李靜靜 穆 慶 孫貝貝

肺癌是我國(guó)發(fā)病率和死亡率均最高的惡性腫瘤之一，而該腫瘤中，非小細(xì)胞肺癌占比達(dá)到約80%，且絕多數(shù)患者發(fā)病就診時(shí)已處于中晚期，因此其生存率較[1-2]。另外，肺癌發(fā)病機(jī)制目前尚未完全清楚，這也是患者預(yù)后差、治愈率和生存率均低的原因之一。細(xì)胞周期蛋白D依賴性激酶CDK4是細(xì)胞周期從G1到S相轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，相關(guān)研究表明：多種癌癥組織中CDK4異常表達(dá)，以及迅速出現(xiàn)的該蛋白藥理抑制劑陽性臨床數(shù)據(jù)已將CDK4確認(rèn)為抗癌藥物靶標(biāo)[3-4]。keap1是抑癌基因的一種，近年來相關(guān)研究顯示：肺癌組織中keap1基因呈甲基化狀態(tài)，故其蛋白表達(dá)調(diào)控受阻，因而表達(dá)量顯著降低[5]。本研究回顧性分析非小細(xì)胞肺癌組織中CDKI(P27keap1)和CDK4的表達(dá)，并分析其與患者生存期的相關(guān)性，以期為該腫瘤患者的臨床診斷及預(yù)后評(píng)估提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年5月至2019年5月于本院進(jìn)行手術(shù)切除的83例非小細(xì)胞肺癌患者為研究對(duì)象，所有患者均經(jīng)病理學(xué)診斷確診為非小細(xì)胞肺癌，共獲取非小細(xì)胞肺癌組織及癌旁組織83例。其中，男性64例，女性19例；年齡35～76歲，平均年齡(51.06±7.22)歲，病理類型：腺癌36例，鱗癌47例；分化程度：高分化5例，中分化56例，低分化22例；TMN分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期31例，Ⅲ期30例，Ⅳ期1例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例，無轉(zhuǎn)移37例。本研究獲得醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，入選患者均已簽署知情同意書。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均經(jīng)臨床病理學(xué)確診為非小細(xì)胞肺癌；②病理分期Ⅰ～Ⅳ期；③所有患者術(shù)前均未能接受過放、化療及其他藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有主要器官具有重大疾病或嚴(yán)重并發(fā)癥的患者；②中途退出者；③手術(shù)不耐受者。

1.3 方法

免疫組化檢測(cè)P27keap1和CDK4的表達(dá)：采用免疫組化試劑盒(SP法)以及CDK4、keap1蛋白抗體購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，具體檢測(cè)流程根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行操作；陽性結(jié)果判定[4]：染色結(jié)果采用雙盲法，由本院2位病理科醫(yī)師獨(dú)立進(jìn)行評(píng)分：①染色程度積分標(biāo)準(zhǔn)：0分：無顯色；1分：淺黃色或黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。②染色比例：0分：<5%；1分：6%～25%；2分：26%～50%；3分：>75%?？偡e分結(jié)果為①×②：0分：陰性(-)；1～4分：弱陽性(+)；5～8分：中等陽性(++)；9～12分：強(qiáng)陽性(+++)。③所有患者出院后均進(jìn)行隨訪，隨訪至2020年5月31日，記錄每位患者生存期。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 keap1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

不同病理類型非小細(xì)胞肺癌患者癌組織keap1表達(dá)陽性率無顯著差異(P>0.05)，而不同分化程度、TMN分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移非小細(xì)胞肺癌患者癌組織keap1表達(dá)陽性率均存在顯著差異(P<0.05)(表1)。

表1 keap1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系/例

2.2 CDK4表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

不同病理類型非小細(xì)胞肺癌患者癌組織CDK4表達(dá)陽性率無顯著差異(P>0.05)，而不同分化程度、TMN分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移非小細(xì)胞肺癌患者癌組織CDK4表達(dá)陽性率均存在顯著差異(P<0.05)(表2)。

2.3 keap1和CDK4陽性對(duì)患者生存期的影響

與keap1陽性非小細(xì)胞癌患者相比，陰性患者生存期顯著縮短(P<0.05)，與CDK4陽性非小細(xì)胞癌患者相比，陰性患者生存期顯著延長(zhǎng)(P<0.05)(表3)。

