童星
關(guān)鍵詞:曬后修復;玫瑰茄花;金花葵
紫外線屬于太陽光中的不可見光,根據(jù)波長分為UVA、UVB、UVC、UVD,其中對皮膚有危害的主要是UVA和UVB。當人體皮膚受到超過耐受量的UVA和UVB照射后,會促使細胞釋放炎癥介質(zhì),導致真皮毛細血管擴張充血、皮下組織水腫并激發(fā)炎癥,出現(xiàn)刺痛、紅斑、脫屑等不適癥狀[1]。在陽光的強烈照射下,即使做了防曬措施也無法完全避免紫外線的傷害,所以,曬后對皮膚進行修復尤為重要。
玫瑰茄花又名洛神花,具有抗氧化、抗腫瘤、降血脂、降血壓等生物活性。黃瓊等[2]研究發(fā)現(xiàn),玫瑰茄多糖具有較好的還原能力,能夠有效清除·OH、O2-·和DPPH自由基。金花葵是秋葵屬草本植物,具有抗氧化、鎮(zhèn)痛消炎、降血脂、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用。研究發(fā)現(xiàn),其富含的黃酮類化合物具有較強的抗氧化活性和良好的抗炎作用,對酪氨酸酶活性也有一定的抑制作用[3]。本研究以玫瑰茄花提取物、金花葵提取物為主要修復成分,研制了一種曬后修復組合物,并對所研制樣品的曬后修復效果進行了測試。
1 實驗試劑與設備
實驗試劑:無水乙醇、鄰二氮菲、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、硫酸亞鐵、30%過氧化氫(分析純,國藥集團化學試劑有限公司),DPPH(優(yōu)級純,Sigma),2,4-二硝基氯苯(99%,Aldrich),組氨酸ELISA試劑盒(上海一研生物科技有限公司)。
設備:電子天平(上海天美天平儀器有限公司),水浴恒溫振蕩器(常州市億能實驗儀器廠),旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠),數(shù)控超聲機(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司),實驗專用微波爐(南京杰全微波設備有限公司),紫外分光光度計(上海儀電分析儀器有限公司),真空冷凍干燥器(上海葉拓儀器儀表有限公司)。
2 實驗方法
2.1 玫瑰茄花提取物的制備
玫瑰茄花自然干燥,碾磨成粉,加入75%乙醇,使玫瑰茄花粉和乙醇的質(zhì)量比為1∶50,300 W微波處理5 min,再用500 W超聲提取15 min,過濾收集提取液,真空冷凍,干燥過夜。
2.2 金花葵提取物的制備
金花葵自然干燥,碾磨成粉,加入水,使金花葵粉和水的質(zhì)量比為1∶20,加熱回流提取1.5 h后,再加入5倍質(zhì)量的水,加熱回流提取1.0 h,過濾,合并收集兩次提取液,真空冷凍,干燥過夜。
2.3 曬后修復組合物的制備
按表1配制組合物,以5%(質(zhì)量分數(shù))組合物的水溶液作為待測樣品。
2.4 曬后修復組合物自由基清除效果測試
2.4.1 羥自由基清除實驗
在具塞試管中加入0.5 mL、0.75 mmol/L的鄰二氮菲無水乙醇溶液,分別加入2.0 mL、0.20 mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH=7.4)、1.0 mL待測樣品,充分混勻后,加入0.5 mL、0.75 mmol/L的FeSO4·7H2O溶液,再次混勻后加入0.5 mL、0.01%(體積分數(shù))的H2O2,37 ℃水浴1.0 h,測定536 nm處的吸光度值,計算羥自由基清除率。
式中:Ax為待測樣品吸光度值,Ab為以蒸餾水替代H2O2的損傷組吸光度值,An為以蒸餾水為空白組的吸光度值。
2.4.2 DPPH自由基清除實驗
