原能力，能夠有效清除·OH、O₂^-·和DPPH自由基。金花葵是秋葵屬草本植物，具有抗氧化、鎮(zhèn)痛消炎、降血脂、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用。研究發(fā)現(xiàn)，其富含的黃酮類化合物具有較強(qiáng)的抗氧化活性和良好的抗炎作用，對酪氨酸酶活性也有一定的抑制作用[3]。本研究以玫瑰茄花提取物、金花葵提取物為主要修復(fù)成分，研制了一種曬后修復(fù)組合物，并對所研制樣品的曬后修復(fù)效果進(jìn)行了測試。

1 實(shí)驗(yàn)試劑與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)試劑：無水乙醇、鄰二氮菲、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、硫酸亞鐵、30%過氧化氫（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），DPPH（優(yōu)級純，Sigma），2，4-二硝基氯苯（99%，Aldrich），組氨酸ELISA試劑盒（上海一研生物科技有限公司）。

設(shè)備：電子天平（上海天美天平儀器有限公司），水浴恒溫振蕩器（常州市億能實(shí)驗(yàn)儀器廠），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），數(shù)控超聲機(jī)（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司），實(shí)驗(yàn)專用微波爐（南京杰全微波設(shè)備有限公司），紫外分光光度計(jì)（上海儀電分析儀器有限公司），真空冷凍干燥器（上海葉拓儀器儀表有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 玫瑰茄花提取物的制備

玫瑰茄花自然干燥，碾磨成粉，加入75%乙醇，使玫瑰茄花粉和乙醇的質(zhì)量比為1∶50，300 W微波處理5 min，再用500 W超聲提取15 min，過濾收集提取液，真空冷凍，干燥過夜。

2.2 金花葵提取物的制備

金花葵自然干燥，碾磨成粉，加入水，使金花葵粉和水的質(zhì)量比為1∶20，加熱回流提取1.5 h后，再加入5倍質(zhì)量的水，加熱回流提取1.0 h，過濾，合并收集兩次提取液，真空冷凍，干燥過夜。

2.3 曬后修復(fù)組合物的制備

按表1配制組合物，以5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）組合物的水溶液作為待測樣品。

2.4 曬后修復(fù)組合物自由基清除效果測試

2.4.1 羥自由基清除實(shí)驗(yàn)

在具塞試管中加入0.5 mL、0.75 mmol/L的鄰二氮菲無水乙醇溶液，分別加入2.0 mL、0.20 mol/L的磷酸鹽緩沖液（pH=7.4）、1.0 mL待測樣品，充分混勻后，加入0.5 mL、0.75 mmol/L的FeSO₄·7H₂O溶液，再次混勻后加入0.5 mL、0.01%（體積分?jǐn)?shù)）的H₂O₂，37 ℃水浴1.0 h，測定536 nm處的吸光度值，計(jì)算羥自由基清除率。

式中：A_x為待測樣品吸光度值，Ab為以蒸餾水替代H₂O₂的損傷組吸光度值，A_n為以蒸餾水為空白組的吸光度值。

2.4.2 DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)

在比色皿中加入3.0 mL、0.20 mmol/L的DPPH無水乙醇溶液，再加入1.0 mL待測樣品混勻，室溫避光反應(yīng)30 min，測定其在517 nm處的吸光度值，記為A_x;以3.0 mL無水乙醇和1.0 mL待測樣品作為空白對照，測定吸光度值，記為A_b;以3.0 mL DPPH無水乙醇溶液和1.0 mL無水乙醇溶液作為對照組，測定吸光度值，記為A_n，按公式計(jì)算DPPH自由基清除率。

2.5 曬后修復(fù)效果測試

選取300～350 g的SD大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為空白組、模型組、實(shí)驗(yàn)組，每組20只。實(shí)驗(yàn)前24.0 h，將大鼠背部去毛，面積約為3.0 cm×3.0 cm，除空白組外，其余各組用2，4-二硝基氯苯在大鼠背部皮膚造模，并用紫外線照射12.0 h，在造模成功后（皮膚出現(xiàn)干燥、脫屑、腫脹、紅斑等癥狀）的0、8 h，實(shí)驗(yàn)組取按配方1～8制備的待測樣品0.5 mL，涂抹大鼠背部的脫毛區(qū)，涂抹面積約2.5 cm×2.5 cm，空白組、模型組用去離子水涂抹，連續(xù)14天每天給藥一次，于第15天觀察，按表2的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)記錄，并檢測各組的血清組氨酸（HIS）質(zhì)量濃度。

2.6 多次皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)

選取2.5～3.0 kg的健康兔子，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前將兔子背部脊柱兩側(cè)被毛剪掉，去毛面積為3.0 cm×3.0 cm，涂抹面積為2.5 cm×2.5 cm。取按配方1～8制備的樣品約0.5 mL，涂抹在兔子一側(cè)皮膚上，另一側(cè)以去離子水作為對照，連續(xù)14天每天涂抹1次。從第二天開始，每次涂抹前應(yīng)剪毛，用水清除殘留受試物，1.0 h后觀察結(jié)果，參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015年版）》進(jìn)行皮膚刺激性反應(yīng)評價(jià)[4]。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 自由基清除效果

由表3可見，按配方1～3制備的曬后修復(fù)組合物樣品均含有玫瑰茄花、金花葵提取物，對羥自由基和DPPH自由基的清除率均在80%以上;配方4和配方5所制備樣品含單一的玫瑰茄花提取物或金花葵提取物，自由基清除率都低于50%，表明玫瑰茄花、金花葵提取物具有一定的自由基清除效果，且兩者組合使用效果更佳;配方6以等量的金縷梅提取物代替了金花葵提取物，自由基清除率都低于60%，表明金花葵提取物的自由基清除效果優(yōu)于金縷梅提取物;與配方1相比，配方7、8不含酪朊酸鈉，樣品自由基清除率低于60%，表明酪朊酸鈉可以增強(qiáng)玫瑰茄花、金花葵提取物的相容性，提高組合物的自由基清除效果。

3.2 組合物曬后修復(fù)效果

由表4可見，將配方1～3制備的曬后修復(fù)組合物樣品涂抹在造模成功后0 h的受損皮膚上，可以顯著降低HIS質(zhì)量濃度，減輕炎癥反應(yīng)，改善受損皮膚的干燥、脫屑、腫脹、紅斑癥狀;配方4～8制備所得組合物樣品對炎癥和皮膚情況的改善效果明顯低于配方1～3制備所得樣品。將配方1～3制備的曬后修復(fù)組合物樣品涂抹在造模成功后8.0 h的受損皮膚上，仍然可以顯著降低HIS質(zhì)量濃度，減輕炎癥反應(yīng)，改善受損皮膚的干燥、脫屑、腫脹、紅斑癥狀;配方4～8制備所得組合物樣品對炎癥和皮膚情況的改善效果較差。

3.3 多次皮膚刺激實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表5可見，對于配方1～3制備的曬后修復(fù)組合物樣品，在觀察期內(nèi)，受試兔子皮膚未見紅斑、水腫等異常反應(yīng)，表明所制備樣品對皮膚無刺激性;對于配方4～8所制備的樣品，在涂抹1.0 h后，有輕度紅斑和水腫癥狀，24.0 h后可以消除。

4 結(jié)語

研制的曬后修復(fù)組合物具有一定的自由基清除、曬后修復(fù)效果，可以起到抗炎、消腫、清除自由基的作用，對皮膚無刺激，作為功效成分添加到曬后修復(fù)化妝品中，具有廣闊的應(yīng)用前景。