2.4 相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示：keap1表達(dá)陽性率與非小細(xì)胞肺癌患者生存期呈顯著負(fù)相關(guān)(γ<0，P<0.05)，CDK4與非小細(xì)胞肺癌患者生存期呈顯著正相關(guān)(γ>0，P<0.05)，見表4。

表2 CDK4表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系/例

表3 keap1和CDK4陽性對(duì)患者生存期的影響

表4 蛋白陽性率與非小細(xì)胞肺癌患者生存期相關(guān)性分析

3 討論

肺癌是全球發(fā)病率及致死率均高的惡性腫瘤之一，根據(jù)其病理學(xué)類型可分為小細(xì)胞癌和非小細(xì)胞癌[6]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，非小細(xì)胞肺癌發(fā)病患者人數(shù)在肺癌中占比高達(dá)80%以上，且其存在轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)，包括腦轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，相關(guān)研究表明該腫瘤早期手術(shù)切除治愈幾率較大，可提高患者存活率，因此其早期臨床診斷及治療至關(guān)重要[7-9]。目前該治療方式以手術(shù)、化療以及藥物聯(lián)合化療等方式為主，但近年來隨著對(duì)非小細(xì)胞肺癌發(fā)病機(jī)制的不斷挖掘，分子結(jié)合病理的靶向診斷及治療已成為該腫瘤的熱點(diǎn)研究方向[10]。

Keap1是1種胞質(zhì)蛋白伴侶分子，正常條件下，可通過與NRF3結(jié)合將其與E3復(fù)合體連接而是泛素化后的NRF2被降解；而當(dāng)發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)時(shí)，其半胱氨酸殘基被氧化修飾因而與DLG基序親和力下降并奮力，抑制了MRF2的降解，從而介導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)，研究表明肺癌患者體內(nèi)的Keap1通常因發(fā)生突變的表達(dá)量下調(diào)[11-12]。本研究結(jié)果顯示：不同病理類型非小細(xì)胞肺癌患者癌組織CDKI(P27 keap1)表達(dá)陽性率無顯著差異(P>0.05)，而不同分化程度、TMN分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移非小細(xì)胞肺癌患者癌組織CDKI(P27keap1)表達(dá)陽性率均存在顯著差異，即低分化程度、高TMN分期以及發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的非小細(xì)胞肺癌患者組織中keap1的陽性率顯著降低(P<0.05)，且與keap1陽性非小細(xì)胞癌患者相比，陰性患者生存期顯著縮短(P<0.05)，另外相關(guān)性分析結(jié)果顯示：keap1表達(dá)陽性率與非小細(xì)胞肺癌患者生存期呈顯著負(fù)相關(guān)(γ<0，P<0.05)，表明隨著非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生和進(jìn)展，患者癌組織中keap1表達(dá)顯著下調(diào)，且隨著非小細(xì)胞癌進(jìn)展，其表達(dá)進(jìn)一步降低，預(yù)示的患者生存期的進(jìn)一步縮短。

CDK4是細(xì)胞周期G1期的正調(diào)控因子，相關(guān)研究顯示其在多種癌癥組織中表達(dá)水平顯著高于正常組織，其異常表達(dá)可促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展[13-14]。不同病理類型非小細(xì)胞肺癌組織CDK4表達(dá)陽性率無顯著差異(P>0.05)，而不同分化程度、TMN分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移非小細(xì)胞肺癌患者癌組織CDK4表達(dá)陽性率均存在顯著差異(P<0.05)；與CDK4陽性非小細(xì)胞癌患者相比，陰性患者生存期顯著延長(zhǎng)(P<0.05)；相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CDK4與非小細(xì)胞肺癌患者生存期呈顯著正相關(guān)(γ>0，P<0.05)。表明CDK4的表達(dá)情況與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)，其在患者癌組織中顯著上調(diào)，且隨著非小細(xì)胞癌進(jìn)展，其表達(dá)進(jìn)一步升高，預(yù)示的患者生存期的進(jìn)一步縮短。

綜上所述，非小細(xì)胞肺癌組織中CDKI(P27keap1)和CDK4的表達(dá)與該腫瘤的的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)，并進(jìn)一步影響患者生存期。