在比色皿中加入3.0 mL、0.20 mmol/L的DPPH無水乙醇溶液,再加入1.0 mL待測樣品混勻,室溫避光反應30 min,測定其在517 nm處的吸光度值,記為Ax;以3.0 mL無水乙醇和1.0 mL待測樣品作為空白對照,測定吸光度值,記為Ab;以3.0 mL DPPH無水乙醇溶液和1.0 mL無水乙醇溶液作為對照組,測定吸光度值,記為An,按公式計算DPPH自由基清除率。
2.5 曬后修復效果測試
選取300~350 g的SD大鼠,雌雄各半,隨機分為空白組、模型組、實驗組,每組20只。實驗前24.0 h,將大鼠背部去毛,面積約為3.0 cm×3.0 cm,除空白組外,其余各組用2,4-二硝基氯苯在大鼠背部皮膚造模,并用紫外線照射12.0 h,在造模成功后(皮膚出現(xiàn)干燥、脫屑、腫脹、紅斑等癥狀)的0、8 h,實驗組取按配方1~8制備的待測樣品0.5 mL,涂抹大鼠背部的脫毛區(qū),涂抹面積約2.5 cm×2.5 cm,空白組、模型組用去離子水涂抹,連續(xù)14天每天給藥一次,于第15天觀察,按表2的評價標準記錄,并檢測各組的血清組氨酸(HIS)質(zhì)量濃度。
2.6 多次皮膚刺激性實驗
選取2.5~3.0 kg的健康兔子,雌雄各半,實驗前將兔子背部脊柱兩側(cè)被毛剪掉,去毛面積為3.0 cm×3.0 cm,涂抹面積為2.5 cm×2.5 cm。取按配方1~8制備的樣品約0.5 mL,涂抹在兔子一側(cè)皮膚上,另一側(cè)以去離子水作為對照,連續(xù)14天每天涂抹1次。從第二天開始,每次涂抹前應剪毛,用水清除殘留受試物,1.0 h后觀察結(jié)果,參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范(2015年版)》進行皮膚刺激性反應評價[4]。
3 實驗結(jié)果
3.1 自由基清除效果
由表3可見,按配方1~3制備的曬后修復組合物樣品均含有玫瑰茄花、金花葵提取物,對羥自由基和DPPH自由基的清除率均在80%以上;配方4和配方5所制備樣品含單一的玫瑰茄花提取物或金花葵提取物,自由基清除率都低于50%,表明玫瑰茄花、金花葵提取物具有一定的自由基清除效果,且兩者組合使用效果更佳;配方6以等量的金縷梅提取物代替了金花葵提取物,自由基清除率都低于60%,表明金花葵提取物的自由基清除效果優(yōu)于金縷梅提取物;與配方1相比,配方7、8不含酪朊酸鈉,樣品自由基清除率低于60%,表明酪朊酸鈉可以增強玫瑰茄花、金花葵提取物的相容性,提高組合物的自由基清除效果。
3.2 組合物曬后修復效果
由表4可見,將配方1~3制備的曬后修復組合物樣品涂抹在造模成功后0 h的受損皮膚上,可以顯著降低HIS質(zhì)量濃度,減輕炎癥反應,改善受損皮膚的干燥、脫屑、腫脹、紅斑癥狀;配方4~8制備所得組合物樣品對炎癥和皮膚情況的改善效果明顯低于配方1~3制備所得樣品。將配方1~3制備的曬后修復組合物樣品涂抹在造模成功后8.0 h的受損皮膚上,仍然可以顯著降低HIS質(zhì)量濃度,減輕炎癥反應,改善受損皮膚的干燥、脫屑、腫脹、紅斑癥狀;配方4~8制備所得組合物樣品對炎癥和皮膚情況的改善效果較差。
3.3 多次皮膚刺激實驗結(jié)果
由表5可見,對于配方1~3制備的曬后修復組合物樣品,在觀察期內(nèi),受試兔子皮膚未見紅斑、水腫等異常反應,表明所制備樣品對皮膚無刺激性;對于配方4~8所制備的樣品,在涂抹1.0 h后,有輕度紅斑和水腫癥狀,24.0 h后可以消除。
4 結(jié)語
研制的曬后修復組合物具有一定的自由基清除、曬后修復效果,可以起到抗炎、消腫、清除自由基的作用,對皮膚無刺激,作為功效成分添加到曬后修復化妝品中,具有廣闊的應用前景。